產品名稱(cheng)：雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)

                                                       96T       僅(jin)供(gong)體(ti)外研究(jiu)使用(yong)，不用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷!

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)

本(ben)試劑盒(he)運(yun)用(yong)雙抗(kang)體夾心(xin)ELISA法定(ding)量測定雞(ji)血清、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)、細(xi)胞裂解(jie)液(ye)、細(xi)胞培養(yang)上(shang)清液(ye)和其他(ta)生物液(ye)體(ti)中(zhong)雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)含(han)量。

 檢(jian)測(ce)範(fan)圍

7.813-500 pg/mL

 *低(di)檢(jian)測(ce)限

2.5 pg/mL

 實(shi)驗(yan)原理

將雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)抗(kang)體包被於96孔(kong)微孔(kong)板(ban)中(zhong)，制成(cheng)固相(xiang)載體(ti)，向(xiang)微孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品或標(biao)本(ben)，其中(zhong)的雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)與連接(jie)於固相(xiang)載體(ti)上(shang)的抗(kang)體結合(he)，然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)生物素化(hua)的雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)抗(kang)體，將未(wei)結合(he)的生(sheng)物素化(hua)抗(kang)體洗(xi)凈後(hou)，加(jia)入(ru)HRP標(biao)記(ji)的親(qin)和素，再(zai)次徹(che)底(di)洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)入(ru)TMB底(di)物顯(xian)色。TMB在過(guo)氧(yang)化(hua)物酶的催(cui)化(hua)下轉化成(cheng)藍色，並(bing)在酸(suan)的作用(yong)下轉化成(cheng)*終(zhong)的黃色。顏色的深(shen)淺(qian)和樣品中(zhong)的雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)呈正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm波長下測定(ding)吸(xi)光(guang)度(O.D.值)，計算樣品濃(nong)度。

 試(shi)劑盒(he)內(nei)容(rong)

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)需(xu)自備(bei)的設備(bei)及試(shi)劑

1.         450±10nm濾(lv)光(guang)片的酶標(biao)儀(建(jian)議儀器使用前提前預熱(re))

2.         單(dan)道或多(duo)道微量加(jia)液(ye)器及吸(xi)頭

3.         稀(xi)釋(shi)樣品的EP管(guan)

4.         蒸(zheng)餾水(shui)或去離(li)子(zi)水(shui)

5.         吸(xi)水(shui)紙

6.         盛(sheng)放洗(xi)液(ye)的容(rong)器

 試(shi)劑盒(he)的儲(chu)存(cun)及有(you)效期(qi)

1.         未(wei)開封(feng)的試(shi)劑(ji)盒(he)：所有(you)試劑均按(an)試(shi)劑瓶標(biao)簽上(shang)所示(shi)保存。請(qing)註意(yi)，收(shou)到試(shi)劑盒(he)後(hou)請(qing)盡(jin)快(kuai)將TMB 洗(xi)滌(di)液(ye)，終(zhong)止(zhi)液(ye)保(bao)存於4℃，其(qi)他(ta)試劑保存於-20℃。

2.         使(shi)用後(hou)的試(shi)劑(ji)盒(he)：剩余(yu)試劑仍(reng)需(xu)按(an)照試劑(ji)瓶標(biao)簽所(suo)示的溫(wen)度保(bao)存，開封(feng)後(hou)的酶標(biao)板(ban)要加(jia)幹(gan)燥(zao)劑後(hou)密(mi)封(feng)保(bao)存於-20℃，避(bi)免(mian)潮(chao)濕(shi)。

註意(yi)：

試(shi)劑盒(he)內(nei)酶標(biao)條可(ke)拆卸，按(an)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)可(ke)分(fen)多(duo)次使(shi)用；使(shi)用後(hou)的剩余(yu)試劑盒(he)建(jian)議在**實(shi)驗(yan)後(hou) 1個(ge)月(yue)內(nei)使(shi)用(yong)完(wan)畢。產品過(guo)期(qi)時(shi)間(jian)以(yi)盒(he)子(zi)上(shang)的標(biao)簽為(wei)準(zhun)，保(bao)質(zhi)期(qi)內(nei)所(suo)有(you)組(zu)分(fen)都(dou)確(que)保是(shi)穩定(ding)的。

