產品(pin)名(ming)稱(cheng)：猴(hou)腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

                                                       96T       僅(jin)供體(ti)外(wai)研究使(shi)用(yong)，不用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷!

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

本試劑(ji)盒(he)運(yun)用雙抗體(ti)夾心ELISA法(fa)定量測定猴(hou)血(xue)清(qing)、血(xue)漿、組(zu)織勻漿(jiang)、細胞(bao)裂(lie)解(jie)液、細胞(bao)培(pei)養(yang)上清(qing)液(ye)和(he)其他(ta)生物(wu)液(ye)體(ti)中(zhong)猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)含(han)量。

 檢(jian)測範圍(wei)

15.625-1000pg/mL

 *低(di)檢(jian)測限

6.9pg/mL

 實驗原理

將猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)抗體(ti)包被(bei)於(yu)96孔(kong)微孔板中(zhong)，制(zhi)成固相(xiang)載(zai)體(ti)，向微(wei)孔中(zhong)分(fen)別加入標準(zhun)品(pin)或標本(ben)，其(qi)中(zhong)的猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)與連(lian)接(jie)於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上的抗體(ti)結(jie)合(he)，然後(hou)加入生物素(su)化的(de)猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)抗體(ti)，將未結(jie)合(he)的生物(wu)素(su)化抗體(ti)洗凈(jing)後(hou)，加入HRP標記的親(qin)和(he)素(su)，再(zai)次徹底(di)洗滌(di)後加入TMB底(di)物顯(xian)色。TMB在過氧(yang)化物(wu)酶(mei)的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成藍色(se)，並在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成*終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色的(de)深淺和(he)樣品(pin)中(zhong)的猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)呈正相(xiang)關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在450nm波(bo)長(chang)下測定吸(xi)光(guang)度(O.D.值(zhi))，計(ji)算樣(yang)品(pin)濃(nong)度。

 試劑(ji)盒(he)內(nei)容(rong)

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)需(xu)自備的(de)設備及試劑(ji)

1.         450±10nm濾光(guang)片的(de)酶(mei)標儀(yi)(建議(yi)儀(yi)器(qi)使用(yong)前(qian)提前(qian)預(yu)熱)

2.         單道或多(duo)道微量加液器(qi)及吸(xi)頭(tou)

3.         稀釋樣品(pin)的(de)EP管

4.         蒸餾水(shui)或去(qu)離(li)子水

5.         吸(xi)水紙

6.         盛(sheng)放(fang)洗(xi)液(ye)的(de)容器(qi)

 試劑(ji)盒(he)的(de)儲存及(ji)有效(xiao)期(qi)

1.         未開封(feng)的試(shi)劑(ji)盒(he)：所(suo)有試(shi)劑(ji)均按試(shi)劑(ji)瓶標簽上所(suo)示(shi)保存(cun)。請(qing)註意(yi)，收到試劑(ji)盒(he)後(hou)請盡快(kuai)將TMB 洗滌液，終(zhong)止(zhi)液(ye)保存(cun)於(yu)4℃，其(qi)他(ta)試劑(ji)保存(cun)於(yu)-20℃。

2.         使用後的試(shi)劑(ji)盒(he)：剩(sheng)余(yu)試(shi)劑(ji)仍(reng)需(xu)按照試(shi)劑(ji)瓶標簽所(suo)示(shi)的(de)溫(wen)度(du)保存(cun)，開封(feng)後的(de)酶(mei)標板要加幹燥(zao)劑(ji)後(hou)密(mi)封(feng)保存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免潮濕(shi)。

註意(yi)：

試劑(ji)盒(he)內(nei)酶(mei)標條(tiao)可(ke)拆(chai)卸(xie)，按(an)實驗(yan)需(xu)求可分(fen)多次使用；使用(yong)後的(de)剩(sheng)余(yu)試(shi)劑(ji)盒(he)建議(yi)在**實(shi)驗(yan)後 1個月(yue)內(nei)使(shi)用(yong)完(wan)畢(bi)。產品(pin)過期(qi)時(shi)間(jian)以(yi)盒子(zi)上的標簽為準(zhun)，保質(zhi)期(qi)內(nei)所(suo)有組(zu)分(fen)都確保是穩定的。

