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96T 僅(jin)供(gong)體外(wai)研(yan)究使(shi)用,不用於臨床(chuang)診斷!
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒
本(ben)試劑(ji)盒運(yun)用雙抗體夾(jia)心(xin)ELISA法(fa)定量測定雞血清、血漿、組織勻(yun)漿、細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液、細胞(bao)培(pei)養上清(qing)液和(he)其他生(sheng)物液體中(zhong)雞補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)含(han)量。
檢測範圍
31.25-2000ng/mL
*低(di)檢測限
11.2ng/mL
實驗(yan)原理(li)
將(jiang)雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)抗體包(bao)被於96孔微(wei)孔(kong)板(ban)中(zhong),制(zhi)成(cheng)固相載體,向(xiang)微(wei)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)入(ru)標(biao)準品(pin)或(huo)標(biao)本(ben),其(qi)中(zhong)的(de)雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)與(yu)連(lian)接(jie)於固相(xiang)載體上的(de)抗體結合,然後加入生(sheng)物素(su)化(hua)的(de)雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)抗體,將(jiang)未(wei)結合的(de)生(sheng)物素(su)化(hua)抗體洗(xi)凈後,加入HRP標(biao)記的(de)親和(he)素(su),再次(ci)徹底洗滌(di)後加入TMB底(di)物顯色。TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下轉化(hua)成藍色,並(bing)在酸的(de)作(zuo)用下轉化(hua)成*終的(de)黃色。顏色的(de)深(shen)淺和(he)樣品(pin)中(zhong)的(de)雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)呈(cheng)正(zheng)相關。用酶標(biao)儀在450nm波(bo)長(chang)下測定吸光度(du)(O.D.值),計(ji)算(suan)樣品(pin)濃(nong)度(du)。
試劑(ji)盒內容(rong)
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試劑(ji)名稱 |
數(shu)量 |
試劑(ji)名稱 |
數(shu)量 |
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96孔(kong)板(ban)(預包(bao)被) |
1 |
96孔(kong)板(ban)覆(fu)膜(mo) |
2 |
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標(biao)準品(pin) |
0.5ml×1 |
標(biao)準品(pin)稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
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顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
樣品(pin)稀(xi)釋液 |
6ml×1瓶 |
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顯色劑B液 |
6ml×1瓶 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
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酶(mei)標(biao)試劑(ji) |
6ml×1瓶 |
密封(feng)袋 |
1 |
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濃(nong)洗(xi)滌(di)液(30×) |
1×20mL |
使(shi)用說(shuo)明書 |
1 |
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒需(xu)自備的(de)設(she)備(bei)及(ji)試劑(ji)
1. 450±10nm濾(lv)光(guang)片的(de)酶(mei)標(biao)儀(建(jian)議(yi)儀器(qi)使(shi)用前(qian)提前(qian)預熱)