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)標(biao)本(ben)的采集(ji)與保(bao)存(cun)

1.         血(xue)清：

將收集(ji)於(yu)血(xue)清分(fen)離(li)管的全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)在室溫(wen)放置(zhi) 2 小(xiao)時或 4^oC 過(guo)夜，然(ran)後(hou) 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)，或將上清(qing)置(zhi)於-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。

2.         血(xue)漿(jiang)：

用(yong) EDTA 或肝素作為(wei)抗(kang)凝劑(ji)采集(ji)標(biao)本(ben)，並(bing)將標(biao)本(ben)在采集(ji)後(hou)的 30 分(fen)鐘(zhong)內(nei)於(yu) 2-8^oC 1000×g 離(li)心(xin) 15 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)，或將上清(qing)置(zhi)於-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。

3. 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：

1） 取(qu)適量組(zu)織(zhi)塊，於(yu)預冷(leng)PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中(zhong)清洗(xi)去除(chu)血液(ye)，稱(cheng)重(zhong)後(hou)備(bei)用(yong)（組(zu)織(zhi)塊較(jiao)大需(xu)先(xian)剪碎(sui)後(hou)再(zai)勻(yun)漿(jiang)）；

2） 可(ke)同(tong)時選(xuan)用多(duo)種勻(yun)漿(jiang)方(fang)法達到較好(hao)的破碎(sui)效果(guo)：首(shou)先(xian)將組(zu)織(zhi)塊移入(ru)玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)器，加(jia)入(ru)5-10mL 預冷(leng)PBS 進(jin)行(xing)充(chong)分(fen)研磨(mo)，該過(guo)程(cheng)需(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)進(jin)行(xing)（有(you)條件實(shi)驗(yan)室可(ke)選(xuan)用(yong)機器勻(yun)漿(jiang)）；得(de)到(dao)的勻(yun)漿(jiang)液(ye)可(ke)再(zai)利(li)用超(chao)聲(sheng)破碎(sui)或反(fan)復(fu)凍融(rong) 進壹(yi)步(bu)處理(li)（超(chao)聲(sheng)破碎(sui)過(guo)程(cheng)中(zhong)註意(yi)冰(bing)浴降溫(wen)；反(fan)復(fu)凍融(rong)法可(ke)重(zhong)復(fu)2 次）。

3） 將制備(bei)好(hao)的勻(yun)漿(jiang)液(ye)於(yu)5000×g 離心(xin)5 分(fen)鐘(zhong)，留取上清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)。

4. 細(xi)胞裂解(jie)液(ye)：

1）貼(tie)壁細(xi)胞(bao)需(xu)要先(xian)用胰酶消(xiao)化(hua)，離(li)心(xin)收集(ji)細(xi)胞(bao)（懸浮細胞(bao)可(ke)直(zhi)接(jie)離心(xin)收集(ji)）；

2）將收集(ji)到(dao)的細(xi)胞(bao)用冷(leng)PBS 洗(xi)3 次；

3）物理(li)方(fang)法裂解(jie)細胞（可(ke)先(xian)超(chao)聲(sheng)破碎(sui)細胞(bao)，再(zai)反(fan)復(fu)凍融(rong)）：

i 超(chao)聲(sheng)破碎(sui)：取適量PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，用(yong)壹定功(gong)率的超(chao)聲(sheng)波(bo)處(chu)理細胞懸液(ye)，使(shi)細胞急(ji)劇震(zhen)蕩(dang)破裂。

ii 反(fan)復(fu)凍融(rong)：將待破碎(sui)的細(xi)胞(bao)在-20 ^oC 以(yi)下冰凍，室(shi)溫(wen)融(rong)解(jie)，反(fan)復(fu)3 次，使(shi)細胞(bao)溶脹破碎(sui)。

