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授(shou)權(quan)代(dai)理(li)品牌(pai)
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ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 農殘(can)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)
- 馬ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 牛(niu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 魚(yu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 人ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Human
- 小(xiao)鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Mouse
- 大(da)鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Rat
- 羊ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Sheep
- 兔(tu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/ Rabbi...
- 豬ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Porcin...
- 豚鼠ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Guine...
- 狗(gou)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/ Canin...
- 雞ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/Chicke...
- 鴨ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 植(zhi)物(wu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 猴(hou)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)/ Monke...
- 其他(ta)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 抗體(ti)
- 蛋(dan)白(bai)
- CLIA試(shi)劑(ji)盒(he)
- 細(xi)胞生(sheng)物(wu)學(xue)
- 分(fen)子生物(wu)學(xue)/常(chang)用試(shi)劑(ji)
96T 僅供體(ti)外(wai)研(yan)究使(shi)用,不(bu)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)!
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)運用雙抗(kang)體(ti)夾心ELISA法(fa)定(ding)量測定(ding)雞血清(qing)、血漿、組織勻漿、細(xi)胞(bao)裂解液(ye)、細胞(bao)培養上(shang)清液(ye)和其(qi)他(ta)生物(wu)液體(ti)中(zhong)雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)含(han)量。
檢測範(fan)圍(wei)
0.625-40ng/mL
*低檢測限
0.02ng/mL
實驗原理(li)
將(jiang)雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)抗(kang)體(ti)包被(bei)於96孔(kong)微(wei)孔(kong)板(ban)中(zhong),制(zhi)成固相(xiang)載體(ti),向(xiang)微(wei)孔(kong)中(zhong)分(fen)別(bie)加入(ru)標(biao)準品(pin)或標(biao)本(ben),其中(zhong)的(de)雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)與(yu)連(lian)接於固(gu)相(xiang)載體(ti)上(shang)的抗(kang)體(ti)結(jie)合,然(ran)後加入(ru)生(sheng)物(wu)素(su)化(hua)的雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)抗(kang)體(ti),將(jiang)未(wei)結(jie)合的(de)生物(wu)素(su)化(hua)抗體(ti)洗(xi)凈(jing)後(hou),加入(ru)HRP標(biao)記的(de)親(qin)和素(su),再次徹(che)底(di)洗(xi)滌(di)後加入(ru)TMB底(di)物(wu)顯(xian)色。TMB在過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍色,並在酸的作(zuo)用下轉(zhuan)化(hua)成*終的黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品中(zhong)的(de)雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)呈(cheng)正相(xiang)關。用酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波長下測定(ding)吸光(guang)度(O.D.值),計(ji)算(suan)樣品濃度。
試(shi)劑(ji)盒(he)內容
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試(shi)劑(ji)名稱(cheng) |
數(shu)量 |
