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酶聯**試(shi)劑盒、11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒運(yun)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心ELISA法定量(liang)測(ce)定其他(ta)血清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組織(zhi)勻漿(jiang)、細胞裂(lie)解(jie)液(ye)、細胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)液(ye)和其他(ta)生物(wu)液體(ti)中11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒含(han)量(liang)。
96T 僅供體(ti)外(wai)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong),不(bu)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)!
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒
本試(shi)劑盒運(yun)用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心ELISA法定量(liang)測(ce)定其他(ta)血清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組織(zhi)勻漿(jiang)、細胞裂(lie)解(jie)液(ye)、細胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)液(ye)和其他(ta)生物(wu)液體(ti)中11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)含(han)量(liang)。
檢測(ce)範圍(wei)
12.35-1000 pg/mL
*低檢測(ce)限
4.7 pg/mL
實驗(yan)原理(li)
將(jiang)11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)抗體包(bao)被於96孔(kong)微孔(kong)板中,制(zhi)成固相載體(ti),向微孔(kong)中分別(bie)加入標(biao)準(zhun)品或標(biao)本,其中的(de)11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)與(yu)連接於固相載體(ti)上(shang)的(de)抗(kang)體(ti)結(jie)合,然後(hou)加入生物(wu)素(su)化(hua)的(de)11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)抗體,將(jiang)未結合的(de)生物(wu)素(su)化(hua)抗(kang)體(ti)洗(xi)凈(jing)後(hou),加入HRP標(biao)記(ji)的(de)親(qin)和素(su),再次(ci)徹(che)底(di)洗(xi)滌(di)後(hou)加入TMB底(di)物(wu)顯色(se)。TMB在過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍色(se),並(bing)在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下轉化(hua)成*終的(de)黃(huang)色。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品中的(de)11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)呈正(zheng)相關。用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下測(ce)定吸(xi)光(guang)度(O.D.值(zhi)),計(ji)算(suan)樣(yang)品濃(nong)度(du)。
試(shi)劑盒內容
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試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數量 |
試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數量 |
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96孔(kong)板(預包(bao)被) |
1 |
96孔(kong)板覆膜 |
2 |
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標準品 |
0.5ml×1 |
標準品稀釋(shi)液(ye) |
1.5ml×1瓶 |
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顯色劑A液(ye) |
6ml×1瓶 |
樣(yang)品稀釋(shi)液(ye) |
6ml×1瓶 |
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顯色劑B液(ye) |
6ml×1瓶 |
終止(zhi)液 |
6ml×1瓶 |
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酶標試(shi)劑 |
6ml×1瓶 |
密封袋(dai) |
1 |
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濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)(30×) |