4）將標(biao)本(ben)於2-8 ^oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)，收集(ji)上(shang)清(qing)備(bei)用(yong)。

5. 細(xi)胞培養(yang)上清或其它生(sheng)物標(biao)本(ben)：

請(qing) 1000×g 離心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)，或將上清(qing)置(zhi)於-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。

註意(yi)：

1.         以(yi)上標(biao)本(ben)均需(xu)密(mi)封(feng)保(bao)存(cun)，4^oC保(bao)存應(ying)小(xiao)於1周(zhou)，-20^oC不應(ying)超(chao)過(guo)1個(ge)月(yue)，-80^oC不應(ying)超(chao)過(guo)2個(ge)月(yue)。

2.         標(biao)本(ben)使用前應(ying)緩慢(man)均衡至(zhi)室(shi)溫(wen)，不應(ying)加(jia)熱(re)使之(zhi)融(rong)解(jie)。

3.         實(shi)驗(yan)前紅細胞裂解(jie)液(ye)必須(xu)用(yong)標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)。

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)試劑準(zhun)備(bei)

1.         使(shi)用前將所有(you)的試(shi)劑(ji)和標(biao)本(ben)緩慢(man)均衡至(zhi)室(shi)溫(wen)(18-25oC)，試(shi)劑不能直(zhi)接(jie)在37oC溶解(jie)。

2.         標(biao)準(zhun)品(凍幹(gan)品)：每瓶(ping)標(biao)準(zhun)品加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)1mL，蓋(gai)好(hao)後(hou)室(shi)溫(wen)靜(jing)置(zhi)大約(yue)10分(fen)鐘(zhong)，同(tong)時反(fan)復(fu)顛(dian)倒/搓動以(yi)助溶解(jie)，其濃(nong)度為(wei)500 pg/mL。準(zhun)備(bei)7個(ge)稀(xi)釋(shi)標(biao)準(zhun)品的EP管(guan)，每個(ge)EP管中(zhong)加(jia)入(ru)150μL的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)，如(ru)圖所示(shi)依次倍(bei)比稀(xi)釋(shi)成不同(tong)的梯(ti)度， 標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直(zhi)接作為(wei)空(kong)白孔(kong)。為保證(zheng)實(shi)驗(yan)結果有(you)效性，每次實(shi)驗(yan)請使用新(xin)的標(biao)準(zhun)品溶液(ye)。

3.         濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)：用(yong)580mL蒸(zheng)餾水(shui)或去離(li)子(zi)水(shui)將20mL濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)稀(xi)釋(shi)至(zhi)600mL，進(jin)行30倍稀(xi)釋(shi)。

標(biao)本(ben)處理

1.         本(ben)公司只(zhi)對(dui)試劑(ji)盒(he)本(ben)身(shen)負(fu)責(ze)，不對因(yin)使(shi)用該試劑盒(he)所造成的樣(yang)本(ben)消(xiao)耗(hao)負責(ze)，請使(shi)用者使用(yong)前充分(fen)考(kao)慮到樣本(ben)的可(ke)能(neng)使(shi)用量，預留充足的樣(yang)本(ben)。

2.         實(shi)驗(yan)前應(ying)預測(ce)標(biao)本(ben)含量，如(ru)果標(biao)本(ben)濃(nong)度過(guo)高(gao)，應(ying)對標(biao)本(ben)進行稀(xi)釋(shi)，使稀(xi)釋(shi)後(hou)的標(biao)本(ben)符合(he)試(shi)劑(ji)盒(he)的檢(jian)測(ce)範(fan)圍，計算時再(zai)乘以(yi)相(xiang)應(ying)的稀(xi)釋(shi)倍數(shu)。

3.         若(ruo)所檢(jian)樣(yang)本(ben)不包含(han)在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)所(suo)列樣(yang)本(ben)之(zhi)中(zhong)，建(jian)議進行(xing)預實(shi)驗(yan)驗證(zheng)其(qi)有(you)效性，並(bing)註意(yi)留存樣本(ben)。

