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      1. <dl id="Ht0T0p"></dl>

        1. 產(chan)品(pin)詳情
          • 產(chan)品(pin)名稱(cheng):雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)

          • 產(chan)品(pin)型號:MBL
          • 產(chan)品(pin)廠(chang)商:KALANG
          • 產(chan)品(pin)文檔:
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          簡單介(jie)紹:
          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)運(yun)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)ELISA法定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)雞(ji)血(xue)清、血(xue)漿、組(zu)織勻漿(jiang)、細胞裂解液、細胞培養(yang)上(shang)清液和(he)其(qi)他(ta)生(sheng)物(wu)液體(ti)中(zhong)雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)含(han)量(liang)。
          詳情介紹:


                                                                 96T       僅(jin)供(gong)體(ti)外(wai)研究(jiu)使用(yong),不用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷(duan)!

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)

          本(ben)試劑盒(he)運(yun)用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)ELISA法定(ding)量(liang)測(ce)定(ding)雞(ji)血(xue)清、血(xue)漿、組(zu)織勻漿(jiang)、細胞裂解液、細胞培養(yang)上(shang)清液和(he)其(qi)他(ta)生(sheng)物(wu)液體(ti)中(zhong)雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)含(han)量(liang)。

           檢(jian)測(ce)範(fan)圍

          1.563-100ng/mL

           *低(di)檢(jian)測(ce)限(xian)

          0.57ng/mL

           實驗(yan)原(yuan)理(li)

          將(jiang)雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)抗(kang)體(ti)包(bao)被於(yu)96孔(kong)微孔(kong)板中(zhong),制(zhi)成固(gu)相載(zai)體(ti),向(xiang)微孔(kong)中(zhong)分別(bie)加入標準(zhun)品(pin)或(huo)標本(ben),其(qi)中的雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)與連(lian)接(jie)於(yu)固(gu)相載(zai)體(ti)上(shang)的抗體(ti)結(jie)合,然(ran)後加入生(sheng)物(wu)素化(hua)的(de)雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)抗(kang)體(ti),將(jiang)未結(jie)合的(de)生(sheng)物(wu)素化(hua)抗(kang)體(ti)洗(xi)凈後,加入HRP標記(ji)的親和(he)素(su),再(zai)次徹底洗(xi)滌(di)後加入TMB底物顯色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色(se),並在(zai)酸(suan)的作用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)呈正相關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm波長(chang)下測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(O.D.),計(ji)算樣(yang)品(pin)濃度。

           試劑盒(he)內(nei)容

          試劑名稱(cheng)

          數(shu)量(liang)

          試劑名稱(cheng)

          數(shu)量(liang)

          96孔(kong)板(預(yu)包(bao)被)

          1

          96孔(kong)板覆(fu)膜

          2

          標(biao)準品(pin)

          0.5ml×1

          標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液

          1.5ml×1瓶(ping)

          顯色(se)劑A

          6ml×1瓶(ping)

          樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液

          6ml×1瓶(ping)

          顯色(se)劑B

          6ml×1瓶(ping)

          終(zhong)止(zhi)液

          6ml×1瓶(ping)

          酶(mei)標試劑

          6ml×1瓶(ping)

          密(mi)封(feng)袋(dai)

          1

          濃(nong)洗(xi)滌(di)液(30×)

          1×20mL

          使(shi)用(yong)說明(ming)書(shu)

          1

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)需(xu)自(zi)備的設備及(ji)試劑

          1.         450±10nm濾(lv)光(guang)片(pian)的酶(mei)標(biao)儀(yi)(建(jian)議儀(yi)器使用(yong)前提(ti)前預(yu)熱(re))

          2.         單道(dao)或(huo)多(duo)道(dao)微量(liang)加液器及(ji)吸頭(tou)

          3.         稀(xi)釋(shi)樣(yang)品(pin)的EP

          4.         蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水

          5.         吸(xi)水紙(zhi)

          6.         盛放洗(xi)液的(de)容器

           試劑盒(he)的(de)儲存(cun)及(ji)有(you)效(xiao)期

          1.         未(wei)開封(feng)的試劑盒(he):所(suo)有(you)試劑均(jun)按試劑瓶(ping)標(biao)簽上(shang)所示保存(cun)。請註(zhu)意,收(shou)到試劑盒(he)後請(qing)盡快將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液,終(zhong)止(zhi)液保(bao)存(cun)於(yu)4℃,其(qi)他(ta)試劑保(bao)存(cun)於(yu)-20℃。