1×20mL |
使(shi)用(yong)說明書(shu) |
1 |
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒需(xu)自備(bei)的(de)設備(bei)及試(shi)劑
1. 450±10nm濾光片的(de)酶(mei)標(biao)儀(yi)(建議(yi)儀器使(shi)用(yong)前(qian)提(ti)前(qian)預熱(re))
2. 單道或多(duo)道(dao)微(wei)量(liang)加液器(qi)及(ji)吸頭
3. 稀釋(shi)樣(yang)品的(de)EP管(guan)
4. 蒸(zheng)餾(liu)水或去離(li)子(zi)水
5. 吸水紙
6. 盛放洗(xi)液(ye)的(de)容(rong)器(qi)
試(shi)劑盒的(de)儲(chu)存及有效(xiao)期(qi)
1. 未開(kai)封(feng)的(de)試(shi)劑盒:所(suo)有試(shi)劑均(jun)按(an)試(shi)劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)上(shang)所(suo)示(shi)保(bao)存。請註意(yi),收(shou)到試(shi)劑盒後(hou)請盡(jin)快將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液(ye),終止(zhi)液保(bao)存於4℃,其他(ta)試(shi)劑保(bao)存於-20℃。
2. 使(shi)用(yong)後(hou)的(de)試(shi)劑盒:剩余試(shi)劑仍(reng)需(xu)按(an)照(zhao)試(shi)劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)所(suo)示(shi)的(de)溫度保(bao)存,開(kai)封(feng)後(hou)的(de)酶(mei)標(biao)板要(yao)加幹燥(zao)劑(ji)後(hou)密封(feng)保(bao)存於-20℃,避免潮(chao)濕。
註意(yi):
試(shi)劑盒內酶標條可拆(chai)卸,按(an)實驗(yan)需(xu)求可(ke)分(fen)多(duo)次(ci)使(shi)用(yong);使(shi)用(yong)後(hou)的(de)剩余試(shi)劑盒建議(yi)在**實驗(yan)後(hou) 1個月內使(shi)用(yong)完(wan)畢(bi)。產(chan)品過期時間(jian)以盒子(zi)上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)為(wei)準,保(bao)質(zhi)期內所(suo)有組(zu)分(fen)都(dou)確保(bao)是(shi)穩(wen)定的(de)。
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒標(biao)本的(de)采(cai)集(ji)與(yu)保(bao)存
1. 血清(qing):
將(jiang)收(shou)集於血(xue)清(qing)分(fen)離管(guan)的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本在室溫放置 2 小時或(huo) 4oC 過夜,然後(hou) 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可,或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復凍(dong)融(rong)。
2. 血漿(jiang):
用(yong) EDTA 或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑(ji)采集標(biao)本,並將(jiang)標本在采集(ji)後(hou)的(de) 30 分(fen)鐘(zhong)內於 2-8oC 1000×g 離(li)心 15 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢(jian)測(ce),或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復凍(dong)融(rong)。
3. 組織勻漿(jiang):
1) 取(qu)適量組(zu)織(zhi)塊,於預(yu)冷(leng)PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清(qing)洗(xi)去除(chu)血(xue)液(ye),稱重後(hou)備(bei)用(yong)(組(zu)織(zhi)塊較大需(xu)先(xian)剪碎後(hou)再勻漿(jiang));
2) 可同時選(xuan)用(yong)多(duo)種(zhong)勻漿(jiang)方法達到較(jiao)好(hao)的(de)破(po)碎效(xiao)果:首先(xian)將(jiang)組織塊移(yi)入玻(bo)璃勻漿(jiang)器,加入5-10mL 預(yu)冷(leng)PBS 進行(xing)充分(fen)研磨,該(gai)過程(cheng)需(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)進行(xing)(有條件(jian)實驗(yan)室可(ke)選(xuan)用(yong)機(ji)器勻漿(jiang));得(de)到的(de)勻漿(jiang)液可(ke)再利(li)用(yong)超(chao)聲(sheng)破(po)碎或(huo)反(fan)復凍(dong)融(rong) 進壹步處(chu)理(li)(超(chao)聲(sheng)破(po)碎過程(cheng)中註意(yi)冰(bing)浴降(jiang)溫;反(fan)復凍(dong)融(rong)法可(ke)重復2 次(ci))。