2. 單(dan)道(dao)或(huo)多(duo)道(dao)微(wei)量加(jia)液器(qi)及(ji)吸頭(tou)
3. 稀(xi)釋樣品(pin)的(de)EP管(guan)
4. 蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離子(zi)水
5. 吸(xi)水紙(zhi)
6. 盛(sheng)放(fang)洗液的(de)容(rong)器(qi)
試劑(ji)盒的(de)儲(chu)存及(ji)有效期
1. 未(wei)開(kai)封的(de)試劑(ji)盒:所(suo)有(you)試劑(ji)均(jun)按試劑(ji)瓶標(biao)簽(qian)上所(suo)示(shi)保存。請(qing)註(zhu)意(yi),收(shou)到試劑(ji)盒後請(qing)盡(jin)快(kuai)將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液,終止液保存於4℃,其他試劑(ji)保存於-20℃。
2. 使(shi)用後的(de)試劑(ji)盒:剩(sheng)余(yu)試劑(ji)仍(reng)需(xu)按照(zhao)試劑(ji)瓶標(biao)簽(qian)所(suo)示(shi)的(de)溫度(du)保存,開(kai)封(feng)後的(de)酶(mei)標(biao)板(ban)要加幹(gan)燥(zao)劑後密封(feng)保存於-20℃,避免潮(chao)濕(shi)。
註(zhu)意(yi):
試劑(ji)盒內酶(mei)標(biao)條可拆(chai)卸,按實驗(yan)需求(qiu)可分(fen)多(duo)次(ci)使(shi)用;使(shi)用後的(de)剩(sheng)余(yu)試劑(ji)盒建(jian)議(yi)在(zai)**實驗(yan)後 1個月(yue)內使(shi)用完畢(bi)。產品(pin)過(guo)期時(shi)間(jian)以盒子(zi)上的(de)標(biao)簽(qian)為(wei)準(zhun),保質(zhi)期內所(suo)有(you)組分(fen)都確保是穩定的(de)。
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒標(biao)本(ben)的(de)采(cai)集與保存
1. 血清:
將(jiang)收(shou)集於血清分(fen)離管(guan)的(de)全(quan)血標(biao)本(ben)在(zai)室溫放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時(shi)或(huo) 4oC 過(guo)夜(ye),然後 1000×g 離心(xin) 20 分(fen)鐘,取上清(qing)即(ji)可,或(huo)將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保存,但應(ying)避免反復(fu)凍(dong)融(rong)。
2. 血漿:
用 EDTA 或(huo)肝(gan)素(su)作為(wei)抗凝(ning)劑采(cai)集標(biao)本(ben),並(bing)將標(biao)本(ben)在(zai)采集後的(de) 30 分(fen)鐘內於 2-8oC 1000×g 離心(xin) 15 分(fen)鐘,取上清(qing)即(ji)可檢測,或(huo)將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保存,但應(ying)避免反復(fu)凍(dong)融(rong)。
3. 組織勻(yun)漿:
1) 取(qu)適(shi)量組織塊(kuai),於預冷(leng)PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中(zhong)清洗(xi)去(qu)除(chu)血液,稱重(zhong)後備用(組織塊(kuai)較大(da)需(xu)先(xian)剪(jian)碎(sui)後再勻漿(jiang));
2) 可(ke)同(tong)時(shi)選用多(duo)種勻漿(jiang)方法(fa)達到較(jiao)好(hao)的(de)破碎(sui)效果:首先(xian)將(jiang)組織塊(kuai)移入玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi),加(jia)入(ru)5-10mL 預冷(leng)PBS 進行(xing)充(chong)分(fen)研磨,該過(guo)程(cheng)需(xu)在冰上進行(xing)(有條件實驗(yan)室可(ke)選用機器(qi)勻(yun)漿(jiang));得(de)到的(de)勻(yun)漿(jiang)液可再(zai)利(li)用超聲破碎(sui)或(huo)反(fan)復凍融(rong) 進壹(yi)步(bu)處理(超聲破碎(sui)過(guo)程(cheng)中(zhong)註(zhu)意(yi)冰浴降溫;反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)法(fa)可重(zhong)復(fu)2 次(ci))。
3) 將(jiang)制(zhi)備(bei)好的(de)勻(yun)漿(jiang)液於5000×g 離心(xin)5 分(fen)鐘,留取上清(qing)即(ji)可檢測。
