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96T 僅(jin)供(gong)體(ti)外研究使(shi)用,不(bu)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷!
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒
本(ben)試劑(ji)盒運用雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)ELISA法(fa)定(ding)量測定(ding)猴血(xue)清、血漿、組織(zhi)勻(yun)漿、細胞(bao)裂解液(ye)、細(xi)胞(bao)培養上(shang)清液(ye)和(he)其他生物液(ye)體(ti)中猴白(bai)介(jie)素(su)8(IL8)含(han)量。
檢(jian)測範(fan)圍(wei)
15.625-1000pg/mL
*低(di)檢測限(xian)
5.3pg/mL
實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)
將(jiang)猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)於(yu)96孔(kong)微(wei)孔(kong)板(ban)中,制成(cheng)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti),向(xiang)微(wei)孔(kong)中分別加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品或(huo)標(biao)本(ben),其中的猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)與(yu)連接(jie)於固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)的抗體(ti)結(jie)合(he),然後(hou)加(jia)入(ru)生物素化(hua)的(de)猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)抗(kang)體(ti),將(jiang)未(wei)結(jie)合(he)的生物素化(hua)抗(kang)體(ti)洗凈後(hou),加(jia)入(ru)HRP標(biao)記(ji)的親(qin)和(he)素,再次(ci)徹底(di)洗滌(di)後(hou)加(jia)入(ru)TMB底(di)物顯色(se)。TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物酶的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色(se),並(bing)在(zai)酸(suan)的作用下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定(ding)吸光(guang)度(O.D.值),計算(suan)樣(yang)品(pin)濃度。
試(shi)劑(ji)盒內容(rong)
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試(shi)劑(ji)名(ming)稱(cheng) |
數量 |
試(shi)劑(ji)名(ming)稱(cheng) |
數量 |
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96孔(kong)板(ban)(預包(bao)被(bei)) |
1 |
96孔(kong)板(ban)覆膜 |
2 |
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標(biao)準(zhun)品 |
0.5ml×1 |
標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye) |
1.5ml×1瓶(ping) |
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顯(xian)色劑(ji)A液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
樣(yang)品(pin)稀釋液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
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顯(xian)色劑(ji)B液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
終(zhong)止液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
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酶標(biao)試(shi)劑(ji) |
6ml×1瓶(ping) |
密封袋(dai) |
1 |
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濃(nong)洗滌(di)液(ye)(30×) |
1×20mL |
使(shi)用說(shuo)明書 |
1 |
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒需自備(bei)的(de)設備(bei)及試劑(ji)
1. 450±10nm濾光(guang)片(pian)的(de)酶標(biao)儀(yi)(建(jian)議儀器使用前提(ti)前預熱(re))