3) 將(jiang)制(zhi)備(bei)好(hao)的(de)勻漿(jiang)液於5000×g 離(li)心5 分(fen)鐘(zhong),留(liu)取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢(jian)測(ce)。
4. 細胞裂(lie)解(jie)液(ye):
1)貼壁細胞需(xu)要(yao)先(xian)用(yong)胰(yi)酶(mei)消(xiao)化(hua),離(li)心收(shou)集細胞(懸(xuan)浮細胞可(ke)直接離(li)心收(shou)集);
2)將(jiang)收(shou)集到的(de)細胞用(yong)冷(leng)PBS 洗(xi)3 次(ci);
3)物(wu)理(li)方(fang)法裂(lie)解(jie)細胞(可(ke)先(xian)超(chao)聲(sheng)破(po)碎細胞,再(zai)反(fan)復凍(dong)融(rong)):
i 超(chao)聲(sheng)破(po)碎:取(qu)適量PBS 重懸(xuan)細胞,用(yong)壹(yi)定功(gong)率的(de)超(chao)聲(sheng)波(bo)處(chu)理(li)細胞懸(xuan)液,使(shi)細胞急劇(ju)震蕩(dang)破(po)裂。
ii 反(fan)復凍(dong)融(rong):將(jiang)待破(po)碎的(de)細胞在(zai)-20 oC 以下冰(bing)凍,室(shi)溫融(rong)解(jie),反(fan)復3 次(ci),使(shi)細胞溶(rong)脹(zhang)破(po)碎。
4)將(jiang)標本於2-8 oC 1500×g 離心10 分(fen)鐘(zhong),收(shou)集上(shang)清(qing)備(bei)用(yong)。
5. 細胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)或(huo)其它(ta)生物(wu)標本:
請 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢(jian)測(ce),或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復凍(dong)融(rong)。
註意(yi):
1. 以上(shang)標本均需(xu)密(mi)封(feng)保(bao)存,4oC保(bao)存應小於1周(zhou),-20oC不(bu)應超(chao)過1個月,-80oC不(bu)應(ying)超(chao)過2個月。
2. 標本使(shi)用(yong)前(qian)應緩(huan)慢(man)均(jun)衡(heng)至(zhi)室(shi)溫,不應(ying)加熱(re)使(shi)之(zhi)融(rong)解(jie)。
3. 實驗(yan)前(qian)紅(hong)細胞裂(lie)解(jie)液(ye)必(bi)須(xu)用(yong)標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)。
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒試(shi)劑準(zhun)備(bei)
1. 使(shi)用(yong)前(qian)將(jiang)所(suo)有的(de)試(shi)劑和(he)標(biao)本緩(huan)慢(man)均(jun)衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(18-25oC),試(shi)劑不(bu)能(neng)直接在(zai)37oC溶解(jie)。
2. 標準品(凍幹品):每瓶標(biao)準(zhun)品加入標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)1mL,蓋好(hao)後(hou)室溫靜置大(da)約(yue)10分鐘,同(tong)時反(fan)復顛倒(dao)/搓(cuo)動以助溶(rong)解(jie),其濃(nong)度(du)為1000 pg/mL。準備(bei)7個稀(xi)釋(shi)標(biao)準品的(de)EP管(guan),每個EP管(guan)中加入150μL的(de)標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye),如(ru)圖(tu)所(suo)示(shi)依次(ci)倍比(bi)稀(xi)釋(shi)成不(bu)同(tong)的(de)梯(ti)度(du), 標(biao)準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直接作(zuo)為空(kong)白(bai)孔(kong)。為保(bao)證(zheng)實驗(yan)結果有效(xiao)性,每次(ci)實驗(yan)請使(shi)用(yong)新的(de)標(biao)準(zhun)品溶液(ye)。
3. 濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye):用(yong)580mL蒸(zheng)餾(liu)水或去離(li)子(zi)水將(jiang)20mL濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)稀(xi)釋(shi)至(zhi)600mL,進行(xing)30倍稀(xi)釋(shi)。
標本處(chu)理(li)
1. 本公司只(zhi)對(dui)試(shi)劑盒本身負責(ze),不對(dui)因(yin)使(shi)用(yong)該(gai)試(shi)劑盒所(suo)造成的(de)樣(yang)本消(xiao)耗(hao)負(fu)責(ze),請使(shi)用(yong)者(zhe)使(shi)用(yong)前(qian)充分(fen)考慮到樣(yang)本的(de)可(ke)能(neng)使(shi)用(yong)量(liang),預(yu)留(liu)充(chong)足(zu)的(de)樣(yang)本。