試(shi)劑(ji)名稱(cheng) |
數(shu)量 |
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96孔(kong)板(ban)(預包被(bei)) |
1 |
96孔(kong)板(ban)覆(fu)膜 |
2 |
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標(biao)準(zhun)品(pin) |
0.5ml×1 |
標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液(ye) |
1.5ml×1瓶(ping) |
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顯(xian)色劑(ji)A液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
樣品稀釋(shi)液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
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顯(xian)色劑(ji)B液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
終止液 |
6ml×1瓶(ping) |
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酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji) |
6ml×1瓶(ping) |
密(mi)封(feng)袋(dai) |
1 |
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濃洗滌液(30×) |
1×20mL |
使(shi)用說明(ming)書(shu) |
1 |
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)需自備(bei)的(de)設備(bei)及(ji)試(shi)劑(ji)
1. 450±10nm濾(lv)光(guang)片的(de)酶(mei)標(biao)儀(建議(yi)儀器使(shi)用前(qian)提(ti)前(qian)預熱)
2. 單道(dao)或(huo)多道(dao)微(wei)量加液器及(ji)吸(xi)頭(tou)
3. 稀(xi)釋(shi)樣品的EP管
4. 蒸(zheng)餾(liu)水或去(qu)離子水
5. 吸(xi)水紙
6. 盛(sheng)放(fang)洗液(ye)的容器
試(shi)劑(ji)盒(he)的儲存(cun)及(ji)有效(xiao)期
1. 未(wei)開(kai)封(feng)的試(shi)劑(ji)盒(he):所有試(shi)劑(ji)均按(an)試(shi)劑(ji)瓶(ping)標(biao)簽上(shang)所示(shi)保(bao)存(cun)。請(qing)註意,收到(dao)試(shi)劑(ji)盒(he)後請(qing)盡快將(jiang)TMB 洗(xi)滌液,終止液保(bao)存(cun)於4℃,其(qi)他(ta)試(shi)劑(ji)保(bao)存(cun)於-20℃。
2. 使(shi)用後的(de)試(shi)劑(ji)盒(he):剩(sheng)余(yu)試(shi)劑(ji)仍需按(an)照(zhao)試(shi)劑(ji)瓶(ping)標(biao)簽所(suo)示的(de)溫(wen)度保(bao)存(cun),開(kai)封後的酶(mei)標(biao)板(ban)要加幹燥(zao)劑(ji)後(hou)密封(feng)保(bao)存(cun)於-20℃,避(bi)免(mian)潮濕(shi)。
註意:
試(shi)劑(ji)盒(he)內酶(mei)標(biao)條(tiao)可(ke)拆卸(xie),按(an)實驗需求可分(fen)多(duo)次使(shi)用;使用後的(de)剩(sheng)余(yu)試(shi)劑(ji)盒(he)建議(yi)在(zai)**實驗後 1個月內(nei)使用完畢。產品(pin)過期(qi)時(shi)間(jian)以(yi)盒(he)子上(shang)的標(biao)簽為(wei)準(zhun),保(bao)質期(qi)內(nei)所有組分(fen)都確保(bao)是穩定(ding)的(de)。
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)標本(ben)的采集與(yu)保(bao)存(cun)
1. 血清(qing):
將(jiang)收(shou)集於血清(qing)分(fen)離(li)管的(de)全血標(biao)本(ben)在室(shi)溫(wen)放置(zhi) 2 小(xiao)時(shi)或(huo) 4oC 過夜(ye),然(ran)後 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可,或(huo)將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存(cun),但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。
2. 血漿:
用 EDTA 或肝(gan)素(su)作(zuo)為(wei)抗(kang)凝(ning)劑(ji)采(cai)集標(biao)本(ben),並將標(biao)本(ben)在采集後(hou)的 30 分(fen)鐘(zhong)內於 2-8oC 1000×g 離(li)心 15 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測,或(huo)將上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存(cun),但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。
3. 組織勻漿:
1) 取(qu)適量組織塊,於預冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中(zhong)清(qing)洗(xi)去(qu)除(chu)血液(ye),稱重後(hou)備(bei)用(組織塊較(jiao)大(da)需先剪(jian)碎後(hou)再(zai)勻(yun)漿);