          2.         使(shi)用(yong)後的(de)試劑盒(he):剩余試劑仍需(xu)按照試劑瓶(ping)標(biao)簽所示的溫度保存(cun),開封(feng)後的(de)酶標(biao)板要(yao)加幹燥劑後密(mi)封(feng)保存(cun)於(yu)-20℃,避(bi)免潮(chao)濕。

          註(zhu)意:

          試劑盒(he)內(nei)酶標(biao)條(tiao)可拆卸,按實驗(yan)需(xu)求(qiu)可(ke)分多(duo)次使用(yong);使用(yong)後的(de)剩余試劑盒(he)建(jian)議在(zai)**實驗(yan)後 1個月內(nei)使用(yong)完(wan)畢。產(chan)品(pin)過(guo)期時(shi)間以(yi)盒(he)子(zi)上(shang)的標簽為準(zhun),保質期內(nei)所有(you)組(zu)分都確(que)保是穩(wen)定(ding)的。

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)標(biao)本(ben)的采集(ji)與保(bao)存(cun)

          1.         血(xue)清

          將(jiang)收集(ji)於(yu)血(xue)清分離(li)管的(de)全(quan)血(xue)標本(ben)在(zai)室(shi)溫放置(zhi) 2 小時(shi)或(huo) 4oC 過(guo)夜,然(ran)後 1000×g 離(li)心(xin) 20 分鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke),或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存(cun),但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。

          2.         血(xue)漿:

          用(yong) EDTA 或(huo)肝素(su)作為(wei)抗(kang)凝劑采(cai)集(ji)標本(ben),並將標本在(zai)采集(ji)後的(de) 30 分鐘(zhong)內(nei)於(yu) 2-8oC 1000×g 離(li)心(xin) 15 分鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce),或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存(cun),但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。

          3. 組(zu)織勻漿(jiang):

          1) 取(qu)適量(liang)組織塊,於(yu)預(yu)冷(leng)PBS0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中(zhong)清洗(xi)去(qu)除(chu)血(xue)液,稱(cheng)重後備(bei)用(yong)(組織塊較大需先剪碎(sui)後再(zai)勻漿(jiang));

          2) 可(ke)同(tong)時(shi)選用(yong)多(duo)種(zhong)勻漿(jiang)方法達(da)到較好的破碎(sui)效(xiao)果(guo):首(shou)先(xian)將(jiang)組織塊移(yi)入玻璃勻漿(jiang)器,加入5-10mL 預冷(leng)PBS 進行充分研(yan)磨(mo),該過(guo)程需在(zai)冰上(shang)進行(有(you)條(tiao)件(jian)實驗(yan)室(shi)可選用(yong)機器勻漿(jiang));得到的勻漿(jiang)液可(ke)再(zai)利(li)用(yong)超聲(sheng)破碎(sui)或(huo)反復凍(dong)融(rong) 進壹(yi)步(bu)處理(超聲(sheng)破碎(sui)過(guo)程中註(zhu)意冰(bing)浴(yu)降溫(wen);反復凍(dong)融(rong)法可(ke)重復2 次)。

          3) 將(jiang)制備(bei)好的勻漿(jiang)液於(yu)5000×g 離(li)心(xin)5 分鐘(zhong),留(liu)取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)。

          4. 細胞裂解液:

          1)貼壁(bi)細胞需要先用(yong)胰(yi)酶(mei)消(xiao)化(hua),離(li)心(xin)收集(ji)細胞(懸(xuan)浮細胞可直(zhi)接(jie)離(li)心(xin)收集(ji));

          2)將(jiang)收集(ji)到的細胞用(yong)冷PBS 洗(xi)3 次;

          3)物(wu)理方(fang)法裂(lie)解細胞(可先超聲(sheng)破碎(sui)細胞,再反復凍(dong)融(rong)):

          i 超(chao)聲(sheng)破碎(sui):取(qu)適量(liang)PBS 重懸(xuan)細胞,用(yong)壹(yi)定功(gong)率的超聲(sheng)波處(chu)理細胞懸(xuan)液,使(shi)細胞急劇震(zhen)蕩(dang)破裂(lie)。

          ii 反(fan)復凍(dong)融(rong):將待破碎(sui)的(de)細胞在(zai)-20 oC 以(yi)下冰(bing)凍(dong),室(shi)溫融(rong)解,反(fan)復3 次,使細胞溶脹破碎(sui)。