4. 細(xi)胞(bao)裂解(jie)液:
1)貼(tie)壁細胞(bao)需要先(xian)用胰酶消化(hua),離心(xin)收(shou)集細胞(bao)(懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)可(ke)直(zhi)接(jie)離心(xin)收(shou)集);
2)將(jiang)收(shou)集到的(de)細(xi)胞(bao)用冷(leng)PBS 洗(xi)3 次(ci);
3)物(wu)理(li)方法(fa)裂解(jie)細胞(bao)(可先(xian)超聲破碎(sui)細(xi)胞,再反復(fu)凍(dong)融(rong)):
i 超聲破碎(sui):取(qu)適量PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao),用壹(yi)定功率的(de)超聲波處理(li)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液,使(shi)細胞(bao)急(ji)劇(ju)震(zhen)蕩(dang)破裂。
ii 反(fan)復(fu)凍融(rong):將待(dai)破碎(sui)的(de)細(xi)胞(bao)在(zai)-20 oC 以(yi)下冰凍(dong),室溫融(rong)解(jie),反復(fu)3 次(ci),使(shi)細胞(bao)溶(rong)脹(zhang)破碎(sui)。
4)將(jiang)標(biao)本(ben)於2-8 oC 1500×g 離心(xin)10 分(fen)鐘,收(shou)集上清(qing)備(bei)用。
5. 細(xi)胞(bao)培養上清(qing)或(huo)其(qi)它生(sheng)物標(biao)本(ben):
請(qing) 1000×g 離心(xin) 20 分(fen)鐘,取上清(qing)即(ji)可檢測,或(huo)將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保存,但應(ying)避免反復(fu)凍(dong)融(rong)。
註(zhu)意(yi):
1. 以(yi)上標(biao)本(ben)均(jun)需(xu)密封(feng)保存,4oC保存應(ying)小於1周(zhou),-20oC不應(ying)超過(guo)1個月(yue),-80oC不(bu)應(ying)超過(guo)2個月(yue)。
2. 標(biao)本(ben)使(shi)用前(qian)應(ying)緩慢均(jun)衡至室溫,不(bu)應(ying)加熱使(shi)之融(rong)解(jie)。
3. 實驗(yan)前(qian)紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液必須(xu)用標(biao)準品(pin)稀釋液稀釋。
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒試劑(ji)準(zhun)備(bei)
1. 使(shi)用前(qian)將(jiang)所(suo)有(you)的(de)試劑(ji)和(he)標(biao)本(ben)緩慢均(jun)衡至室溫(18-25oC),試劑(ji)不(bu)能(neng)直(zhi)接(jie)在37oC溶(rong)解(jie)。
2. 標(biao)準品(pin)(凍(dong)幹(gan)品):每瓶標(biao)準品(pin)加入(ru)標(biao)準品(pin)稀釋液1mL,蓋好(hao)後室溫靜(jing)置(zhi)大(da)約(yue)10分(fen)鐘,同(tong)時(shi)反(fan)復顛倒/搓動(dong)以(yi)助溶(rong)解(jie),其濃(nong)度(du)為(wei)2000ng/mL。準(zhun)備(bei)7個稀(xi)釋標(biao)準品(pin)的(de)EP管(guan),每個EP管(guan)中(zhong)加入(ru)150μL的(de)標(biao)準品(pin)稀釋液,如(ru)圖所(suo)示(shi)依(yi)次(ci)倍比稀釋成(cheng)不(bu)同(tong)的(de)梯(ti)度(du), 標(biao)準品(pin)稀釋液(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作為(wei)空(kong)白孔。為保證(zheng)實驗(yan)結果有(you)效性,每次(ci)實驗(yan)請(qing)使(shi)用新的(de)標(biao)準品(pin)溶(rong)液。
3. 濃(nong)洗(xi)滌(di)液:用580mL蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離子(zi)水將(jiang)20mL濃(nong)洗(xi)滌(di)液稀釋至(zhi)600mL,進行(xing)30倍稀(xi)釋。
標(biao)本(ben)處(chu)理
1. 本(ben)公(gong)司只對(dui)試劑(ji)盒本(ben)身(shen)負責(ze),不(bu)對因使(shi)用該試劑(ji)盒所(suo)造(zao)成(cheng)的(de)樣本(ben)消耗(hao)負(fu)責(ze),請(qing)使(shi)用者(zhe)使(shi)用前(qian)充(chong)分(fen)考慮到樣本(ben)的(de)可(ke)能(neng)使(shi)用量,預留(liu)充(chong)足的(de)樣本(ben)。