2. 實驗(yan)前(qian)應預(yu)測(ce)標(biao)本含(han)量(liang),如(ru)果標本濃(nong)度(du)過高(gao),應(ying)對(dui)標(biao)本進行(xing)稀釋(shi),使(shi)稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)標(biao)本符合試(shi)劑盒的(de)檢(jian)測(ce)範圍(wei),計算(suan)時再(zai)乘以相應的(de)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數。
3. 若(ruo)所(suo)檢(jian)樣(yang)本不包(bao)含(han)在(zai)說明書(shu)所(suo)列樣(yang)本之中,建議(yi)進行(xing)預實驗(yan)驗證(zheng)其有效(xiao)性,並(bing)註意(yi)留(liu)存樣(yang)本。
4. 使(shi)用(yong)化(hua)學裂解(jie)液(ye)制(zhi)備(bei)的(de)組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)或細胞提(ti)取(qu)液可(ke)能(neng)會(hui)由於某(mou)些化(hua)學物(wu)質(zhi)的(de)引入(ru)導(dao)致 ELISA實驗(yan)結果偏差(cha)。
5. 若(ruo)樣(yang)本為細胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing),因(yin)該(gai)類樣(yang)本幹擾因素(su) 較多(duo),如(ru):細胞狀態、細胞數(shu)量(liang)、采(cai)樣(yang)時間(jian)等(deng),所(suo)以(yi)可(ke)能(neng)存在檢測(ce)不(bu)出(chu)的(de)情(qing)況。
6. 某(mou)些天然(ran)蛋白(bai)或(huo)重組蛋(dan)白,包(bao)括(kuo)原核(he)及(ji)真(zhen)核(he)重組蛋(dan)白,可(ke)能(neng)因(yin)為(wei)與(yu)本產品所(suo)使(shi)用(yong)的(de)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)及(ji)捕(bu)獲抗(kang)體不匹(pi)配(pei),而(er)不被檢測(ce)出(chu)。
7. 建議(yi)使(shi)用(yong)新鮮(xian)樣(yang)本,保(bao)存時間(jian)過長(chang)可(ke)能(neng)會(hui)存在蛋白降(jiang)解(jie)或(huo)變性導(dao)致實驗(yan)結果偏差(cha)。
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒操作(zuo)步驟(zhou)
1. 加樣(yang):分(fen)別(bie)設空(kong)白(bai)孔(kong)(空白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品及酶(mei)標(biao)試(shi)劑,其余各步操作(zuo)相同)、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測(ce)樣(yang)品孔(kong)。在酶標(biao)包(bao)被板上(shang)標準品準確(que)加樣(yang)50μl,待(dai)測(ce)樣(yang)品孔(kong)中先(xian)加樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)40μl,然後(hou)再加待測(ce)樣(yang)品10μl(樣(yang)品*終稀釋(shi)度(du)為5倍)。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板孔(kong)底部(bu),盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁,輕輕(qing)晃動混勻。
2. 溫育(yu):用(yong)封(feng)板膜封板後(hou)置37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
3. 配(pei)液:將(jiang)20倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水20倍稀釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)
4. 洗(xi)滌(di):小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜,棄去液(ye)體(ti),甩(shuai)幹,每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液(ye),靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄去,如(ru)此重復5次(ci),拍幹(gan)。
5. 加酶:每孔(kong)加入酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl,空(kong)白(bai)孔(kong)除外(wai)。
6. 溫育(yu):操作(zuo)同3。
7. 洗(xi)滌(di):操作(zuo)同5。
8. 顯色:每孔(kong)先(xian)加入顯(xian)色(se)劑A50μl,再加入顯(xian)色(se)劑B50μl,輕輕(qing)震蕩(dang)混勻,37℃避光顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).
9. 終止(zhi):每孔(kong)加終止(zhi)液50μl,終止(zhi)反(fan)應(此時藍色(se)立(li)轉(zhuan)黃(huang)色)。