          4)將(jiang)標本(ben)於(yu)2-8 oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分鐘(zhong),收(shou)集(ji)上(shang)清備用(yong)。

          5. 細胞培養(yang)上(shang)清或(huo)其它生(sheng)物(wu)標本:

          請(qing) 1000×g 離(li)心(xin) 20 分鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce),或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或(huo)-80oC 保存(cun),但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。

          註(zhu)意:

          1.         以(yi)上(shang)標本均(jun)需密(mi)封(feng)保存(cun)4oC保(bao)存(cun)應(ying)小於(yu)1周(zhou),-20oC不應(ying)超(chao)過(guo)1個月,-80oC不應(ying)超(chao)過(guo)2個月。

          2.         標(biao)本使(shi)用(yong)前應(ying)緩慢(man)均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫,不應(ying)加熱使之融(rong)解。

          3.         實驗(yan)前(qian)紅(hong)細胞裂解液必(bi)須(xu)用(yong)標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液稀(xi)釋(shi)。

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)試劑準(zhun)備(bei)

          1.         使(shi)用(yong)前將(jiang)所有(you)的(de)試劑和(he)標(biao)本(ben)緩慢(man)均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫(18-25oC),試劑不能(neng)直(zhi)接(jie)在(zai)37oC溶解(jie)。

          2.         標(biao)準品(pin)(凍(dong)幹品(pin)):每瓶(ping)標(biao)準(zhun)品(pin)加入標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液1mL,蓋好後室(shi)溫靜置(zhi)大約10分鐘(zhong),同(tong)時(shi)反(fan)復顛倒/搓動以助溶解(jie),其(qi)濃(nong)度為100ng/mL。準(zhun)備7個稀釋(shi)標準品(pin)的EP管,每個EP管中(zhong)加入150μL的標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液,如(ru)圖(tu)所(suo)示(shi)依(yi)次倍比稀釋(shi)成不同(tong)的梯(ti)度, 標準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作為(wei)空(kong)白孔(kong)。為保證實驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效(xiao)性(xing),每次實驗(yan)請(qing)使(shi)用(yong)新(xin)的標準品(pin)溶液。

           

           

           

          3.         濃(nong)洗(xi)滌(di)液:用(yong)580mL蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水將(jiang)20mL濃(nong)洗(xi)滌(di)液稀(xi)釋(shi)至600mL,進行30倍稀(xi)釋(shi)。

          標(biao)本處(chu)理

          1.         本(ben)公(gong)司只(zhi)對(dui)試劑盒(he)本(ben)身(shen)負責,不對因使用(yong)該試劑盒(he)所(suo)造(zao)成的樣(yang)本(ben)消(xiao)耗(hao)負(fu)責,請使(shi)用(yong)者使(shi)用(yong)前充(chong)分考(kao)慮(lv)到樣(yang)本(ben)的(de)可能(neng)使(shi)用(yong)量(liang),預留(liu)充(chong)足(zu)的樣(yang)本(ben)。

          2.         實驗(yan)前(qian)應(ying)預(yu)測(ce)標(biao)本(ben)含(han)量(liang),如(ru)果(guo)標(biao)本(ben)濃度過(guo)高,應(ying)對(dui)標(biao)本(ben)進行稀釋(shi),使稀釋(shi)後的(de)標本(ben)符合試劑盒(he)的(de)檢(jian)測(ce)範(fan)圍,計(ji)算(suan)時(shi)再(zai)乘以相應(ying)的(de)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)。

          3.         若(ruo)所檢(jian)樣(yang)本(ben)不包含(han)在(zai)說明(ming)書(shu)所(suo)列(lie)樣(yang)本(ben)之(zhi)中,建(jian)議進行預實驗(yan)驗(yan)證其有(you)效(xiao)性(xing),並註意(yi)留存(cun)樣(yang)本(ben)。

          4.         使(shi)用(yong)化(hua)學(xue)裂(lie)解(jie)液制(zhi)備(bei)的組(zu)織勻漿(jiang)或(huo)細胞提取(qu)液可(ke)能(neng)會(hui)由(you)於(yu)某(mou)些(xie)化(hua)學(xue)物(wu)質的引(yin)入導(dao)致(zhi)  ELISA實驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差。

