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SK-NEP-1(人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao))
細胞(bao)名稱(cheng):SK-NEP-1 人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao)
組織(zhi)來(lai)源(yuan):腎(shen),肋膜(mo)滲出液
培(pei)養(yang)條件:McCoy’s 5A +15% FBS
形(xing) 態:半貼壁
背 景(jing):超(chao)微(wei)結構(gou)有(you)少許(xu)微(wei)絨(rong)毛,連接復合物(wu),形(xing)態完(wan)整(zheng)的(de)高(gao)爾(er)基體,內(nei)質(zhi)網(wang)多為(wei)光(guang)滑(hua)型,脂滴(di),沒(mei)有(you)病毒(du)棵粒(li)。
SK-NEP-1(人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao))操(cao)作說明:
1)對於(yu)常溫運(yun)輸(shu)的(de)細胞(bao),收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou),檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)有(you)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti),即細胞(bao)培(pei)養(yang)瓶或(huo)管是(shi)否(fou)破損,細胞(bao)培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)溢(yi)出。若(ruo)沒(mei)有(you)運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti),請(qing)75%酒(jiu)精(jing)**後(hou),保留(liu)封口(kou)膜(mo),放入(ru)細胞(bao)培(pei)養(yang)箱中(zhong)靜置。嚴格(ge)檢(jian)查(zha)培(pei)養(yang)箱的(de)參(can)數(shu):溫(wen)度,濕度和CO2濃度。細胞(bao)靜置時(shi)間壹般(ban)為(wei)6-12小(xiao)時後(hou),細胞(bao)狀態穩(wen)定後(hou),即(ji)可(ke)開始後(hou)續操(cao)作。選用(yong)正(zheng)確的(de)細胞(bao)培(pei)養(yang)體系,SK-NEP-1(人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao))嚴格(ge)按照(zhao)說(shuo)明書的(de)培(pei)養(yang)條件進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。條件允(yun)許(xu),培(pei)養(yang)的(de)前三(san)天內做細胞(bao)拍(pai)照記(ji)錄,通過郵(you)件(jian)發送給我(wo)們做及時狀態跟蹤(zong)。
2)對於(yu)幹冰運(yun)輸(shu)的(de)細胞(bao),請(qing)取出冷(leng)凍(dong)管後(hou),須(xu)立(li)即(ji)放入(ru)37C水(shui)槽(cao)中(zhong)快(kuai)速解(jie)凍(dong),輕搖冷(leng)凍(dong)管使(shi)其(qi)在(zai)1分(fen)鐘(zhong)內(nei)全部(bu)融(rong)化,並(bing)註意水面不可(ke)超過冷(leng)凍(dong)管蓋沿,否(fou)則(ze)易(yi)發生(sheng)汙染情形(xing)。然(ran)後(hou)將其(qi)復蘇培(pei)養(yang),次日(ri)更換培(pei)養(yang)液。
SK-NEP-1(人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao))註意事(shi)項(xiang):
1)細胞(bao)漂浮(fu):培(pei)養(yang)瓶不開封,瓶口酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)後(hou)平(ping)躺(tang)放置(zhi)在(zai)培(pei)養(yang)箱。次日(ri)觀(guan)察(cha),如(ru)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)又貼回瓶底,表明細胞(bao)活(huo)力正(zheng)常,剩余(yu)漂(piao)浮(fu)的(de)細胞(bao)可(ke)以離心(xin)去(qu)掉,留(liu)10ml培(pei)養(yang)液培(pei)養(yang)觀(guan)察(cha),細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)匯合度80%,進(jin)行(xing)消(xiao)化傳(chuan)代(dai);如細胞(bao)還(hai)是(shi)不貼(tie)壁,將細胞(bao)離心(xin)收(shou)集(ji)轉(zhuan)到(dao)新(xin)培(pei)養(yang)瓶,原培(pei)養(yang)瓶加(jia)部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)液繼續培(pei)養(yang),中(zhong)間註意觀(guan)察(cha),我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)會壹直跟蹤(zong)指導(dao),直到(dao)問(wen)題(ti)解決(jue)。
2)對於(yu)生(sheng)長緩(huan)慢的(de)貼(tie)壁細胞(bao):可(ke)采(cai)用(yong)適當(dang)的(de)提高(gao)培(pei)養(yang)基中(zhong)血清(qing)濃度,或(huo)隔日(ri)換液的(de)方(fang)法(fa)來(lai)保證(zheng)細胞(bao)的(de)狀(zhuang)態和生(sheng)長速度。
3)對於(yu)生(sheng)長不均的(de)貼(tie)壁細胞(bao):在培(pei)養(yang)過程(cheng)中(zhong)若出現(xian)細胞(bao)分布(bu)明顯不(bu)均(jun)時(即(ji)某壹區(qu)域細胞(bao)已重(zhong)疊(die)生(sheng)長,而旁邊(bian)則(ze)為(wei)壹塊(kuai)空白),此(ci)時(shi)可(ke)將細胞(bao)進(jin)行(xing)消(xiao)化,重(zhong)新(xin)打散(san),貼壁,加(jia)入(ru)新(xin)培(pei)養(yang)基進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。
SK-NEP-1(人(ren)腎(shen)母(mu)細胞(bao)瘤細胞(bao))下面介(jie)紹幾(ji)種細胞(bao)培(pei)養(yang)過程(cheng)中(zhong)常見的(de)汙(wu)染(ran):
壹)桿(gan)菌(jun)汙(wu)染(ran):培(pei)養(yang)基中(zhong)加(jia)入(ru)***可(ke)以減(jian)少此(ci)種汙染,但(dan)也不是(shi)**的(de)。
二)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染(ran):傳(chuan)說(shuo)中(zhong)的(de)黑焦(jiao)蟲,長得(de)暴(bao)快(kuai)。24小(xiao)時就滿(man)視(shi)野(ye)都是(shi)了。汙(wu)染源(yuan)大(da)多(duo)數(shu)情況下是(shi)培(pei)養(yang)用血清。
三(san))***汙(wu)染(ran):似乎無(wu)處不(bu)在(zai),而且(qie)頑固得(de)很(hen)。長得(de)暴(bao)快(kuai)(12h就能(neng)在細胞(bao)上面密布(bu))。培(pei)養(yang)液澄(cheng)清。低(di)倍顯微(wei)鏡(jing)下像(xiang)黑色的(de)沙(sha)子鋪在(zai)細胞(bao)上,高(gao)倍鏡(jing)下(xia)呈樹(shu)枝(zhi)狀或(huo)葡(pu)萄(tao)狀(zhuang)。
四(si))黴菌汙染(ran)、比(bi)較(jiao)常見的(de)壹種汙染,常(chang)常來(lai)源(yuan)於(yu)汙染的(de)空(kong)氣(qi)、水(shui)和器械。