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)標本(ben)的(de)采(cai)集與保存(cun)

1.         血(xue)清(qing)：

將收集於(yu)血(xue)清(qing)分(fen)離(li)管的全(quan)血(xue)標本(ben)在室溫(wen)放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時或 4^oC 過夜(ye)，然後(hou) 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘，取上清(qing)即(ji)可，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存(cun)，但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。

2.         血(xue)漿：

用 EDTA 或肝(gan)素(su)作(zuo)為抗凝劑(ji)采(cai)集標本(ben)，並(bing)將標本(ben)在采(cai)集後(hou)的 30 分(fen)鐘內(nei)於(yu) 2-8^oC 1000×g 離(li)心 15 分(fen)鐘，取上清(qing)即(ji)可檢(jian)測，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存(cun)，但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。

3. 組(zu)織勻漿(jiang)：

1） 取適量組(zu)織塊(kuai)，於(yu)預(yu)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中(zhong)清(qing)洗(xi)去(qu)除(chu)血(xue)液，稱(cheng)重後(hou)備(bei)用（組(zu)織塊(kuai)較(jiao)大需先(xian)剪(jian)碎後再(zai)勻漿(jiang)）；

2） 可同時選用多(duo)種勻漿(jiang)方法(fa)達(da)到較(jiao)好(hao)的(de)破(po)碎(sui)效(xiao)果(guo)：首(shou)先(xian)將組(zu)織塊(kuai)移入玻(bo)璃勻漿(jiang)器(qi)，加入5-10mL 預冷PBS 進行(xing)充(chong)分(fen)研磨，該過程(cheng)需(xu)在冰上進行(xing)（有條(tiao)件(jian)實驗室可選用機(ji)器(qi)勻漿(jiang)）；得到的勻漿(jiang)液可再利(li)用(yong)超聲破(po)碎(sui)或反(fan)復(fu)凍(dong)融 進壹步(bu)處(chu)理(li)（超(chao)聲破(po)碎(sui)過程(cheng)中(zhong)註意(yi)冰浴(yu)降(jiang)溫(wen)；反(fan)復(fu)凍(dong)融法(fa)可重復(fu)2 次(ci)）。

3） 將制(zhi)備好(hao)的(de)勻漿(jiang)液於(yu)5000×g 離(li)心5 分(fen)鐘，留取(qu)上清(qing)即(ji)可檢(jian)測。

4. 細胞(bao)裂(lie)解(jie)液：

1）貼壁(bi)細(xi)胞(bao)需(xu)要(yao)先用胰(yi)酶(mei)消化，離(li)心收集細(xi)胞(bao)（懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)可(ke)直(zhi)接(jie)離(li)心收集）；

2）將收集到的細(xi)胞(bao)用(yong)冷PBS 洗3 次(ci)；

3）物理方法(fa)裂(lie)解(jie)細胞(bao)（可(ke)先(xian)超聲破(po)碎(sui)細(xi)胞(bao)，再(zai)反(fan)復凍(dong)融）：

i 超聲破(po)碎(sui)：取(qu)適(shi)量PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，用(yong)壹(yi)定功率的(de)超(chao)聲波處理細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，使細胞(bao)急(ji)劇震蕩(dang)破(po)裂(lie)。

ii 反復凍(dong)融：將待(dai)破(po)碎(sui)的(de)細(xi)胞(bao)在-20 ^oC 以(yi)下冰凍(dong)，室溫(wen)融解，反復(fu)3 次，使(shi)細胞(bao)溶(rong)脹(zhang)破(po)碎(sui)。