          5.         若(ruo)樣(yang)本(ben)為(wei)細胞培養(yang)上(shang)清,因該類(lei)樣(yang)本(ben)幹(gan)擾因素 較多(duo),如(ru):細胞狀態、細胞數(shu)量(liang)、采樣(yang)時(shi)間等(deng),所以可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)檢(jian)測(ce)不出(chu)的情況。

          6.         某(mou)些(xie)天然(ran)蛋白或(huo)重組(zu)蛋白,包(bao)括原(yuan)核及(ji)真(zhen)核重組(zu)蛋白,可(ke)能(neng)因為與本(ben)產(chan)品(pin)所使用(yong)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)及(ji)捕(bu)獲抗體(ti)不匹配,而(er)不被檢(jian)測(ce)出(chu)。

          7.         建(jian)議使(shi)用(yong)新(xin)鮮樣(yang)本(ben),保(bao)存(cun)時(shi)間過(guo)長可(ke)能(neng)會(hui)存(cun)在(zai)蛋白降解(jie)或(huo)變(bian)性(xing)導(dao)致(zhi)實驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差。

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)操作步(bu)驟

          1.         加樣(yang):分別(bie)設空白(bai)孔(kong)(空白對(dui)照孔不加樣(yang)品(pin)及(ji)酶標(biao)試劑,其(qi)余(yu)各步(bu)操作相同(tong))、標準(zhun)孔、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔。在(zai)酶標(biao)包被(bei)板上(shang)標準品(pin)準確(que)加樣(yang)50μl,待測(ce)樣(yang)品(pin)孔中先加樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液40μl,然(ran)後再(zai)加待測(ce)樣(yang)品(pin)10μl(樣(yang)品(pin)*終稀釋(shi)度為5倍(bei))。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板孔(kong)底部(bu),盡量(liang)不觸及(ji)孔壁(bi),輕(qing)輕(qing)晃動混勻。

          2.         溫(wen)育:用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後置(zhi)37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。  

          3.         配液:將(jiang)20倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌(di)液用(yong)蒸餾(liu)水20倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)

          4.         洗(xi)滌(di):小心(xin)揭掉封(feng)板膜,棄(qi)去(qu)液體(ti),甩(shuai)幹,每孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液,靜置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去(qu),如(ru)此重復5次,拍幹(gan)。

          5.         加酶:每孔(kong)加入酶標(biao)試劑50μl,空(kong)白(bai)孔除(chu)外。

          6.         溫(wen)育:操作同(tong)3

          7.         洗(xi)滌(di):操作同(tong)5

          8.         顯色(se):每孔(kong)先(xian)加入顯色(se)劑A50μl,再(zai)加入顯色(se)劑B50μl,輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻,37℃避(bi)光(guang)顯色(se)15分鐘(zhong).

          9.         終(zhong)止(zhi):每孔(kong)加終止(zhi)液50μl,終(zhong)止(zhi)反應(ying)(此時(shi)藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se))。

          10.     測(ce)定(ding):以(yi)空(kong)白空調(tiao)零,450nm波長(chang)依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(OD值)。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終止(zhi)液後15分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行。

          註(zhu)意:

          1.         試劑準(zhun)備(bei)準(zhun)備壹(yi)次實驗(yan)所(suo)需(xu)要(yao)的酶(mei)標(biao)條,其它的可從(cong)微孔(kong)板上(shang)拆下,密(mi)封(feng),按照說明(ming)書(shu)要(yao)求(qiu)保存(cun),以備(bei)下次使用(yong)。

          2.         加樣(yang)實驗(yan)操作中(zhong)請(qing)使用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸頭(tou),避免交(jiao)叉汙(wu)染。加樣(yang)時(shi)註(zhu)意(yi)不要有(you)氣(qi)泡(pao),將樣(yang)品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板底部(bu),盡量(liang)不觸及(ji)孔壁(bi),輕(qing)輕(qing)晃動混勻。加樣(yang)或(huo)加試劑時(shi),**個孔與*後壹(yi)個孔加樣(yang)之(zhi)間的(de)時(shi)間間隔(ge)如(ru)果(guo)太(tai)大,將會導(dao)致(zhi)不同(tong)的“預(yu)溫育”時(shi)間,從(cong)而明(ming)顯地影(ying)響(xiang)到測(ce)量(liang)值的(de)準(zhun)確(que)性(xing)及(ji)重復性(xing)。因此,壹(yi)次加樣(yang)時(shi)間(包(bao)括標準(zhun)品(pin)及(ji)所有(you)樣(yang)品(pin))*好控制在(zai)10分鐘(zhong)內(nei)。推薦設置(zhi)復孔進行實驗(yan)。

