產(chan)品名(ming)稱(cheng)：CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))

CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))

細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)：CHO/dhFr-     倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian))

組(zu)織(zhi)來(lai)源：正(zheng)常卵巢

培養(yang)條件：IMDM+10% FBS+0.1mM次黃(huang)嘌呤(ling)+0.016mM胸(xiong)腺嘧(mi)啶+200nM氨甲喋(die)呤(ling)

形       態(tai)：貼壁；上(shang)皮(pi)細胞(bao)樣(yang)

背       景：該細(xi)胞(bao)為二氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)細(xi)胞(bao)。在(zai)沒有HT（次黃(huang)嘌呤(ling)-胸(xiong)腺嘧(mi)啶）時(shi)細(xi)胞(bao)會(hui)死(si)亡(wang)。細胞(bao)培液中加(jia)氨(an)甲(jia)喋(die)呤(ling)可以防止(zhi)對**低抗性的回(hui)變(bian)細(xi)胞(bao)的生(sheng)長。

CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))操(cao)作(zuo)說明(ming)：

1)對於常溫(wen)運(yun)輸的細(xi)胞(bao)，收到細(xi)胞(bao)後(hou)，檢查是(shi)否(fou)有(you)運(yun)輸問題，即(ji)細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)或管(guan)是(shi)否(fou)破損(sun)，細(xi)胞(bao)培養(yang)液是(shi)否(fou)溢(yi)出。若沒(mei)有(you)運(yun)輸問題，請(qing)75%酒精**後(hou)，保(bao)留(liu)封(feng)口膜，放(fang)入細(xi)胞(bao)培養(yang)箱中靜(jing)置(zhi)。嚴格(ge)檢查培養(yang)箱的參(can)數(shu)：溫(wen)度(du)，濕(shi)度(du)和(he)CO2濃度(du)。細(xi)胞(bao)靜(jing)置(zhi)時(shi)間壹般(ban)為6-12小時(shi)後(hou)，細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)穩(wen)定(ding)後，即(ji)可開(kai)始後(hou)續操作(zuo)。選(xuan)用(yong)正(zheng)確的細(xi)胞(bao)培養(yang)體(ti)系，CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))嚴(yan)格(ge)按(an)照說明(ming)書的培養(yang)條件進(jin)行(xing)培養(yang)。條件允許，培養(yang)的前(qian)三(san)天內做(zuo)細胞(bao)拍(pai)照(zhao)記(ji)錄，通過郵件發送(song)給(gei)我們(men)做(zuo)及時(shi)狀(zhuang)態(tai)跟(gen)蹤。

2)對於幹(gan)冰(bing)運(yun)輸的細(xi)胞(bao)，請(qing)取(qu)出(chu)冷凍管(guan)後(hou)，須立即(ji)放(fang)入37C水(shui)槽中快速解(jie)凍，輕搖冷凍管(guan)使(shi)其(qi)在(zai)1分(fen)鐘(zhong)內全部(bu)融(rong)化(hua)，並(bing)註(zhu)意水(shui)面(mian)不(bu)可超過(guo)冷凍管(guan)蓋沿(yan)，否(fou)則(ze)易(yi)發生(sheng)汙染(ran)情形。然(ran)後將其(qi)復(fu)蘇(su)培養(yang)，次日更(geng)換(huan)培養(yang)液。

CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1)細胞(bao)漂(piao)浮：培養(yang)瓶(ping)不開(kai)封，瓶(ping)口酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)後平(ping)躺(tang)放(fang)置在(zai)培養(yang)箱。次日觀察，如細胞(bao)大部(bu)分(fen)又(you)貼回(hui)瓶(ping)底，表明(ming)細胞(bao)活(huo)力(li)正(zheng)常，剩(sheng)余(yu)漂浮的細(xi)胞(bao)可以離心(xin)去掉，留(liu)10ml培養(yang)液培養(yang)觀察，細胞(bao)生(sheng)長至匯(hui)合(he)度(du)80%，進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)傳(chuan)代；如(ru)細胞(bao)還(hai)是(shi)不(bu)貼壁，將(jiang)細(xi)胞(bao)離心(xin)收集轉到(dao)新培養(yang)瓶(ping)，原培養(yang)瓶(ping)加(jia)部(bu)分(fen)培養(yang)液繼續培養(yang)，中間註(zhu)意觀察，我們的技(ji)術(shu)人(ren)員會壹直跟蹤指(zhi)導，直(zhi)到問題解(jie)決(jue)。

2)對於生(sheng)長緩慢(man)的貼壁細(xi)胞(bao)：可采用(yong)適當(dang)的提高培養(yang)基(ji)中血(xue)清(qing)濃度(du)，或(huo)隔日換(huan)液的方(fang)法(fa)來(lai)保(bao)證(zheng)細(xi)胞(bao)的狀(zhuang)態(tai)和(he)生(sheng)長速度(du)。

3)對於生(sheng)長不(bu)均的貼壁細(xi)胞(bao)：在(zai)培養(yang)過程中若出(chu)現(xian)細胞(bao)分(fen)布(bu)明(ming)顯(xian)不(bu)均時(shi)（即(ji)某(mou)壹(yi)區(qu)域(yu)細(xi)胞(bao)已重疊(die)生(sheng)長，而(er)旁(pang)邊則為壹塊空(kong)白），此(ci)時(shi)可將細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)，重(zhong)新打(da)散，貼壁，加(jia)入新培養(yang)基(ji)進(jin)行(xing)培養(yang)。 

CHO/dhFr-(倉(cang)鼠(shu)卵巢細胞(bao)(二(er)氫(qing)葉(ye)酸(suan)還(hai)原酶(mei)缺(que)陷(xian)))下面(mian)介(jie)紹幾(ji)種(zhong)細胞(bao)培養(yang)過程中常(chang)見的汙(wu)染(ran)：

壹)桿菌汙(wu)染(ran)：培養(yang)基(ji)中加(jia)入***可以減(jian)少(shao)此種(zhong)汙染(ran)，但(dan)也(ye)不是(shi)**的。

二)支(zhi)原(yuan)體(ti)汙染(ran)：傳說中的黑(hei)焦(jiao)蟲，長得(de)暴快。24小時(shi)就(jiu)滿(man)視(shi)野都是(shi)了(le)。汙(wu)染(ran)源大多(duo)數(shu)情(qing)況(kuang)下是(shi)培養(yang)用(yong)血(xue)清(qing)。

三)***汙染(ran)：似乎無處不(bu)在(zai)，而且(qie)頑固(gu)得(de)很。長(chang)得(de)暴快(12h就能(neng)在(zai)細胞(bao)上(shang)面(mian)密(mi)布)。培養(yang)液澄清(qing)。低倍顯(xian)微鏡下像(xiang)黑(hei)色的沙(sha)子鋪(pu)在(zai)細胞(bao)上(shang)，高倍鏡下呈(cheng)樹(shu)枝狀(zhuang)或葡(pu)萄狀(zhuang)。

四)黴菌汙(wu)染(ran)、比(bi)較(jiao)常(chang)見的壹(yi)種(zhong)汙染(ran)，常常(chang)來源於(yu)汙(wu)染(ran)的空(kong)氣、水(shui)和(he)器械(xie)。