10. 測(ce)定:以(yi)空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling),450nm波(bo)長(chang)依序測(ce)量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)(OD值(zhi))。 測(ce)定應(ying)在(zai)加終止(zhi)液後(hou)15分鐘(zhong)以內進行(xing)。
註意(yi):
1. 試(shi)劑準(zhun)備(bei):準備(bei)壹次(ci)實驗(yan)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)酶(mei)標(biao)條,其它(ta)的(de)可(ke)從(cong)微(wei)孔(kong)板上(shang)拆(chai)下,密封,按(an)照(zhao)說明書(shu)要(yao)求保(bao)存,以備(bei)下次(ci)使(shi)用(yong)。
2. 加樣(yang):實驗(yan)操作(zuo)中請使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou),避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。加樣(yang)時註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)有氣泡(pao),將(jiang)樣(yang)品加於酶(mei)標(biao)板底部(bu),盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁,輕輕(qing)晃動混勻。加樣(yang)或(huo)加試(shi)劑時,**個孔(kong)與(yu)*後(hou)壹個孔(kong)加樣(yang)之(zhi)間(jian)的(de)時間(jian)間隔如(ru)果太大,將(jiang)會(hui)導(dao)致不同(tong)的(de)“預(yu)溫育(yu)”時間(jian),從而(er)明顯(xian)地影(ying)響(xiang)到測(ce)量(liang)值(zhi)的(de)準(zhun)確(que)性及(ji)重復性。因(yin)此,壹(yi)次(ci)加樣(yang)時間(jian)(包(bao)括(kuo)標(biao)準(zhun)品及所(suo)有樣(yang)品)*好(hao)控制(zhi)在10分鐘內。推(tui)薦(jian)設置復(fu)孔(kong)進行(xing)實驗(yan)。
3. 溫育(yu):為防止(zhi)樣(yang)品蒸(zheng)發(fa),實驗(yan)時請(qing)將(jiang)加上(shang)蓋或覆膜的(de)酶(mei)標(biao)板置於濕(shi)盒內,以避免液(ye)體(ti)蒸(zheng)發(fa),洗(xi)板後(hou)應盡(jin)快進(jin)行(xing)下步操作(zuo),任何時侯(hou)都(dou)應避免酶(mei)標(biao)板處(chu)於幹(gan)燥(zao)狀態,同時應(ying)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守(shou)給(gei)定的(de)溫育(yu)時間(jian)和溫度。
4. 洗(xi)滌(di):充分的(de)洗(xi)滌(di)非(fei)常重要(yao),在每次(ci)洗(xi)滌(di)過程(cheng)中,都(dou)要(yao)將(jiang)洗(xi)滌(di)液(ye)完(wan)全(quan)甩(shuai)幹。洗(xi)滌(di)過程(cheng)中反(fan)應孔(kong)中殘留(liu)的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)應(ying)在(zai)濾(lv)紙(zhi)上(shang)拍幹,勿(wu)將(jiang)濾紙直接放入(ru)反(fan)應孔(kong)中吸水,同時要(yao)消(xiao)除(chu)板底殘留的(de)液(ye)體(ti)和(he)手指(zhi)印(yin),避免影(ying)響(xiang)*後(hou)的(de)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀數。如(ru)果有自動洗(xi)板機(ji),應在(zai)熟練(lian)使(shi)用(yong)後(hou)再用(yong)到正(zheng)式(shi)實 驗(yan)過程(cheng)中。
5. 反(fan)應時間(jian)的(de)控制(zhi):加入底(di)物(wu)後(hou)請定時觀(guan)察反(fan)應孔(kong)的(de)顏(yan)色(se)變化(hua)(比(bi)如(ru),每隔10分(fen)鐘(zhong)觀(guan)察壹次(ci)),如(ru)顏(yan)色(se)較(jiao)深(shen),請(qing)提(ti)前(qian)加入終止(zhi)液終止(zhi)反(fan)應,避免反(fan)應過強(qiang)從而(er)影(ying)響(xiang)酶(mei)標(biao)儀(yi)光密度讀數。
6. 底物(wu):底物(wu)請避光保(bao)存,在儲存和溫育(yu)時避免強(qiang)光直接照(zhao)射。
7. 如(ru)果實驗(yan)室內濕度低於60%,推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)加濕器(qi)提(ti)高(gao)濕(shi)度水平(ping)。
實驗(yan)流程(cheng)
1. 實驗(yan)前(qian)標準(zhun)品、試(shi)劑及(ji)樣(yang)本的(de)準(zhun)備(bei);
2. 加樣(yang)(標(biao)準(zhun)品及樣(yang)本)50μL,37℃孵育(yu)30分(fen)鐘(zhong);
3. 洗(xi)板5次(ci),加酶標(biao)試(shi)劑50ul,37℃孵育(yu)半(ban)小時;
4. 洗(xi)板5次(ci);加入顯(xian)色(se)液A,B各50ul,37℃孵育(yu)顯(xian)色(se)15分鐘