2) 可(ke)同(tong)時(shi)選(xuan)用多種(zhong)勻漿方(fang)法(fa)達(da)到(dao)較(jiao)好(hao)的破(po)碎效(xiao)果:首(shou)先將(jiang)組織塊移(yi)入(ru)玻(bo)璃勻(yun)漿器,加入(ru)5-10mL 預冷PBS 進(jin)行充(chong)分(fen)研(yan)磨,該(gai)過程需在冰(bing)上(shang)進行(有條(tiao)件(jian)實驗室(shi)可(ke)選(xuan)用機(ji)器勻(yun)漿);得(de)到(dao)的(de)勻(yun)漿液(ye)可(ke)再利(li)用超聲(sheng)破(po)碎或(huo)反(fan)復凍融(rong) 進壹(yi)步(bu)處(chu)理(li)(超聲(sheng)破(po)碎過程中(zhong)註意冰(bing)浴(yu)降溫(wen);反復凍融(rong)法(fa)可(ke)重復2 次)。
3) 將(jiang)制(zhi)備(bei)好(hao)的勻漿液(ye)於5000×g 離(li)心5 分(fen)鐘(zhong),留取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測。
4. 細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye):
1)貼(tie)壁(bi)細胞(bao)需要先(xian)用胰酶(mei)消(xiao)化(hua),離心收集細(xi)胞(懸浮細(xi)胞可直(zhi)接離(li)心收集);
2)將(jiang)收(shou)集到(dao)的(de)細(xi)胞用冷PBS 洗(xi)3 次;
3)物(wu)理(li)方(fang)法(fa)裂(lie)解細(xi)胞(可(ke)先超聲(sheng)破(po)碎細(xi)胞(bao),再(zai)反(fan)復凍融(rong)):
i 超聲(sheng)破(po)碎:取(qu)適量PBS 重懸細(xi)胞(bao),用壹(yi)定功率(lv)的(de)超聲(sheng)波處(chu)理(li)細胞(bao)懸液(ye),使(shi)細(xi)胞急劇震蕩(dang)破(po)裂(lie)。
ii 反(fan)復凍融(rong):將待破(po)碎的(de)細(xi)胞(bao)在(zai)-20 oC 以(yi)下(xia)冰(bing)凍,室(shi)溫(wen)融解,反(fan)復3 次,使(shi)細胞溶(rong)脹破(po)碎。
4)將(jiang)標(biao)本(ben)於2-8 oC 1500×g 離(li)心10 分(fen)鐘(zhong),收集上(shang)清備(bei)用。
5. 細(xi)胞(bao)培養上(shang)清或(huo)其它生物(wu)標本(ben):
請(qing) 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測,或(huo)將上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存(cun),但應避(bi)免(mian)反復凍融(rong)。
註意:
1. 以(yi)上(shang)標本(ben)均需密封保(bao)存(cun),4oC保(bao)存(cun)應(ying)小(xiao)於1周,-20oC不(bu)應超過1個月,-80oC不(bu)應超過2個月。
2. 標(biao)本(ben)使用前(qian)應(ying)緩(huan)慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen),不(bu)應加熱使之融解。
3. 實驗前(qian)紅(hong)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液(ye)必須(xu)用標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)。
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei)
1. 使(shi)用前(qian)將(jiang)所(suo)有的(de)試(shi)劑(ji)和標(biao)本(ben)緩慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)(18-25oC),試(shi)劑(ji)不(bu)能直(zhi)接在(zai)37oC溶(rong)解。
2. 標(biao)準(zhun)品(pin)(凍幹(gan)品):每(mei)瓶(ping)標(biao)準品(pin)加入(ru)標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)1mL,蓋好(hao)後(hou)室(shi)溫(wen)靜(jing)置大(da)約10分(fen)鐘(zhong),同(tong)時(shi)反(fan)復顛(dian)倒/搓(cuo)動(dong)以(yi)助溶(rong)解,其(qi)濃度為40ng/mL。準(zhun)備(bei)7個稀釋(shi)標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)EP管,每(mei)個EP管中(zhong)加入(ru)150μL的(de)標準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye),如圖(tu)所示依次倍(bei)比稀釋(shi)成不(bu)同(tong)的梯(ti)度, 標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直(zhi)接作(zuo)為(wei)空白(bai)孔(kong)。為(wei)保(bao)證(zheng)實驗結果有效(xiao)性,每(mei)次實驗請使用新的(de)標(biao)準品溶(rong)液(ye)。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸(zheng)餾(liu)水或去(qu)離子水將20mL濃洗滌液稀(xi)釋(shi)至(zhi)600mL,進(jin)行30倍(bei)稀釋(shi)。
標(biao)本(ben)處(chu)理(li)