          3.          溫(wen)育為(wei)防止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸發(fa),實驗(yan)時(shi)請(qing)將(jiang)加上(shang)蓋或(huo)覆膜的(de)酶(mei)標板置(zhi)於(yu)濕盒(he)內(nei),以避(bi)免液體(ti)蒸(zheng)發(fa),洗(xi)板後應(ying)盡快進行下步(bu)操作,任(ren)何(he)時(shi)侯都應(ying)避(bi)免酶標板處(chu)於(yu)幹(gan)燥狀態,同(tong)時(shi)應(ying)嚴(yan)格遵(zun)守(shou)給(gei)定的(de)溫育時(shi)間和(he)溫(wen)度。

          4.         洗(xi)滌(di):充(chong)分的(de)洗(xi)滌(di)非(fei)常(chang)重要(yao),在(zai)每次洗(xi)滌(di)過(guo)程中,都要(yao)將(jiang)洗(xi)滌(di)液完(wan)全(quan)甩(shuai)幹(gan)。洗(xi)滌(di)過(guo)程中反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)殘(can)留的洗(xi)滌(di)液應(ying)在(zai)濾紙(zhi)上(shang)拍幹,勿將濾(lv)紙直(zhi)接(jie)放入反應(ying)孔(kong)中(zhong)吸(xi)水,同(tong)時(shi)要(yao)消(xiao)除(chu)板底殘留的(de)液體(ti)和(he)手指(zhi)印(yin),避(bi)免影響(xiang)*後的(de)酶標(biao)儀讀(du)數(shu)。如(ru)果(guo)有(you)自(zi)動洗(xi)板機(ji),應(ying)在(zai)熟練(lian)使用(yong)後再(zai)用(yong)到正式(shi)實 驗(yan)過(guo)程中。

          5.         反(fan)應(ying)時(shi)間的(de)控制加入底物後請(qing)定時(shi)觀察(cha)反應(ying)孔(kong)的(de)顏色(se)變(bian)化(hua)(比如(ru),每隔(ge)10分鐘(zhong)觀察(cha)壹(yi)次),如(ru)顏色(se)較深(shen),請(qing)提(ti)前加入終止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反應(ying),避(bi)免反應(ying)過(guo)強從(cong)而影(ying)響(xiang)酶(mei)標(biao)儀光(guang)密(mi)度讀數(shu)。

          6.         底物底物請避(bi)光(guang)保存(cun),在(zai)儲存(cun)和(he)溫(wen)育(yu)時(shi)避(bi)免強光(guang)直(zhi)接(jie)照射(she)。

          7.         如(ru)果(guo)實驗(yan)室(shi)內(nei)濕度低(di)於(yu)60%,推薦使用(yong)加濕器提高濕度水平(ping)。

           實驗(yan)流(liu)程

          1.         實驗(yan)前(qian)標(biao)準(zhun)品(pin)、試劑及(ji)樣(yang)本(ben)的(de)準備;

          2.         加樣(yang)(標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)樣(yang)本(ben))50μL37孵(fu)育30分鐘(zhong);

          3.         洗(xi)板5次,加酶標試劑50ul37孵(fu)育半(ban)小時(shi);

          4.         洗(xi)板5次;加入顯色(se)液AB各(ge)50ul,37孵(fu)育顯色(se)15分鐘(zhong)

          5.         加終止(zhi)液50μL,立(li)即(ji)450nm讀(du)數(shu)。

          6.    計(ji)算

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)計(ji)算(suan)