4）將標本(ben)於(yu)2-8 ^oC 1500×g 離(li)心10 分(fen)鐘，收集上清(qing)備(bei)用(yong)。

5. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上清(qing)或其(qi)它(ta)生物(wu)標本(ben)：

請 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘，取上清(qing)即(ji)可檢(jian)測，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存(cun)，但(dan)應避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。

註意(yi)：

1.         以(yi)上標本(ben)均需密(mi)封(feng)保存(cun)，4^oC保存(cun)應小(xiao)於(yu)1周(zhou)，-20^oC不(bu)應超(chao)過1個月(yue)，-80^oC不應超(chao)過2個月(yue)。

2.         標本(ben)使(shi)用前(qian)應緩(huan)慢(man)均衡至室溫(wen)，不(bu)應加熱使(shi)之融解。

3.         實驗前(qian)紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液必(bi)須(xu)用(yong)標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液稀(xi)釋。

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)

1.         使用前(qian)將(jiang)所(suo)有的(de)試(shi)劑(ji)和(he)標本(ben)緩(huan)慢(man)均衡至室溫(wen)(18-25oC)，試(shi)劑(ji)不(bu)能直接(jie)在37oC溶(rong)解(jie)。

2.         標準(zhun)品(pin)(凍(dong)幹(gan)品(pin))：每瓶標準(zhun)品(pin)加入標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液1mL，蓋(gai)好(hao)後室溫(wen)靜(jing)置(zhi)大約10分(fen)鐘，同時反復顛(dian)倒(dao)/搓(cuo)動以(yi)助溶(rong)解(jie)，其濃度為(wei)1000pg/mL。準(zhun)備(bei)7個稀釋標準(zhun)品(pin)的(de)EP管，每個EP管中(zhong)加入150μL的標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液，如(ru)圖(tu)所(suo)示(shi)依(yi)次(ci)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋成不同(tong)的梯度(du)， 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作為(wei)空(kong)白孔(kong)。為保證(zheng)實驗結(jie)果(guo)有效(xiao)性(xing)，每次實(shi)驗請(qing)使(shi)用(yong)新(xin)的標準(zhun)品(pin)溶(rong)液。

3.         濃洗滌液：用580mL蒸餾水(shui)或去(qu)離(li)子水將20mL濃洗滌液稀(xi)釋至600mL，進行30倍(bei)稀釋。

標本(ben)處(chu)理

1.         本公(gong)司只對試(shi)劑(ji)盒(he)本(ben)身(shen)負責(ze)，不(bu)對(dui)因使(shi)用(yong)該試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)造(zao)成的樣(yang)本消耗負責(ze)，請(qing)使用者(zhe)使用前(qian)充(chong)分(fen)考慮到樣本(ben)的(de)可能使用(yong)量，預留充(chong)足(zu)的(de)樣(yang)本(ben)。

2.         實驗前(qian)應預(yu)測標本(ben)含(han)量，如果(guo)標本(ben)濃(nong)度過高，應對(dui)標本(ben)進(jin)行稀(xi)釋，使稀(xi)釋後的(de)標本(ben)符合(he)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)檢(jian)測範圍(wei)，計(ji)算時(shi)再(zai)乘以(yi)相(xiang)應的(de)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。

3.         若(ruo)所(suo)檢(jian)樣(yang)本(ben)不(bu)包含在說明(ming)書(shu)所(suo)列(lie)樣(yang)本(ben)之中(zhong)，建議(yi)進(jin)行(xing)預實(shi)驗(yan)驗證(zheng)其有效(xiao)性(xing)，並註(zhu)意(yi)留存(cun)樣(yang)本。

4.         使用化學(xue)裂(lie)解(jie)液制(zhi)備的(de)組(zu)織勻漿(jiang)或細(xi)胞(bao)提取液(ye)可能會由(you)於(yu)某(mou)些化學(xue)物(wu)質(zhi)的(de)引(yin)入導(dao)致  ELISA實(shi)驗結(jie)果(guo)偏差(cha)。