2. 實驗(yan)前(qian)應(ying)預測標(biao)本(ben)含(han)量,如(ru)果(guo)標(biao)本(ben)濃(nong)度(du)過(guo)高,應(ying)對標(biao)本(ben)進行(xing)稀釋,使(shi)稀釋後的(de)標(biao)本(ben)符(fu)合試劑(ji)盒的(de)檢測範圍,計(ji)算(suan)時(shi)再(zai)乘以相(xiang)應(ying)的(de)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)。
3. 若所(suo)檢樣本(ben)不(bu)包(bao)含(han)在說(shuo)明書所(suo)列樣本(ben)之(zhi)中(zhong),建(jian)議(yi)進行(xing)預實驗(yan)驗(yan)證(zheng)其有效性,並(bing)註(zhu)意(yi)留存樣本(ben)。
4. 使(shi)用化(hua)學裂(lie)解(jie)液制(zhi)備(bei)的(de)組織勻(yun)漿或(huo)細(xi)胞提取液可能(neng)會(hui)由(you)於某些化(hua)學物(wu)質(zhi)的(de)引入導致 ELISA實驗(yan)結果偏差(cha)。
5. 若樣本(ben)為(wei)細胞(bao)培養上清(qing),因該類(lei)樣本(ben)幹(gan)擾因素(su) 較多(duo),如(ru):細(xi)胞狀態(tai)、細胞(bao)數量、采(cai)樣時(shi)間(jian)等,所(suo)以(yi)可(ke)能(neng)存在(zai)檢測不出的(de)情(qing)況。
6. 某些天然蛋白(bai)或(huo)重(zhong)組蛋白(bai),包(bao)括(kuo)原(yuan)核及(ji)真核重(zhong)組蛋白(bai),可能(neng)因為與本(ben)產(chan)品所(suo)使(shi)用的(de)檢測抗體及(ji)捕獲抗體不(bu)匹(pi)配,而(er)不被檢測出。
7. 建(jian)議(yi)使(shi)用新鮮樣本(ben),保存時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)可(ke)能(neng)會(hui)存在(zai)蛋(dan)白(bai)降解(jie)或(huo)變(bian)性導致實驗(yan)結果偏差(cha)。
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒操作(zuo)步(bu)驟(zhou)
1. 加(jia)樣:分(fen)別設(she)空(kong)白孔(空(kong)白對照(zhao)孔(kong)不加樣品(pin)及(ji)酶標(biao)試劑(ji),其(qi)余(yu)各(ge)步(bu)操作(zuo)相(xiang)同(tong))、標(biao)準孔(kong)、待測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板(ban)上標(biao)準品(pin)準確(que)加樣50μl,待(dai)測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋液40μl,然後再加待(dai)測樣品(pin)10μl(樣品(pin)*終稀釋度(du)為(wei)5倍)。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標(biao)板(ban)孔底(di)部,盡(jin)量不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁,輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。
2. 溫育(yu):用封板(ban)膜(mo)封板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘。
3. 配(pei)液:將20倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液用蒸(zheng)餾(liu)水20倍(bei)稀(xi)釋後備用
4. 洗(xi)滌(di):小心(xin)揭(jie)掉封板(ban)膜(mo),棄去(qu)液體,甩幹,每孔加滿(man)洗滌(di)液,靜置(zhi)30秒(miao)後棄去(qu),如(ru)此重(zhong)復(fu)5次(ci),拍(pai)幹(gan)。
5. 加(jia)酶(mei):每孔加入(ru)酶(mei)標(biao)試劑(ji)50μl,空(kong)白孔除外(wai)。
6. 溫育(yu):操作(zuo)同(tong)3。
7. 洗(xi)滌(di):操作(zuo)同(tong)5。
8. 顯色:每孔先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑A50μl,再(zai)加入(ru)顯色劑B50μl,輕輕震蕩(dang)混(hun)勻,37℃避光顯色15分(fen)鐘.