1. 本(ben)公司只對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)本(ben)身(shen)負(fu)責(ze),不(bu)對(dui)因(yin)使用該(gai)試(shi)劑(ji)盒(he)所造(zao)成的樣本(ben)消(xiao)耗負(fu)責(ze),請使(shi)用者(zhe)使(shi)用前(qian)充(chong)分(fen)考(kao)慮到(dao)樣本(ben)的可能使用量,預留充(chong)足(zu)的(de)樣本(ben)。
2. 實驗前(qian)應(ying)預測標(biao)本(ben)含量,如果(guo)標本(ben)濃度過高(gao),應(ying)對(dui)標本(ben)進行稀(xi)釋(shi),使(shi)稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)標(biao)本(ben)符合試(shi)劑(ji)盒(he)的檢測範(fan)圍(wei),計算(suan)時(shi)再(zai)乘以相(xiang)應的(de)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。
3. 若所檢樣本(ben)不(bu)包含(han)在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)所(suo)列樣本(ben)之中(zhong),建議(yi)進(jin)行預實驗驗證(zheng)其(qi)有效(xiao)性,並註意留存(cun)樣本(ben)。
4. 使(shi)用化(hua)學(xue)裂解液(ye)制(zhi)備(bei)的(de)組織勻漿或(huo)細(xi)胞提(ti)取(qu)液(ye)可(ke)能會由(you)於某(mou)些化(hua)學(xue)物(wu)質的(de)引(yin)入(ru)導(dao)致 ELISA實驗結果偏(pian)差(cha)。
5. 若樣本(ben)為細胞(bao)培養上(shang)清,因(yin)該(gai)類(lei)樣本(ben)幹擾因(yin)素(su) 較多(duo),如:細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)、細(xi)胞數(shu)量、采(cai)樣時(shi)間(jian)等,所以(yi)可(ke)能存(cun)在(zai)檢測不(bu)出的(de)情況。
6. 某(mou)些天(tian)然(ran)蛋白(bai)或重組蛋白(bai),包括(kuo)原(yuan)核及(ji)真核重組蛋白(bai),可能因(yin)為與(yu)本(ben)產品(pin)所(suo)使用的檢測抗(kang)體(ti)及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體(ti)不(bu)匹配,而不(bu)被(bei)檢測出(chu)。
7. 建議(yi)使(shi)用新鮮(xian)樣本(ben),保(bao)存(cun)時(shi)間(jian)過長可能會存(cun)在(zai)蛋白(bai)降解或(huo)變性導(dao)致實驗結果偏(pian)差(cha)。
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)步(bu)驟
1. 加樣:分(fen)別(bie)設空白(bai)孔(kong)(空白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加樣品及酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji),其(qi)余(yu)各步(bu)操作(zuo)相(xiang)同(tong))、標準(zhun)孔(kong)、待測樣品孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板(ban)上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確加樣50μl,待測樣品孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣品稀釋(shi)液(ye)40μl,然(ran)後再(zai)加待測樣品10μl(樣品*終稀釋(shi)度為5倍(bei))。加樣將樣品加於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底(di)部(bu),盡量不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。
2. 溫(wen)育(yu):用封板(ban)膜封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
3. 配液(ye):將(jiang)20倍濃縮洗滌液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水20倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用
4. 洗(xi)滌(di):小(xiao)心揭掉封(feng)板(ban)膜,棄去液體(ti),甩(shuai)幹,每(mei)孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye),靜(jing)置30秒後棄去,如此重復5次,拍(pai)幹。
5. 加酶(mei):每(mei)孔(kong)加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50μl,空白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。
6. 溫(wen)育(yu):操作(zuo)同(tong)3。
7. 洗(xi)滌(di):操作(zuo)同(tong)5。
8. 顯(xian)色:每(mei)孔(kong)先(xian)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)A50μl,再(zai)加入(ru)顯(xian)色劑(ji)B50μl,輕輕震(zhen)蕩(dang)混勻(yun),37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色15分(fen)鐘(zhong).