5.         若(ruo)樣(yang)本為細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上清(qing)，因該(gai)類(lei)樣本(ben)幹擾因素(su) 較(jiao)多(duo)，如(ru)：細(xi)胞(bao)狀態(tai)、細(xi)胞(bao)數(shu)量、采(cai)樣(yang)時(shi)間(jian)等，所(suo)以(yi)可能存在檢(jian)測不出(chu)的(de)情況(kuang)。

6.         某些天然蛋(dan)白(bai)或重組(zu)蛋(dan)白(bai)，包括(kuo)原核(he)及(ji)真核重組(zu)蛋(dan)白(bai)，可能因為(wei)與本(ben)產品(pin)所(suo)使(shi)用(yong)的(de)檢(jian)測抗體(ti)及捕獲抗體(ti)不匹配(pei)，而不(bu)被(bei)檢(jian)測出(chu)。

7.         建議(yi)使(shi)用(yong)新鮮(xian)樣(yang)本，保存(cun)時(shi)間(jian)過長(chang)可(ke)能會存(cun)在蛋(dan)白(bai)降解(jie)或變性導(dao)致實(shi)驗結(jie)果(guo)偏差(cha)。

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作步(bu)驟(zhou)

1.         加樣：分(fen)別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不(bu)加樣品(pin)及(ji)酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相(xiang)同）、標準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標包(bao)被(bei)板上標準(zhun)品(pin)準(zhun)確加樣50μl，待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先加樣品(pin)稀(xi)釋液40μl，然後(hou)再(zai)加待(dai)測樣品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)*終(zhong)稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei)）。加樣將(jiang)樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標板孔底(di)部，盡(jin)量不觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻。

2.         溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。  

3.         配(pei)液：將(jiang)20倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)20倍(bei)稀釋後備(bei)用(yong)

4.         洗滌：小心揭掉(diao)封(feng)板膜，棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄(qi)去(qu)，如(ru)此重復(fu)5次(ci)，拍幹(gan)。

5.         加酶(mei)：每孔加入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除外(wai)。

6.         溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同(tong)3。

7.         洗滌：操作同(tong)5。

8.         顯色：每孔先(xian)加入顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，37℃避(bi)光(guang)顯色(se)15分(fen)鐘.

9.         終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此時(shi)藍(lan)色立轉(zhuan)黃色(se)）。

10.     測定：以(yi)空(kong)白空(kong)調(tiao)零，450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測量各孔的吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定應在加終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)15分(fen)鐘以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

註意(yi)：

1.         試劑(ji)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)壹次實(shi)驗(yan)所(suo)需(xu)要(yao)的(de)酶(mei)標條(tiao)，其(qi)它(ta)的可(ke)從微(wei)孔板上拆(chai)下，密封(feng)，按照說明(ming)書(shu)要(yao)求保存(cun)，以(yi)備下(xia)次(ci)使用。

2.         加樣：實驗操作中(zhong)請使(shi)用(yong)壹次性(xing)的吸(xi)頭(tou)，避免交叉(cha)汙(wu)染。加樣時(shi)註(zhu)意(yi)不要(yao)有氣(qi)泡，將樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標板底(di)部，盡(jin)量不觸及孔(kong)壁(bi)，輕輕晃(huang)動混(hun)勻。加樣或加試劑(ji)時(shi)，**個孔與*後(hou)壹(yi)個孔加樣之間(jian)的時間(jian)間(jian)隔如果(guo)太大，將會(hui)導(dao)致不(bu)同的(de)“預溫(wen)育(yu)”時(shi)間(jian)，從而明(ming)顯(xian)地影響(xiang)到測量值(zhi)的(de)準(zhun)確性及(ji)重復(fu)性(xing)。因此，壹(yi)次(ci)加樣時(shi)間(jian)(包括(kuo)標準(zhun)品(pin)及(ji)所(suo)有樣(yang)品(pin))*好(hao)控(kong)制(zhi)在10分(fen)鐘內(nei)。推(tui)薦(jian)設置復孔進(jin)行(xing)實(shi)驗。