4.         使(shi)用化學(xue)裂解(jie)液(ye)制(zhi)備(bei)的組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)或細胞提(ti)取液(ye)可(ke)能(neng)會(hui)由於某些化學物質(zhi)的引(yin)入(ru)導致  ELISA實(shi)驗(yan)結果偏差(cha)。

5.         若(ruo)樣本(ben)為細胞(bao)培(pei)養上(shang)清，因(yin)該類樣本(ben)幹擾因(yin)素 較(jiao)多(duo)，如(ru)：細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)、細胞(bao)數量、采樣時(shi)間(jian)等，所以(yi)可(ke)能(neng)存(cun)在檢(jian)測(ce)不出(chu)的情(qing)況。

6.         某(mou)些天然(ran)蛋白或重(zhong)組(zu)蛋白，包括原(yuan)核(he)及真(zhen)核(he)重(zhong)組(zu)蛋白，可(ke)能(neng)因(yin)為與本(ben)產品所使(shi)用(yong)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體及捕(bu)獲抗(kang)體不匹配(pei)，而(er)不被檢(jian)測(ce)出(chu)。

7.         建(jian)議使用(yong)新鮮(xian)樣(yang)本(ben)，保存時(shi)間(jian)過(guo)長(chang)可(ke)能(neng)會(hui)存在蛋白降解(jie)或變性導(dao)致實(shi)驗(yan)結果偏差(cha)。

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)操作步(bu)驟(zhou)

1.         加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品及酶標(biao)試劑(ji)，其余各(ge)步(bu)操作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣品孔(kong)。在酶標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣(yang)50μl，待測樣品孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣品10μl（樣品*終(zhong)稀(xi)釋(shi)度為(wei)5倍）。加(jia)樣(yang)將樣品加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部，盡(jin)量(liang)不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻(yun)。

2.         溫(wen)育(yu)：用封(feng)板(ban)膜(mo)封板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。  

3.         配(pei)液(ye)：將20倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)20倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)

4.         洗(xi)滌(di)：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液(ye)體(ti)，甩幹，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒後(hou)棄(qi)去，如(ru)此重(zhong)復(fu)5次，拍(pai)幹。

5.         加(jia)酶：每孔(kong)加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外。

6.         溫(wen)育(yu)：操作同(tong)3。

7.         洗(xi)滌(di)：操作同(tong)5。

8.         顯(xian)色：每孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色15分(fen)鐘(zhong).

9.         終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍色立轉黃色）。

10.     測(ce)定：以(yi)空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依序測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度（OD值）。 測(ce)定應(ying)在加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

註意(yi)：

1.         試(shi)劑準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)壹(yi)次實(shi)驗(yan)所需(xu)要的酶標(biao)條，其它(ta)的可(ke)從(cong)微孔(kong)板(ban)上(shang)拆下，密封(feng)，按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)要求(qiu)保(bao)存，以(yi)備(bei)下次使(shi)用。

2.         加(jia)樣(yang)：實(shi)驗(yan)操作中(zhong)請使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭(tou)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。加(jia)樣(yang)時註意(yi)不要有(you)氣(qi)泡，將樣品加(jia)於(yu)酶標(biao)板(ban)底(di)部，盡(jin)量(liang)不觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻(yun)。加(jia)樣(yang)或加(jia)試(shi)劑時，**個(ge)孔(kong)與*後(hou)壹(yi)個(ge)孔(kong)加(jia)樣(yang)之(zhi)間(jian)的時(shi)間(jian)間(jian)隔如(ru)果太(tai)大(da)，將會導(dao)致不同(tong)的“預(yu)溫(wen)育(yu)”時間(jian)，從而(er)明顯(xian)地影(ying)響到測(ce)量值的準(zhun)確(que)性及重(zhong)復(fu)性。因(yin)此，壹次加(jia)樣(yang)時間(jian)(包括標(biao)準(zhun)品及所(suo)有(you)樣品)*好(hao)控制在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內(nei)。推(tui)薦(jian)設置(zhi)復(fu)孔(kong)進行實(shi)驗(yan)。