2. 單(dan)道或(huo)多道微(wei)量(liang)加(jia)液(ye)器及吸(xi)頭(tou)
3. 稀(xi)釋樣(yang)品(pin)的EP管(guan)
4. 蒸餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水(shui)
5. 吸(xi)水(shui)紙
6. 盛放(fang)洗液(ye)的(de)容(rong)器
試(shi)劑(ji)盒的儲存及(ji)有(you)效(xiao)期
1. 未(wei)開(kai)封的(de)試(shi)劑(ji)盒:所有試劑(ji)均按試劑(ji)瓶(ping)標(biao)簽上所示保存。請(qing)註意(yi),收到(dao)試劑(ji)盒後(hou)請盡快將(jiang)TMB 洗滌(di)液(ye),終(zhong)止液(ye)保存於(yu)4℃,其他試(shi)劑(ji)保存於(yu)-20℃。
2. 使(shi)用後(hou)的試劑(ji)盒:剩余試劑(ji)仍(reng)需按照(zhao)試劑(ji)瓶(ping)標(biao)簽所示的(de)溫(wen)度保存,開(kai)封後(hou)的酶標(biao)板(ban)要加(jia)幹(gan)燥(zao)劑(ji)後(hou)密封保存於(yu)-20℃,避(bi)免(mian)潮濕。
註意(yi):
試(shi)劑(ji)盒內酶標(biao)條(tiao)可拆卸,按(an)實(shi)驗(yan)需求可(ke)分多次使用;使(shi)用後(hou)的剩余試劑(ji)盒建(jian)議在(zai)**實(shi)驗(yan)後(hou) 1個月內使用完(wan)畢(bi)。產品過期(qi)時間(jian)以盒子上的標(biao)簽為(wei)準(zhun),保質期(qi)內所有組分都(dou)確保是穩(wen)定(ding)的。
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒標(biao)本(ben)的采(cai)集(ji)與(yu)保存
1. 血(xue)清:
將(jiang)收集(ji)於(yu)血(xue)清分離管(guan)的全血標(biao)本(ben)在(zai)室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時或(huo) 4oC 過夜(ye),然後(hou) 1000×g 離心(xin) 20 分鐘(zhong),取上(shang)清即可(ke),或(huo)將(jiang)上清置於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存,但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
2. 血(xue)漿:
用 EDTA 或(huo)肝素作為(wei)抗凝(ning)劑(ji)采(cai)集(ji)標(biao)本(ben),並將(jiang)標(biao)本(ben)在(zai)采(cai)集(ji)後(hou)的 30 分鐘(zhong)內於 2-8oC 1000×g 離心(xin) 15 分鐘(zhong),取上(shang)清即可(ke)檢測,或(huo)將(jiang)上清置於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存,但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
3. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿:
1) 取適(shi)量(liang)組織(zhi)塊(kuai),於預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去(qu)除(chu)血液(ye),稱(cheng)重(zhong)後(hou)備用(組(zu)織(zhi)塊(kuai)較大(da)需先(xian)剪碎後(hou)再勻(yun)漿);
2) 可(ke)同(tong)時選(xuan)用多種勻(yun)漿方(fang)法達(da)到(dao)較好的破(po)碎效(xiao)果(guo):首(shou)先(xian)將(jiang)組織(zhi)塊(kuai)移(yi)入(ru)玻(bo)璃(li)勻(yun)漿器,加(jia)入(ru)5-10mL 預冷PBS 進(jin)行(xing)充(chong)分研磨(mo),該過程(cheng)需在(zai)冰(bing)上進行(xing)(有(you)條(tiao)件實(shi)驗(yan)室(shi)可(ke)選(xuan)用機(ji)器勻(yun)漿);得(de)到(dao)的勻(yun)漿液(ye)可(ke)再(zai)利(li)用超(chao)聲(sheng)破(po)碎或(huo)反復(fu)凍融(rong) 進壹(yi)步處理(超聲(sheng)破(po)碎過程(cheng)中註意(yi)冰浴降(jiang)溫(wen);反復(fu)凍融(rong)法可(ke)重(zhong)復(fu)2 次)。
3) 將(jiang)制備好的勻(yun)漿液(ye)於(yu)5000×g 離(li)心(xin)5 分鐘(zhong),留取上(shang)清即可(ke)檢測。
4. 細(xi)胞(bao)裂解液(ye):
1)貼壁細(xi)胞(bao)需要先(xian)用胰(yi)酶消化(hua),離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)(懸浮細(xi)胞(bao)可直接(jie)離心(xin)收(shou)集(ji));
2)將(jiang)收集(ji)到(dao)的細(xi)胞(bao)用冷PBS 洗3 次(ci);
