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Reh(人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T))
細胞(bao)名稱(cheng):Reh 人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T)
培(pei)養(yang)條件:RPMI-1640 +10% FBS
形(xing) 態:懸(xuan)浮;**母(mu)細胞(bao)
Reh(人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T))操(cao)作(zuo)說(shuo)明:
1)對於(yu)常(chang)溫運(yun)輸的細胞,收到細(xi)胞後(hou),檢(jian)查是否有(you)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti),即細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)管(guan)是否破(po)損(sun),細胞培(pei)養(yang)液(ye)是否溢(yi)出(chu)。若(ruo)沒(mei)有(you)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti),請75%酒精(jing)**後(hou),保(bao)留封口膜,放入(ru)細胞培(pei)養(yang)箱中(zhong)靜置(zhi)。嚴(yan)格(ge)檢(jian)查培(pei)養(yang)箱的參(can)數:溫度,濕度和CO2濃度。細胞(bao)靜(jing)置(zhi)時(shi)間壹般為(wei)6-12小時(shi)後(hou),細(xi)胞狀(zhuang)態穩(wen)定(ding)後(hou),即可(ke)開(kai)始後(hou)續(xu)操(cao)作(zuo)。選用正(zheng)確的細胞培(pei)養(yang)體(ti)系(xi),Reh(人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T))嚴格(ge)按照說(shuo)明書(shu)的培(pei)養(yang)條件進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。條件允(yun)許,培(pei)養(yang)的前三天(tian)內(nei)做(zuo)細胞(bao)拍(pai)照記(ji)錄,通(tong)過(guo)郵(you)件發(fa)送給我們(men)做(zuo)及時(shi)狀(zhuang)態跟蹤(zong)。
2)對於(yu)幹冰(bing)運(yun)輸(shu)的細胞,請取(qu)出(chu)冷(leng)凍(dong)管(guan)後(hou),須立即放入(ru)37C水槽中(zhong)快速解(jie)凍(dong),輕搖(yao)冷(leng)凍(dong)管(guan)使其(qi)在(zai)1分(fen)鐘(zhong)內(nei)全部融化,並(bing)註(zhu)意(yi)水面不可(ke)超過(guo)冷(leng)凍(dong)管(guan)蓋(gai)沿(yan),否(fou)則(ze)易(yi)發(fa)生汙染情(qing)形(xing)。然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)復(fu)蘇培(pei)養(yang),次(ci)日(ri)更(geng)換培(pei)養(yang)液(ye)。
Reh(人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T))註意(yi)事項(xiang):
1)細胞(bao)漂(piao)浮:培(pei)養(yang)瓶(ping)不(bu)開(kai)封,瓶(ping)口(kou)酒精(jing)擦(ca)拭(shi)後(hou)平(ping)躺放(fang)置(zhi)在(zai)培(pei)養(yang)箱。次(ci)日(ri)觀察(cha),如(ru)細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)又(you)貼(tie)回瓶(ping)底(di),表(biao)明細(xi)胞(bao)活(huo)力正(zheng)常,剩(sheng)余(yu)漂(piao)浮的細胞可(ke)以離(li)心(xin)去(qu)掉(diao),留(liu)10ml培(pei)養(yang)液(ye)培(pei)養(yang)觀(guan)察(cha),細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)匯(hui)合(he)度80%,進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)傳代;如細胞還(hai)是不貼(tie)壁(bi),將細(xi)胞(bao)離(li)心(xin)收(shou)集轉(zhuan)到新培(pei)養(yang)瓶(ping),原(yuan)培(pei)養(yang)瓶(ping)加部分(fen)培(pei)養(yang)液(ye)繼(ji)續培(pei)養(yang),中(zhong)間註意(yi)觀察(cha),我(wo)們(men)的技(ji)術人(ren)員會(hui)壹直(zhi)跟蹤(zong)指導(dao),直(zhi)到問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。
2)對於(yu)生(sheng)長緩慢的貼(tie)壁(bi)細胞(bao):可(ke)采用(yong)適當的提高培(pei)養(yang)基中(zhong)血(xue)清濃度,或隔(ge)日(ri)換液的方法(fa)來保證細胞(bao)的狀(zhuang)態和生長速(su)度。
3)對於(yu)生(sheng)長不(bu)均的貼(tie)壁(bi)細胞(bao):在(zai)培(pei)養(yang)過(guo)程中(zhong)若出(chu)現細(xi)胞分(fen)布(bu)明(ming)顯(xian)不均時(即某壹區域細胞(bao)已重(zhong)疊(die)生長(chang),而旁邊則為(wei)壹(yi)塊(kuai)空(kong)白),此(ci)時(shi)可(ke)將細(xi)胞進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua),重(zhong)新打散,貼(tie)壁(bi),加入(ru)新培(pei)養(yang)基進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。
Reh(人(ren)急性**細(xi)胞白(bai)血(xue)病(非(fei)B非(fei)T))下面介紹(shao)幾(ji)種細(xi)胞培(pei)養(yang)過(guo)程中(zhong)常見的汙染:
壹)桿菌汙染:培(pei)養(yang)基中(zhong)加入(ru)***可(ke)以減(jian)少此種汙染,但也不(bu)是**的。
二)支原(yuan)體(ti)汙染:傳說(shuo)中(zhong)的黑(hei)焦蟲,長(chang)得(de)暴快(kuai)。24小時(shi)就(jiu)滿(man)視(shi)野(ye)都是了(le)。汙染源大多(duo)數情(qing)況(kuang)下是培(pei)養(yang)用(yong)血(xue)清。
三)***汙染:似(si)乎無處不在(zai),而且頑(wan)固得很。長(chang)得(de)暴(bao)快(kuai)(12h就(jiu)能(neng)在(zai)細胞上面密布)。培(pei)養(yang)液(ye)澄(cheng)清。低倍(bei)顯(xian)微鏡下像黑(hei)色的沙子鋪(pu)在(zai)細胞上,高倍鏡(jing)下呈樹枝(zhi)狀(zhuang)或(huo)葡(pu)萄(tao)狀(zhuang)。
四)黴菌汙染、比(bi)較常見的壹種汙染,常常來源於汙染的空(kong)氣(qi)、水和器械。