3.          溫(wen)育(yu)：為(wei)防(fang)止(zhi)樣品蒸發，實(shi)驗(yan)時請將加(jia)上(shang)蓋(gai)或覆膜的酶標(biao)板(ban)置(zhi)於濕(shi)盒(he)內(nei)，以(yi)避(bi)免(mian)液(ye)體(ti)蒸發，洗(xi)板(ban)後(hou)應(ying)盡快(kuai)進(jin)行下步(bu)操作，任(ren)何(he)時侯(hou)都(dou)應(ying)避(bi)免(mian)酶標(biao)板(ban)處(chu)於幹(gan)燥(zao)狀(zhuang)態(tai)，同(tong)時應(ying)嚴格遵守(shou)給定(ding)的溫(wen)育(yu)時間(jian)和溫(wen)度。

4.         洗(xi)滌(di)：充(chong)分(fen)的洗(xi)滌(di)非(fei)常(chang)重(zhong)要，在(zai)每次洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中(zhong)，都(dou)要將洗(xi)滌(di)液(ye)完(wan)全甩幹。洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中(zhong)反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)殘留的洗(xi)滌(di)液(ye)應(ying)在濾(lv)紙上拍(pai)幹(gan)，勿將濾(lv)紙直接(jie)放入反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)吸水(shui)，同(tong)時要消(xiao)除(chu)板(ban)底(di)殘留的液(ye)體(ti)和手(shou)指印，避(bi)免(mian)影響(xiang)*後(hou)的酶標(biao)儀讀數(shu)。如(ru)果有(you)自動洗(xi)板(ban)機，應(ying)在熟(shu)練(lian)使(shi)用(yong)後(hou)再(zai)用(yong)到(dao)正式實(shi) 驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)。

5.         反(fan)應(ying)時間(jian)的控(kong)制(zhi)：加(jia)入(ru)底(di)物後(hou)請(qing)定(ding)時(shi)觀(guan)察(cha)反(fan)應(ying)孔(kong)的顏(yan)色變化(hua)(比如(ru)，每隔10分(fen)鐘(zhong)觀(guan)察(cha)壹(yi)次)，如(ru)顏色較深(shen)，請(qing)提前加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)過(guo)強(qiang)從而(er)影響(xiang)酶標(biao)儀光(guang)密(mi)度讀數(shu)。

6.         底(di)物：底(di)物請(qing)避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)，在(zai)儲(chu)存(cun)和溫(wen)育(yu)時避(bi)免(mian)強(qiang)光(guang)直(zhi)接(jie)照射。

7.         如(ru)果實(shi)驗(yan)室內(nei)濕(shi)度低(di)於(yu)60%，推薦(jian)使(shi)用加(jia)濕(shi)器提高濕(shi)度水(shui)平(ping)。

 實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)

1.         實(shi)驗(yan)前標(biao)準(zhun)品、試劑(ji)及樣(yang)本(ben)的準(zhun)備(bei)；

2.         加(jia)樣(yang)（標(biao)準(zhun)品及樣(yang)本(ben)）50μL，37℃孵育30分(fen)鐘(zhong)；

3.         洗(xi)板(ban)5次，加(jia)酶標(biao)試劑(ji)50ul，37℃孵育半小(xiao)時；

4.         洗(xi)板(ban)5次；加(jia)入(ru)顯色液(ye)A，B各(ge)50ul,37℃孵育顯色15分(fen)鐘(zhong)

5.         加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，立即(ji)450nm讀數(shu)。