3)物理方(fang)法裂(lie)解細(xi)胞(bao)(可先(xian)超聲破(po)碎細胞(bao),再反(fan)復(fu)凍融(rong)):
i 超(chao)聲破(po)碎:取適(shi)量(liang)PBS 重(zhong)懸細胞(bao),用壹(yi)定(ding)功率的超聲(sheng)波(bo)處理細胞(bao)懸液(ye),使(shi)細(xi)胞(bao)急劇(ju)震(zhen)蕩破(po)裂。
ii 反(fan)復(fu)凍融(rong):將(jiang)待破(po)碎的細(xi)胞(bao)在(zai)-20 oC 以下(xia)冰(bing)凍(dong),室(shi)溫(wen)融(rong)解,反(fan)復(fu)3 次,使細胞(bao)溶(rong)脹破(po)碎。
4)將(jiang)標(biao)本(ben)於2-8 oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分鐘(zhong),收集(ji)上(shang)清備用。
5. 細(xi)胞(bao)培養上(shang)清或(huo)其它生物標(biao)本(ben):
請(qing) 1000×g 離心(xin) 20 分鐘(zhong),取上(shang)清即可(ke)檢測,或(huo)將(jiang)上清置於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存,但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
註意(yi):
1. 以上(shang)標(biao)本(ben)均需密封保存,4oC保存應小(xiao)於1周,-20oC不(bu)應超(chao)過1個(ge)月,-80oC不應超(chao)過2個(ge)月。
2. 標(biao)本(ben)使用前應緩(huan)慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen),不(bu)應加(jia)熱(re)使(shi)之(zhi)融(rong)解。
3. 實(shi)驗(yan)前紅(hong)細(xi)胞(bao)裂解液(ye)必(bi)須用標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye)稀(xi)釋。
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒試劑(ji)準(zhun)備
1. 使(shi)用前將(jiang)所有的(de)試(shi)劑(ji)和(he)標(biao)本(ben)緩慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)(18-25oC),試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)直接(jie)在(zai)37oC溶(rong)解。
2. 標(biao)準(zhun)品(凍(dong)幹(gan)品(pin)):每瓶標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye)1mL,蓋(gai)好後(hou)室(shi)溫(wen)靜置大約10分鐘(zhong),同(tong)時反(fan)復(fu)顛倒/搓(cuo)動(dong)以助(zhu)溶(rong)解,其濃度為(wei)1000pg/mL。準(zhun)備7個稀釋標(biao)準(zhun)品的EP管,每(mei)個EP管中加(jia)入(ru)150μL的標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye),如(ru)圖(tu)所示依(yi)次(ci)倍(bei)比稀(xi)釋成(cheng)不同(tong)的(de)梯(ti)度, 標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye)(0pg/mL)直接(jie)作為(wei)空白(bai)孔(kong)。為(wei)保證(zheng)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效(xiao)性,每(mei)次實(shi)驗(yan)請(qing)使(shi)用新(xin)的(de)標(biao)準(zhun)品溶(rong)液(ye)。
3. 濃(nong)洗滌(di)液(ye):用580mL蒸餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水(shui)將(jiang)20mL濃(nong)洗滌(di)液(ye)稀(xi)釋至(zhi)600mL,進(jin)行(xing)30倍(bei)稀釋。
標(biao)本(ben)處理
1. 本(ben)公司(si)只(zhi)對試(shi)劑(ji)盒本身(shen)負責(ze),不對(dui)因使用該(gai)試(shi)劑(ji)盒所造成(cheng)的樣(yang)本(ben)消耗(hao)負責,請使(shi)用者(zhe)使(shi)用前充(chong)分考慮到(dao)樣(yang)本(ben)的可(ke)能(neng)使(shi)用量(liang),預留(liu)充足(zu)的樣(yang)本(ben)。
2. 實(shi)驗(yan)前應預測標(biao)本(ben)含(han)量,如果(guo)標(biao)本(ben)濃度過高(gao),應對(dui)標(biao)本(ben)進行(xing)稀(xi)釋,使稀(xi)釋後(hou)的標(biao)本(ben)符合(he)試劑(ji)盒的檢測範(fan)圍(wei),計算(suan)時再(zai)乘(cheng)以相(xiang)應的(de)稀釋倍(bei)數。