          各(ge)標準(zhun)品(pin)及(ji)樣(yang)本(ben)O.D.值(zhi)扣除(chu)空白孔(kong)O.D.值後作圖(tu)(七(qi)點圖(tu)),如(ru)設置(zhi)復孔,則應(ying)取(qu)其平(ping)均(jun)值計(ji)算。以(yi)標準品(pin)的濃度為縱(zong)坐標(biao)(或(huo)對數(shu)坐標(biao))O.D.值(zhi)為橫(heng)坐標(biao)(或(huo)對數(shu)坐標(biao)),繪(hui)出(chu)標準(zhun)曲線(xian)(*佳(jia)方程式應(ying)依(yi)回歸(gui)方(fang)程計算(suan)的R2值(zhi)來(lai)定(ding),以(yi)R2值越(yue)趨近於(yu)1為(wei)好)。推薦使用(yong)專(zhuan)業(ye)制(zhi)作曲線(xian)軟(ruan)件(jian)進行分析(xi),如(ru)curve expert 1.30,根(gen)據樣(yang)品(pin)O.D.值,由標準(zhun)曲線(xian)查出(chu)相應(ying)的(de)濃(nong)度,乘以稀釋(shi)倍數(shu);或(huo)用(yong)標準(zhun)物的(de)濃(nong)度與O.D.值(zhi)計算(suan)出(chu)標準(zhun)曲線(xian)的(de)回(hui)歸方(fang)程式,將(jiang)樣(yang)品(pin)的O.D.值代入方程式,計(ji)算出(chu)樣(yang)品(pin)濃度,再乘以稀釋(shi)倍數(shu),即(ji)為(wei)樣(yang)品(pin)的實際(ji)濃(nong)度。

           特(te)異性(xing)

          本(ben)試劑盒(he)用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL),經(jing)檢(jian)測(ce)與其(qi)它相似(si)物(wu)質無明(ming)顯交(jiao)叉反(fan)應(ying)。

          由(you)於(yu)受(shou)到技(ji)術及(ji)樣(yang)本(ben)來(lai)源的(de)限(xian)制(zhi),不可能(neng)完(wan)成對所有(you)相關(guan)或(huo)相似(si)物(wu)質交(jiao)叉反(fan)應(ying)檢(jian)測(ce),因此本試劑盒(he)有(you)可(ke)能(neng)與未(wei)經檢(jian)測(ce)的(de)其(qi)它物質有(you)交(jiao)叉反(fan)應(ying)。

           精(jing)密(mi)度

          精(jing)密(mi)度用(yong)樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)值(zhi)的(de)變(bian)異系(xi)數(shu)CV表(biao)示(shi)。CV(%) = SD/mean×100

          批(pi)內(nei)差:取(qu)同(tong)批(pi)次試劑盒(he)對(dui)低(di)、中(zhong)、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行定量(liang)檢(jian)測(ce),每份(fen)樣(yang)本(ben)連(lian)續(xu)測(ce)定(ding)20 次,分別(bie)計算(suan)不同(tong)濃度樣(yang)本(ben)的(de)平均(jun)值及(ji)SD值。

          批(pi)間差(cha):選取(qu)3個不同(tong)批(pi)次的試劑盒(he)分別(bie)對低(di)、中(zhong)、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行定量(liang)測(ce)定(ding),每個樣(yang)本(ben)使(shi)用(yong)同(tong)壹(yi)試劑盒(he)重復測(ce)定(ding)8次,分別(bie)計算(suan)不同(tong)濃度樣(yang)本(ben)的(de)平均(jun)值及(ji)SD值。

          批(pi)內(nei)差: CV<10%

          批(pi)間差(cha): CV<12%

          雞(ji)甘露糖(tang)結(jie)合蛋白(MBL)ELISA試劑盒(he)穩(wen)定(ding)性(xing)

          經(jing)測(ce)定(ding),試劑盒(he)在(zai)有(you)效(xiao)期內(nei)按推薦溫度保存(cun),其活(huo)性(xing)降低(di)率小於(yu)5%

          為(wei)減小外(wai)部(bu)因素對(dui)試劑盒(he)破壞(huai)前(qian)後檢(jian)測(ce)值(zhi)的(de)影(ying)響(xiang),實驗(yan)室(shi)的環(huan)境(jing)條件(jian)需(xu)盡量(liang)保持(chi)壹(yi)致(zhi),尤(you)其是實驗(yan)室(shi)內(nei)溫度、濕度及(ji)溫育(yu)條件(jian)。其(qi)次由同(tong)壹(yi)實驗(yan)員來進行操作可(ke)減少(shao)人為誤(wu)差。


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