6.    計算

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)計算

各(ge)標(biao)準(zhun)品及樣(yang)本(ben)O.D.值扣(kou)除(chu)空(kong)白孔(kong)O.D.值後(hou)作圖(七點圖)，如(ru)設置(zhi)復(fu)孔(kong)，則(ze)應(ying)取其(qi)平(ping)均值計算。以(yi)標(biao)準(zhun)品的濃(nong)度為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(或對數坐(zuo)標(biao))，O.D.值為(wei)橫坐(zuo)標(biao)(或對數坐(zuo)標(biao)），繪(hui)出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(*佳方程(cheng)式應(ying)依回歸方程計算的R2值來(lai)定，以(yi)R2值越(yue)趨近(jin)於(yu)1為(wei)好(hao))。推薦(jian)使(shi)用專(zhuan)業(ye)制作曲(qu)線軟(ruan)件進(jin)行分(fen)析(xi)，如(ru)curve expert 1.30，根(gen)據(ju)樣(yang)品O.D.值，由標(biao)準(zhun)曲(qu)線查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的濃(nong)度，乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)；或用標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度與O.D.值計算出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線的回歸方程式，將樣品的O.D.值代(dai)入方(fang)程式，計算出(chu)樣品濃(nong)度，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數(shu)，即(ji)為(wei)樣(yang)品的實(shi)際(ji)濃(nong)度。

 特(te)異(yi)性(xing)

本(ben)試劑盒(he)用於檢(jian)測(ce)雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)，經(jing)檢(jian)測(ce)與其(qi)它(ta)相(xiang)似(si)物質(zhi)無明顯交叉(cha)反(fan)應(ying)。

由於受到技術(shu)及樣(yang)本(ben)來(lai)源的限(xian)制(zhi)，不可(ke)能(neng)完(wan)成對所有(you)相(xiang)關(guan)或相(xiang)似(si)物質(zhi)交叉(cha)反(fan)應(ying)檢(jian)測(ce)，因此本(ben)試劑盒(he)有(you)可(ke)能(neng)與未(wei)經檢(jian)測(ce)的其(qi)它(ta)物質(zhi)有(you)交叉反(fan)應(ying)。

 精(jing)密度

精(jing)密度用(yong)樣品測定(ding)值的變(bian)異(yi)系(xi)數(shu)CV表(biao)示(shi)。CV(%) = SD/mean×100

批(pi)內(nei)差(cha)：取同(tong)批(pi)次試(shi)劑盒(he)對低(di)、中(zhong)、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce),每份(fen)樣本(ben)連續(xu)測定20 次，分(fen)別計算不同(tong)濃(nong)度樣(yang)本(ben)的平(ping)均值及SD值。

批(pi)間(jian)差(cha)：選取3個(ge)不同(tong)批(pi)次的試(shi)劑(ji)盒(he)分(fen)別對(dui)低(di)、中(zhong)、高值定(ding)值樣(yang)本(ben)進行定(ding)量(liang)測定(ding)，每個(ge)樣本(ben)使用同(tong)壹試(shi)劑盒(he)重(zhong)復(fu)測定(ding)8次，分(fen)別計算不同(tong)濃(nong)度樣(yang)本(ben)的平(ping)均值及SD值。

批(pi)內(nei)差(cha)： CV<10%

批(pi)間(jian)差(cha)： CV<12%

雞(ji)核(he)因(yin)子(zi)κB受體激活(huo)因(yin)子(zi)配(pei)基(ji)(RANκL)ELISA試(shi)劑盒(he)穩定性

經(jing)測定，試(shi)劑盒(he)在有(you)效期(qi)內(nei)按(an)推(tui)薦(jian)溫(wen)度保(bao)存，其(qi)活性(xing)降(jiang)低(di)率小(xiao)於5%。

為(wei)減(jian)小(xiao)外部因(yin)素對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)破壞(huai)前後(hou)檢(jian)測(ce)值的影(ying)響(xiang)，實(shi)驗(yan)室的環(huan)境(jing)條件需(xu)盡(jin)量(liang)保(bao)持(chi)壹(yi)致，尤其是(shi)實(shi)驗(yan)室內(nei)溫(wen)度、濕(shi)度及溫(wen)育(yu)條件。其(qi)次由同(tong)壹實(shi)驗(yan)員來(lai)進行(xing)操作可(ke)減(jian)少(shao)人(ren)為誤(wu)差(cha)。