3.          溫(wen)育(yu)：為防(fang)止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸發(fa)，實(shi)驗(yan)時請(qing)將(jiang)加上蓋或覆膜的(de)酶(mei)標板置於(yu)濕(shi)盒(he)內(nei)，以(yi)避免(mian)液(ye)體(ti)蒸發(fa)，洗(xi)板後應盡(jin)快(kuai)進行(xing)下步(bu)操(cao)作(zuo)，任何(he)時(shi)侯都應避(bi)免(mian)酶(mei)標板處於(yu)幹(gan)燥狀態(tai)，同(tong)時應嚴(yan)格(ge)遵(zun)守給(gei)定的溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度(du)。

4.         洗滌：充(chong)分(fen)的洗滌非常(chang)重要(yao)，在每次洗(xi)滌過程(cheng)中(zhong)，都要將(jiang)洗滌(di)液完(wan)全(quan)甩(shuai)幹(gan)。洗(xi)滌(di)過程(cheng)中(zhong)反應孔(kong)中(zhong)殘(can)留的(de)洗(xi)滌液(ye)應在濾(lv)紙(zhi)上拍幹(gan)，勿(wu)將濾紙(zhi)直接(jie)放入反應孔(kong)中(zhong)吸(xi)水，同時(shi)要(yao)消除板底(di)殘(can)留的(de)液(ye)體(ti)和(he)手指印，避免影響(xiang)*後的(de)酶(mei)標儀(yi)讀(du)數(shu)。如果(guo)有自(zi)動(dong)洗板機(ji)，應在熟(shu)練使(shi)用後(hou)再用到正式實(shi) 驗(yan)過程(cheng)中(zhong)。

5.         反應時(shi)間(jian)的控(kong)制(zhi)：加入底(di)物後(hou)請定時觀(guan)察反(fan)應孔(kong)的(de)顏(yan)色變化(比(bi)如(ru)，每隔10分(fen)鐘觀(guan)察壹(yi)次(ci))，如顏(yan)色較(jiao)深，請提前(qian)加入終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應，避(bi)免(mian)反應過強(qiang)從(cong)而影響(xiang)酶(mei)標儀(yi)光(guang)密度(du)讀數(shu)。

6.         底(di)物：底(di)物請(qing)避光(guang)保存(cun)，在儲存和(he)溫(wen)育(yu)時(shi)避(bi)免(mian)強(qiang)光(guang)直接(jie)照射(she)。

7.         如果(guo)實驗室內(nei)濕(shi)度(du)低(di)於(yu)60%，推(tui)薦(jian)使用(yong)加濕(shi)器(qi)提高濕(shi)度(du)水(shui)平(ping)。

 實驗流程

1.         實驗前(qian)標準(zhun)品(pin)、試(shi)劑(ji)及(ji)樣(yang)本的準(zhun)備(bei)；

2.         加樣（標準(zhun)品(pin)及(ji)樣本）50μL，37℃孵(fu)育(yu)30分(fen)鐘；

3.         洗板5次，加酶(mei)標試(shi)劑(ji)50ul，37℃孵(fu)育(yu)半(ban)小(xiao)時(shi)；

4.         洗板5次；加入顯色液(ye)A，B各50ul,37℃孵(fu)育(yu)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘

5.         加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，立即(ji)450nm讀數(shu)。