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反(fan)應(ying)(此時(shi)藍色立轉黃色)。
10. 測定:以空(kong)白空(kong)調(tiao)零(ling),450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測量各(ge)孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)(OD值)。 測定應(ying)在加(jia)終止液後15分(fen)鐘以內進行(xing)。
註(zhu)意(yi):
1. 試劑(ji)準(zhun)備(bei):準(zhun)備(bei)壹(yi)次(ci)實驗(yan)所(suo)需(xu)要的(de)酶(mei)標(biao)條,其它的(de)可(ke)從微(wei)孔(kong)板(ban)上拆(chai)下,密封(feng),按照(zhao)說(shuo)明書要求保存,以(yi)備(bei)下次(ci)使(shi)用。
2. 加(jia)樣:實驗(yan)操作(zuo)中(zhong)請(qing)使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou),避(bi)免交(jiao)叉(cha)汙染。加樣時(shi)註(zhu)意(yi)不要有氣(qi)泡,將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標(biao)板(ban)底部(bu),盡(jin)量不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁,輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。加(jia)樣或(huo)加(jia)試劑(ji)時(shi),**個孔(kong)與(yu)*後壹(yi)個孔(kong)加(jia)樣之(zhi)間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔如(ru)果(guo)太大(da),將(jiang)會(hui)導致不同(tong)的(de)“預溫育(yu)”時(shi)間(jian),從而明顯地(di)影(ying)響(xiang)到測量值的(de)準(zhun)確(que)性(xing)及(ji)重(zhong)復(fu)性。因此,壹(yi)次(ci)加樣時(shi)間(jian)(包(bao)括(kuo)標(biao)準品(pin)及(ji)所(suo)有(you)樣品(pin))*好(hao)控(kong)制(zhi)在(zai)10分(fen)鐘內。推(tui)薦(jian)設置(zhi)復(fu)孔(kong)進行(xing)實驗(yan)。
3. 溫育(yu):為(wei)防止(zhi)樣品(pin)蒸(zheng)發(fa),實驗(yan)時(shi)請(qing)將加(jia)上蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜(mo)的(de)酶(mei)標(biao)板(ban)置(zhi)於濕盒內,以(yi)避(bi)免液體蒸(zheng)發(fa),洗(xi)板(ban)後應(ying)盡(jin)快(kuai)進行(xing)下步(bu)操作(zuo),任(ren)何(he)時(shi)侯(hou)都(dou)應(ying)避免酶標(biao)板(ban)處於幹燥(zao)狀態(tai),同(tong)時(shi)應(ying)嚴格(ge)遵守(shou)給(gei)定(ding)的(de)溫育(yu)時(shi)間(jian)和(he)溫度(du)。
4. 洗(xi)滌(di):充(chong)分(fen)的(de)洗(xi)滌(di)非(fei)常重(zhong)要,在每次(ci)洗滌過(guo)程(cheng)中(zhong),都要將洗(xi)滌(di)液完全(quan)甩幹。洗(xi)滌過(guo)程(cheng)中(zhong)反應(ying)孔中(zhong)殘(can)留(liu)的(de)洗(xi)滌(di)液應(ying)在濾(lv)紙(zhi)上拍(pai)幹(gan),勿將濾(lv)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放(fang)入反應(ying)孔中(zhong)吸水,同(tong)時(shi)要消除(chu)板(ban)底殘(can)留(liu)的(de)液體和(he)手(shou)指印(yin),避免影響(xiang)*後的(de)酶(mei)標(biao)儀讀數。如(ru)果(guo)有自動(dong)洗(xi)板(ban)機,應(ying)在熟(shu)練(lian)使(shi)用後再用到正(zheng)式實 驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)。
5. 反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的(de)控(kong)制(zhi):加(jia)入(ru)底物(wu)後請(qing)定時(shi)觀(guan)察(cha)反(fan)應(ying)孔的(de)顏色變(bian)化(hua)(比如(ru),每隔10分(fen)鐘觀察(cha)壹(yi)次(ci)),如(ru)顏色較深(shen),請(qing)提前(qian)加(jia)入(ru)終止液終止反(fan)應(ying),避免反應(ying)過(guo)強(qiang)從而影響(xiang)酶(mei)標(biao)儀光密度(du)讀數。
6. 底(di)物(wu):底(di)物(wu)請(qing)避光(guang)保存,在(zai)儲(chu)存和(he)溫育(yu)時(shi)避(bi)免強光(guang)直(zhi)接(jie)照(zhao)射(she)。
7. 如(ru)果(guo)實驗(yan)室內濕(shi)度(du)低(di)於60%,推(tui)薦(jian)使(shi)用加濕器(qi)提高濕度水平。
實驗(yan)流程