9. 終止:每(mei)孔(kong)加終止液50μl,終止反應(ying)(此時(shi)藍色立轉(zhuan)黃(huang)色(se))。
10. 測定(ding):以空白(bai)空調零,450nm波(bo)長依序測量各(ge)孔(kong)的(de)吸光(guang)度(OD值)。 測定(ding)應在(zai)加終止液後(hou)15分(fen)鐘(zhong)以內進行。
註意:
1. 試(shi)劑(ji)準(zhun)備(bei):準(zhun)備(bei)壹(yi)次實驗所需要的(de)酶(mei)標(biao)條(tiao),其(qi)它的可(ke)從微(wei)孔(kong)板(ban)上(shang)拆下(xia),密封(feng),按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)要求(qiu)保(bao)存(cun),以(yi)備(bei)下(xia)次使(shi)用。
2. 加樣:實驗操作(zuo)中(zhong)請(qing)使(shi)用壹(yi)次性的(de)吸頭(tou),避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。加樣時(shi)註意不(bu)要有氣(qi)泡,將(jiang)樣品加於酶(mei)標(biao)板(ban)底(di)部(bu),盡量不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁(bi),輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻。加樣或加試(shi)劑(ji)時(shi),**個孔(kong)與(yu)*後壹(yi)個孔(kong)加樣之間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔(ge)如果(guo)太大(da),將會(hui)導致不(bu)同(tong)的“預溫(wen)育(yu)”時(shi)間(jian),從(cong)而明(ming)顯(xian)地(di)影(ying)響(xiang)到(dao)測量值(zhi)的(de)準(zhun)確性及(ji)重復性。因(yin)此,壹(yi)次加樣時(shi)間(jian)(包括(kuo)標(biao)準(zhun)品及(ji)所有樣品)*好控制(zhi)在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內。推(tui)薦設置復孔(kong)進(jin)行實驗。
3. 溫(wen)育(yu):為(wei)防(fang)止(zhi)樣品蒸(zheng)發,實驗時(shi)請(qing)將(jiang)加上(shang)蓋或(huo)覆(fu)膜的(de)酶(mei)標(biao)板(ban)置(zhi)於濕(shi)盒(he)內,以(yi)避(bi)免(mian)液體(ti)蒸(zheng)發,洗板(ban)後(hou)應(ying)盡快進(jin)行下(xia)步(bu)操作(zuo),任(ren)何(he)時(shi)侯(hou)都應(ying)避(bi)免(mian)酶(mei)標(biao)板(ban)處(chu)於幹(gan)燥(zao)狀(zhuang)態(tai),同(tong)時(shi)應(ying)嚴格(ge)遵(zun)守給定的溫(wen)育(yu)時(shi)間(jian)和溫(wen)度。
4. 洗(xi)滌(di):充(chong)分(fen)的(de)洗滌非常(chang)重要,在(zai)每(mei)次洗(xi)滌過程中(zhong),都要將(jiang)洗(xi)滌液(ye)完全甩(shuai)幹。洗滌(di)過程中(zhong)反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)殘(can)留(liu)的洗(xi)滌液(ye)應在濾紙(zhi)上(shang)拍幹(gan),勿(wu)將(jiang)濾(lv)紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入(ru)反(fan)應孔(kong)中(zhong)吸(xi)水,同(tong)時(shi)要消(xiao)除板(ban)底(di)殘(can)留(liu)的液(ye)體(ti)和手(shou)指印,避(bi)免(mian)影(ying)響(xiang)*後(hou)的(de)酶(mei)標(biao)儀讀(du)數。如果(guo)有自動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji),應(ying)在(zai)熟(shu)練使(shi)用後再(zai)用到(dao)正式實 驗過程中(zhong)。
5. 反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的(de)控制(zhi):加入(ru)底(di)物(wu)後請定時(shi)觀(guan)察反應(ying)孔(kong)的(de)顏色(se)變(bian)化(hua)(比如,每(mei)隔10分(fen)鐘(zhong)觀(guan)察壹(yi)次),如顏色(se)較(jiao)深,請(qing)提(ti)前(qian)加入(ru)終止液終止反應(ying),避(bi)免(mian)反應(ying)過強(qiang)從(cong)而影(ying)響(xiang)酶(mei)標(biao)儀光(guang)密度讀數(shu)。
6. 底(di)物(wu):底(di)物(wu)請避(bi)光(guang)保(bao)存(cun),在(zai)儲存(cun)和溫(wen)育(yu)時(shi)避(bi)免(mian)強(qiang)光(guang)直(zhi)接照(zhao)射。
7. 如果(guo)實驗室(shi)內(nei)濕(shi)度低於60%,推(tui)薦使(shi)用加濕(shi)器提(ti)高(gao)濕(shi)度水平。
實驗流(liu)程
1. 實驗前(qian)標(biao)準(zhun)品(pin)、試(shi)劑(ji)及(ji)樣本(ben)的準備(bei);
2. 加樣(標準品(pin)及(ji)樣本(ben))50μL,37℃孵育(yu)30分(fen)鐘(zhong);