3. 若所檢(jian)樣(yang)本(ben)不包(bao)含(han)在(zai)說(shuo)明書所(suo)列(lie)樣(yang)本(ben)之中,建(jian)議進行(xing)預實(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng)其有效(xiao)性,並(bing)註意(yi)留存樣(yang)本(ben)。
4. 使(shi)用化(hua)學裂(lie)解液(ye)制(zhi)備(bei)的組織(zhi)勻(yun)漿或(huo)細胞(bao)提(ti)取液(ye)可(ke)能(neng)會由(you)於(yu)某些化(hua)學物質的(de)引入(ru)導致 ELISA實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差。
5. 若樣(yang)本(ben)為(wei)細胞(bao)培養上(shang)清,因該(gai)類(lei)樣(yang)本(ben)幹(gan)擾因(yin)素(su) 較多,如:細胞(bao)狀(zhuang)態、細(xi)胞(bao)數量、采(cai)樣(yang)時間(jian)等,所以可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)檢(jian)測不(bu)出(chu)的(de)情(qing)況(kuang)。
6. 某些天(tian)然蛋(dan)白(bai)或(huo)重(zhong)組蛋(dan)白(bai),包(bao)括原(yuan)核(he)及真核(he)重(zhong)組蛋(dan)白(bai),可(ke)能(neng)因(yin)為(wei)與本(ben)產品(pin)所使用的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)及(ji)捕獲抗(kang)體(ti)不(bu)匹配,而(er)不(bu)被(bei)檢(jian)測出(chu)。
7. 建(jian)議使用新(xin)鮮(xian)樣(yang)本(ben),保存時間(jian)過長(chang)可(ke)能(neng)會存(cun)在(zai)蛋(dan)白(bai)降(jiang)解或(huo)變(bian)性(xing)導(dao)致(zhi)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差。
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒操作步驟(zhou)
1. 加(jia)樣(yang):分別設空(kong)白孔(kong)(空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試(shi)劑(ji),其余各步操(cao)作相(xiang)同(tong))、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加(jia)樣(yang)50μl,待(dai)測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀釋液(ye)40μl,然(ran)後(hou)再加(jia)待(dai)測樣(yang)品(pin)10μl(樣(yang)品(pin)*終稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei))。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部,盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。
2. 溫(wen)育(yu):用封板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。
3. 配(pei)液(ye):將(jiang)20倍(bei)濃縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸餾(liu)水(shui)20倍(bei)稀釋後(hou)備用
4. 洗滌(di):小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜(mo),棄去(qu)液(ye)體(ti),甩(shuai)幹(gan),每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye),靜置30秒(miao)後(hou)棄去(qu),如(ru)此重(zhong)復(fu)5次,拍(pai)幹(gan)。
5. 加(jia)酶:每孔(kong)加(jia)入(ru)酶標(biao)試(shi)劑(ji)50μl,空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。
6. 溫(wen)育(yu):操(cao)作同(tong)3。
7. 洗滌(di):操(cao)作同(tong)5。
8. 顯(xian)色:每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl,再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)B50μl,輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻(yun),37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘(zhong).
9. 終(zhong)止:每孔(kong)加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl,終(zhong)止反應(此(ci)時藍(lan)色立(li)轉(zhuan)黃色(se))。