1. 實驗(yan)前(qian)標(biao)準品(pin)、試劑(ji)及(ji)樣本(ben)的(de)準(zhun)備(bei);
2. 加(jia)樣(標(biao)準品(pin)及(ji)樣本(ben))50μL,37℃孵(fu)育(yu)30分(fen)鐘;
3. 洗(xi)板(ban)5次(ci),加酶標(biao)試劑(ji)50ul,37℃孵(fu)育(yu)半(ban)小時(shi);
4. 洗(xi)板(ban)5次(ci);加入顯色液A,B各(ge)50ul,37℃孵(fu)育(yu)顯色15分(fen)鐘
5. 加(jia)終止液50μL,立即(ji)450nm讀數。
6. 計(ji)算(suan)
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒計(ji)算(suan)
各(ge)標(biao)準品(pin)及(ji)樣本(ben)O.D.值扣除空(kong)白孔O.D.值後作圖(七(qi)點圖),如(ru)設(she)置(zhi)復(fu)孔(kong),則(ze)應(ying)取其(qi)平均(jun)值計(ji)算(suan)。以(yi)標(biao)準品(pin)的(de)濃(nong)度(du)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao)),O.D.值為橫(heng)坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao)),繪出標(biao)準曲(qu)線(xian)(*佳(jia)方(fang)程(cheng)式應(ying)依回(hui)歸方(fang)程(cheng)計(ji)算(suan)的(de)R2值來(lai)定(ding),以(yi)R2值越趨近(jin)於1為好(hao))。推(tui)薦(jian)使(shi)用專業制(zhi)作(zuo)曲(qu)線(xian)軟(ruan)件(jian)進行(xing)分(fen)析(xi),如(ru)curve expert 1.30,根(gen)據(ju)樣品(pin)O.D.值,由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)查(zha)出相應(ying)的(de)濃(nong)度(du),乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu);或(huo)用標(biao)準物(wu)的(de)濃(nong)度(du)與(yu)O.D.值計(ji)算(suan)出(chu)標(biao)準曲(qu)線(xian)的(de)回(hui)歸方(fang)程(cheng)式,將樣品(pin)的(de)O.D.值代入方程式,計(ji)算(suan)出(chu)樣品(pin)濃(nong)度(du),再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu),即為(wei)樣品(pin)的(de)實際濃(nong)度(du)。
特(te)異(yi)性(xing)
本(ben)試劑(ji)盒用於檢測雞補體成(cheng)分(fen)3(C3),經檢測與其它相(xiang)似(si)物(wu)質(zhi)無明(ming)顯交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
由(you)於受到技(ji)術(shu)及(ji)樣本(ben)來(lai)源(yuan)的(de)限(xian)制(zhi),不(bu)可能(neng)完(wan)成對(dui)所(suo)有(you)相(xiang)關或(huo)相(xiang)似(si)物(wu)質(zhi)交(jiao)叉(cha)反應(ying)檢測,因此本(ben)試劑(ji)盒有(you)可能(neng)與(yu)未經檢測的(de)其(qi)它(ta)物(wu)質(zhi)有交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
精(jing)密度(du)
精(jing)密度(du)用樣品(pin)測定值的(de)變(bian)異(yi)系(xi)數(shu)CV表示(shi)。CV(%) = SD/mean×100
批內差(cha):取同(tong)批次(ci)試劑(ji)盒對(dui)低(di)、中(zhong)、高值定值樣本(ben)進行(xing)定量檢測,每份(fen)樣本(ben)連(lian)續(xu)測定20 次(ci),分(fen)別計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的(de)平均(jun)值及(ji)SD值。
批間(jian)差(cha):選取3個不(bu)同(tong)批次(ci)的(de)試劑(ji)盒分(fen)別對(dui)低(di)、中(zhong)、高值定值樣本(ben)進行(xing)定量測定,每個樣本(ben)使(shi)用同(tong)壹(yi)試劑(ji)盒重(zhong)復(fu)測定8次(ci),分(fen)別計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的(de)平均(jun)值及(ji)SD值。
批內差(cha): CV<10%
批間(jian)差(cha): CV<12%
雞(ji)補(bu)體成(cheng)分(fen)3(C3)ELISA試劑(ji)盒穩定性(xing)
經測定,試劑(ji)盒在(zai)有效期內按推(tui)薦(jian)溫度(du)保存,其(qi)活(huo)性(xing)降低(di)率小於5%。
為(wei)減(jian)小外部因素(su)對試劑(ji)盒破壞(huai)前(qian)後檢測值的(de)影(ying)響(xiang),實驗(yan)室的(de)環(huan)境(jing)條件需盡(jin)量保持(chi)壹(yi)致,尤其是實驗(yan)室內溫度(du)、濕(shi)度(du)及(ji)溫育(yu)條件。其次(ci)由(you)同(tong)壹(yi)實驗(yan)員來(lai)進行(xing)操作(zuo)可(ke)減(jian)少人(ren)為誤(wu)差(cha)。