3. 洗(xi)板(ban)5次,加酶(mei)標(biao)試(shi)劑(ji)50ul,37℃孵育(yu)半小(xiao)時(shi);
4. 洗(xi)板(ban)5次;加入(ru)顯(xian)色液A,B各50ul,37℃孵育(yu)顯(xian)色15分(fen)鐘(zhong)
5. 加終止液50μL,立即450nm讀數。
6. 計(ji)算(suan)
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)計算(suan)
各(ge)標(biao)準(zhun)品及樣本(ben)O.D.值扣除(chu)空白(bai)孔(kong)O.D.值(zhi)後作(zuo)圖(tu)(七(qi)點(dian)圖(tu)),如設置復孔(kong),則(ze)應取(qu)其(qi)平均值計算(suan)。以標(biao)準品(pin)的濃度為縱(zong)坐標(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao)),O.D.值(zhi)為橫(heng)坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao)),繪(hui)出標準(zhun)曲(qu)線(xian)(*佳(jia)方(fang)程式應(ying)依回歸方(fang)程計算(suan)的R2值(zhi)來定(ding),以R2值越趨(qu)近(jin)於1為(wei)好(hao))。推(tui)薦使(shi)用專(zhuan)業(ye)制(zhi)作(zuo)曲(qu)線(xian)軟件(jian)進(jin)行分(fen)析(xi),如curve expert 1.30,根據(ju)樣品O.D.值,由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)查(zha)出相(xiang)應的(de)濃度,乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu);或(huo)用標準(zhun)物(wu)的濃度與O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出標(biao)準曲(qu)線(xian)的(de)回歸方(fang)程式,將(jiang)樣品的O.D.值(zhi)代(dai)入(ru)方(fang)程式,計(ji)算(suan)出樣品濃度,再乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu),即(ji)為(wei)樣品的實際濃度。
特(te)異(yi)性
本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)用於檢測雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM),經(jing)檢測與(yu)其它相(xiang)似物(wu)質無明(ming)顯(xian)交叉(cha)反應(ying)。
由(you)於受(shou)到(dao)技術及(ji)樣本(ben)來源的限制(zhi),不(bu)可能完成對(dui)所有相(xiang)關或(huo)相(xiang)似物(wu)質交(jiao)叉(cha)反應(ying)檢測,因(yin)此本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)有可(ke)能與未(wei)經(jing)檢測的(de)其它物(wu)質有交(jiao)叉(cha)反應(ying)。
精密度
精密度用樣品測定(ding)值的(de)變異(yi)系數(shu)CV表(biao)示。CV(%) = SD/mean×100
批內差(cha):取(qu)同(tong)批次試(shi)劑(ji)盒(he)對(dui)低、中(zhong)、高(gao)值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本(ben)進行定(ding)量檢測,每(mei)份樣本(ben)連續(xu)測定(ding)20 次,分(fen)別(bie)計算(suan)不(bu)同(tong)濃度樣本(ben)的平均值及SD值(zhi)。
批間(jian)差(cha):選取(qu)3個不(bu)同(tong)批次的(de)試(shi)劑(ji)盒(he)分(fen)別(bie)對(dui)低、中(zhong)、高(gao)值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本(ben)進行定(ding)量測定(ding),每(mei)個樣本(ben)使用同(tong)壹(yi)試(shi)劑(ji)盒(he)重復測定(ding)8次,分(fen)別(bie)計算(suan)不(bu)同(tong)濃度樣本(ben)的平均值及SD值(zhi)。
批內差(cha): CV<10%
批間(jian)差(cha): CV<12%
雞(ji)溶(rong)菌酶(mei)(LZM)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)穩定(ding)性
經(jing)測定(ding),試(shi)劑(ji)盒(he)在有效(xiao)期內(nei)按(an)推(tui)薦溫(wen)度保(bao)存(cun),其(qi)活(huo)性降低率小(xiao)於5%。
為(wei)減(jian)小(xiao)外(wai)部(bu)因(yin)素(su)對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)破(po)壞(huai)前(qian)後(hou)檢測值(zhi)的影(ying)響(xiang),實驗室(shi)的(de)環境(jing)條(tiao)件(jian)需盡量保(bao)持壹(yi)致,尤其(qi)是實驗室(shi)內(nei)溫(wen)度、濕(shi)度及溫(wen)育(yu)條(tiao)件(jian)。其次由(you)同(tong)壹(yi)實驗員來進行操作(zuo)可(ke)減(jian)少人為(wei)誤差(cha)。