5. 加終止(zhi)液50μL,立(li)即450nm讀數。
6. 計算(suan)
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒計(ji)算(suan)
各標準(zhun)品及樣(yang)本O.D.值(zhi)扣除空(kong)白孔(kong)O.D.值(zhi)後(hou)作(zuo)圖(tu)(七(qi)點(dian)圖(tu)),如(ru)設置復(fu)孔(kong),則(ze)應(ying)取(qu)其平(ping)均值(zhi)計(ji)算(suan)。以(yi)標(biao)準(zhun)品的(de)濃(nong)度(du)為縱坐標(biao)(或(huo)對(dui)數(shu)坐(zuo)標(biao)),O.D.值(zhi)為(wei)橫(heng)坐標(biao)(或(huo)對(dui)數(shu)坐(zuo)標(biao)),繪(hui)出(chu)標(biao)準曲線(*佳(jia)方(fang)程(cheng)式(shi)應依回(hui)歸方(fang)程(cheng)計算(suan)的(de)R2值(zhi)來(lai)定,以(yi)R2值(zhi)越(yue)趨(qu)近(jin)於1為(wei)好(hao))。推(tui)薦(jian)使(shi)用(yong)專(zhuan)業制(zhi)作(zuo)曲線(xian)軟(ruan)件(jian)進(jin)行(xing)分析,如(ru)curve expert 1.30,根(gen)據(ju)樣(yang)品O.D.值(zhi),由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相應的(de)濃(nong)度(du),乘以稀釋(shi)倍(bei)數;或用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度(du)與(yu)O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標(biao)準曲線的(de)回(hui)歸方(fang)程(cheng)式(shi),將(jiang)樣(yang)品的(de)O.D.值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)式(shi),計算(suan)出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du),再乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數,即為(wei)樣(yang)品的(de)實際(ji)濃(nong)度(du)。
特異(yi)性
本試(shi)劑盒用(yong)於檢(jian)測(ce)11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2),經檢測(ce)與(yu)其它(ta)相似物(wu)質(zhi)無明顯交叉(cha)反(fan)應。
由於受到技(ji)術(shu)及(ji)樣(yang)本來源的(de)限制(zhi),不可能完(wan)成對(dui)所(suo)有相關或(huo)相似物(wu)質(zhi)交叉(cha)反(fan)應檢(jian)測(ce),因(yin)此本試(shi)劑盒有可(ke)能(neng)與(yu)未經(jing)檢(jian)測(ce)的(de)其它(ta)物(wu)質(zhi)有交(jiao)叉(cha)反(fan)應。
精密(mi)度
精密(mi)度用(yong)樣(yang)品測(ce)定值(zhi)的(de)變異(yi)系數CV表(biao)示(shi)。CV(%) = SD/mean×100
批(pi)內差(cha):取(qu)同批(pi)次(ci)試(shi)劑盒對(dui)低(di)、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣(yang)本進行(xing)定量(liang)檢(jian)測(ce),每份樣(yang)本連續測(ce)定20 次(ci),分別(bie)計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。
批(pi)間(jian)差(cha):選(xuan)取(qu)3個不(bu)同批(pi)次(ci)的(de)試(shi)劑盒分(fen)別對(dui)低(di)、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣(yang)本進行(xing)定量(liang)測(ce)定,每個樣(yang)本使(shi)用(yong)同(tong)壹(yi)試(shi)劑盒重復測(ce)定8次(ci),分別(bie)計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。
批(pi)內差(cha): CV<10%
批(pi)間(jian)差(cha): CV<12%
11-去氫(qing)血(xue)栓(shuan)烷B2(11-DH-TXB2)ELISA試(shi)劑盒穩(wen)定性
經測(ce)定,試(shi)劑盒在(zai)有效(xiao)期(qi)內按(an)推(tui)薦(jian)溫度保(bao)存,其活性降(jiang)低(di)率小於5%。
為減小外(wai)部(bu)因(yin)素(su)對(dui)試(shi)劑盒破(po)壞(huai)前(qian)後(hou)檢測(ce)值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang),實驗(yan)室的(de)環(huan)境(jing)條件(jian)需(xu)盡(jin)量保(bao)持壹(yi)致,尤(you)其是(shi)實驗(yan)室內溫度、濕(shi)度(du)及溫育(yu)條件(jian)。其次(ci)由同(tong)壹(yi)實驗(yan)員來(lai)進(jin)行(xing)操作(zuo)可減(jian)少(shao)人為誤(wu)差(cha)。