6.    計(ji)算

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)計(ji)算

各標準(zhun)品(pin)及(ji)樣本O.D.值(zhi)扣(kou)除(chu)空(kong)白孔(kong)O.D.值(zhi)後(hou)作(zuo)圖(七(qi)點(dian)圖)，如(ru)設置復孔，則應取(qu)其(qi)平均值(zhi)計(ji)算。以(yi)標準(zhun)品(pin)的(de)濃度為(wei)縱坐(zuo)標(或對(dui)數(shu)坐標)，O.D.值(zhi)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(或對(dui)數(shu)坐標），繪(hui)出(chu)標準(zhun)曲(qu)線(xian)(*佳方(fang)程(cheng)式(shi)應依(yi)回歸方(fang)程計(ji)算的(de)R2值(zhi)來(lai)定(ding)，以(yi)R2值(zhi)越趨(qu)近(jin)於(yu)1為(wei)好)。推(tui)薦(jian)使用(yong)專(zhuan)業(ye)制(zhi)作曲(qu)線(xian)軟件(jian)進(jin)行(xing)分(fen)析，如curve expert 1.30，根(gen)據樣(yang)品(pin)O.D.值(zhi)，由(you)標準(zhun)曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應的(de)濃(nong)度，乘以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)；或用(yong)標準(zhun)物(wu)的濃度(du)與O.D.值(zhi)計(ji)算出(chu)標準(zhun)曲(qu)線(xian)的回歸方(fang)程式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的(de)O.D.值(zhi)代入方程式(shi)，計(ji)算出(chu)樣(yang)品(pin)濃(nong)度，再乘以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)，即(ji)為樣(yang)品(pin)的(de)實際濃(nong)度。

 特異(yi)性

本試劑(ji)盒(he)用(yong)於(yu)檢(jian)測猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)，經(jing)檢(jian)測與其(qi)它(ta)相(xiang)似物(wu)質(zhi)無明(ming)顯(xian)交(jiao)叉(cha)反(fan)應。

由於(yu)受到技(ji)術(shu)及樣(yang)本來(lai)源(yuan)的限制(zhi)，不可(ke)能完(wan)成對所(suo)有相(xiang)關或相(xiang)似物(wu)質(zhi)交(jiao)叉(cha)反(fan)應檢(jian)測，因此本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)有可(ke)能與未(wei)經(jing)檢(jian)測的其(qi)它(ta)物質(zhi)有交(jiao)叉(cha)反(fan)應。

 精密度

精密度用樣(yang)品(pin)測定值(zhi)的(de)變異(yi)系數(shu)CV表(biao)示。CV(%) = SD/mean×100

批內(nei)差(cha)：取同(tong)批次(ci)試(shi)劑(ji)盒(he)對(dui)低(di)、中(zhong)、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣(yang)本(ben)進行(xing)定量檢(jian)測,每份(fen)樣(yang)本(ben)連續(xu)測定20 次(ci)，分(fen)別計(ji)算不(bu)同(tong)濃(nong)度樣本(ben)的平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批間(jian)差(cha)：選取3個不同(tong)批次(ci)的(de)試劑(ji)盒(he)分(fen)別對低(di)、中(zhong)、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣(yang)本(ben)進行(xing)定量測定，每個樣本(ben)使(shi)用同(tong)壹(yi)試劑(ji)盒(he)重復(fu)測定8次(ci)，分(fen)別計(ji)算不(bu)同(tong)濃(nong)度樣本(ben)的平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批內(nei)差(cha)： CV<10%

批間(jian)差(cha)： CV<12%

猴腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死(si)因子(zi)α(TNFα)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)穩(wen)定性

經(jing)測定，試(shi)劑(ji)盒(he)在有效(xiao)期(qi)內(nei)按(an)推(tui)薦(jian)溫(wen)度(du)保存(cun)，其(qi)活(huo)性降(jiang)低(di)率小(xiao)於(yu)5%。

為減(jian)小外(wai)部因素(su)對(dui)試劑(ji)盒(he)破(po)壞(huai)前(qian)後(hou)檢(jian)測值(zhi)的(de)影響(xiang)，實驗(yan)室的環境條件需盡(jin)量保持(chi)壹(yi)致，尤(you)其(qi)是實驗室內(nei)溫(wen)度(du)、濕(shi)度(du)及(ji)溫(wen)育(yu)條(tiao)件(jian)。其(qi)次(ci)由同壹實(shi)驗員來(lai)進(jin)行操作可(ke)減(jian)少人(ren)為誤差(cha)。