10. 測定(ding):以空(kong)白(bai)空調(tiao)零,450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(OD值)。 測定(ding)應在(zai)加(jia)終(zhong)止液(ye)後(hou)15分鐘(zhong)以內進行(xing)。
註意(yi):
1. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備:準(zhun)備壹次實(shi)驗(yan)所(suo)需要的(de)酶標(biao)條(tiao),其它的(de)可(ke)從(cong)微(wei)孔(kong)板(ban)上(shang)拆下(xia),密封,按(an)照(zhao)說明書要(yao)求(qiu)保存,以備(bei)下(xia)次(ci)使(shi)用。
2. 加(jia)樣(yang):實(shi)驗(yan)操(cao)作(zuo)中請使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou),避免(mian)交叉汙(wu)染(ran)。加(jia)樣(yang)時註意(yi)不要有(you)氣(qi)泡(pao),將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)底(di)部,盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試(shi)劑(ji)時,**個(ge)孔(kong)與(yu)*後(hou)壹個孔(kong)加(jia)樣(yang)之(zhi)間的(de)時間(jian)間隔(ge)如(ru)果(guo)太(tai)大(da),將(jiang)會導(dao)致(zhi)不(bu)同(tong)的(de)“預溫(wen)育(yu)”時間(jian),從(cong)而(er)明顯(xian)地影響(xiang)到(dao)測量(liang)值的準(zhun)確性及重(zhong)復(fu)性。因此,壹次加(jia)樣(yang)時間(jian)(包(bao)括標(biao)準(zhun)品及所有(you)樣(yang)品(pin))*好控(kong)制(zhi)在(zai)10分鐘(zhong)內。推薦(jian)設置(zhi)復(fu)孔(kong)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。
3. 溫(wen)育(yu):為(wei)防止樣(yang)品(pin)蒸發(fa),實(shi)驗(yan)時請(qing)將(jiang)加(jia)上(shang)蓋(gai)或(huo)覆膜的(de)酶標(biao)板(ban)置於濕(shi)盒內,以避(bi)免(mian)液(ye)體(ti)蒸發(fa),洗板(ban)後(hou)應盡(jin)快進(jin)行(xing)下(xia)步(bu)操(cao)作,任何時侯都(dou)應避(bi)免(mian)酶標(biao)板(ban)處於幹(gan)燥(zao)狀(zhuang)態,同(tong)時應嚴(yan)格遵守(shou)給(gei)定(ding)的溫(wen)育(yu)時間(jian)和溫度。
4. 洗滌(di):充(chong)分的洗滌(di)非常(chang)重(zhong)要,在(zai)每(mei)次洗滌(di)過程(cheng)中,都(dou)要將(jiang)洗滌(di)液(ye)完(wan)全(quan)甩(shuai)幹(gan)。洗滌(di)過程(cheng)中反應孔(kong)中殘留(liu)的洗滌(di)液(ye)應在(zai)濾紙上拍(pai)幹(gan),勿將(jiang)濾紙直接(jie)放入(ru)反應孔(kong)中吸水(shui),同(tong)時要(yao)消除(chu)板底(di)殘留(liu)的(de)液(ye)體(ti)和(he)手指印(yin),避免(mian)影響(xiang)*後(hou)的酶標(biao)儀(yi)讀數。如果(guo)有(you)自(zi)動(dong)洗板(ban)機(ji),應在(zai)熟練使(shi)用後(hou)再用到(dao)正式實(shi) 驗(yan)過程(cheng)中。
5. 反(fan)應時間(jian)的控(kong)制(zhi):加(jia)入(ru)底(di)物後(hou)請定(ding)時觀(guan)察反應孔(kong)的(de)顏色(se)變(bian)化(hua)(比(bi)如(ru),每(mei)隔(ge)10分鐘(zhong)觀(guan)察壹次(ci)),如(ru)顏色(se)較深(shen),請提(ti)前加(jia)入(ru)終止液(ye)終(zhong)止反應,避(bi)免(mian)反應過強(qiang)從(cong)而(er)影響(xiang)酶標(biao)儀(yi)光(guang)密度讀數。
6. 底(di)物:底(di)物請避(bi)光(guang)保存,在(zai)儲存和(he)溫(wen)育(yu)時避(bi)免(mian)強(qiang)光(guang)直接(jie)照(zhao)射。
7. 如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)室(shi)內濕度低(di)於60%,推薦(jian)使(shi)用加(jia)濕(shi)器提(ti)高(gao)濕(shi)度水(shui)平。
實(shi)驗(yan)流程(cheng)
1. 實(shi)驗(yan)前標(biao)準(zhun)品、試劑(ji)及(ji)樣(yang)本(ben)的準(zhun)備;
2. 加(jia)樣(yang)(標(biao)準(zhun)品及樣(yang)本(ben))50μL,37℃孵育(yu)30分鐘(zhong);
3. 洗板(ban)5次(ci),加(jia)酶標(biao)試(shi)劑(ji)50ul,37℃孵育(yu)半(ban)小時;
4. 洗板(ban)5次(ci);加(jia)入(ru)顯色液(ye)A,B各50ul,37℃孵育(yu)顯(xian)色15分鐘(zhong)
5. 加(jia)終(zhong)止液(ye)50μL,立(li)即(ji)450nm讀數。
6. 計算(suan)
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒計算(suan)
各標(biao)準(zhun)品及樣(yang)本(ben)O.D.值扣除(chu)空白(bai)孔(kong)O.D.值後(hou)作圖(七(qi)點圖(tu)),如(ru)設置(zhi)復(fu)孔(kong),則應取其平均值計算(suan)。以標(biao)準(zhun)品的濃度為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(或(huo)對數坐標(biao)),O.D.值為(wei)橫坐(zuo)標(biao)(或(huo)對數坐標(biao)),繪(hui)出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(*佳(jia)方(fang)程式應依(yi)回(hui)歸(gui)方(fang)程計算(suan)的R2值來定(ding),以R2值越(yue)趨(qu)近於1為(wei)好)。推薦(jian)使(shi)用專(zhuan)業制(zhi)作(zuo)曲線軟(ruan)件(jian)進行(xing)分析(xi),如(ru)curve expert 1.30,根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)O.D.值,由標(biao)準(zhun)曲線查(zha)出(chu)相(xiang)應的(de)濃度,乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數;或(huo)用標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度與(yu)O.D.值計算(suan)出(chu)標(biao)準(zhun)曲線的(de)回(hui)歸(gui)方(fang)程式,將(jiang)樣(yang)品(pin)的O.D.值代入(ru)方(fang)程式,計算(suan)出(chu)樣(yang)品(pin)濃度,再(zai)乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數,即為(wei)樣(yang)品(pin)的實(shi)際(ji)濃(nong)度。
特(te)異性
本(ben)試劑(ji)盒用於(yu)檢(jian)測猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8),經檢測與(yu)其它相(xiang)似物質無(wu)明顯(xian)交叉反(fan)應。
由(you)於受到(dao)技術及(ji)樣(yang)本(ben)來源(yuan)的限(xian)制,不可能(neng)完(wan)成(cheng)對所(suo)有(you)相(xiang)關(guan)或(huo)相(xiang)似物質交(jiao)叉(cha)反應檢(jian)測,因(yin)此本(ben)試劑(ji)盒有可能(neng)與(yu)未(wei)經檢測的(de)其它物質有(you)交(jiao)叉反(fan)應。
精(jing)密度
精(jing)密度用樣(yang)品(pin)測定(ding)值的變(bian)異系數CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批內差:取同(tong)批次試劑(ji)盒對低、中、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行(xing)定(ding)量檢(jian)測,每(mei)份樣(yang)本(ben)連續(xu)測定(ding)20 次,分別計算(suan)不同(tong)濃(nong)度樣(yang)本(ben)的平(ping)均值及SD值。
批間差:選(xuan)取3個(ge)不(bu)同(tong)批次的試劑(ji)盒分別對(dui)低、中、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行(xing)定(ding)量測定(ding),每個(ge)樣(yang)本(ben)使用同(tong)壹(yi)試劑(ji)盒重(zhong)復(fu)測定(ding)8次,分別計算(suan)不同(tong)濃(nong)度樣(yang)本(ben)的平(ping)均值及SD值。
批內差: CV<10%
批間差: CV<12%
猴(hou)白介(jie)素(su)8(IL8)ELISA試(shi)劑(ji)盒穩(wen)定(ding)性
經測定(ding),試劑(ji)盒在(zai)有(you)效(xiao)期內按推薦(jian)溫(wen)度保存,其活(huo)性降(jiang)低(di)率(lv)小於5%。
為(wei)減(jian)小外部因(yin)素(su)對試劑(ji)盒破(po)壞前後(hou)檢測值的影響(xiang),實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)環境(jing)條(tiao)件需盡量(liang)保持壹(yi)致(zhi),尤其是實(shi)驗(yan)室(shi)內溫度、濕(shi)度及(ji)溫育(yu)條(tiao)件。其次由(you)同(tong)壹(yi)實(shi)驗(yan)員來(lai)進(jin)行(xing)操(cao)作(zuo)可減(jian)少人為(wei)誤(wu)差。



