產品(pin)名(ming)稱(cheng)：雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)

                                                       96T       僅供體(ti)外研(yan)究使(shi)用，不(bu)用於臨床診(zhen)斷!

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)

本試劑(ji)盒(he)運用雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心ELISA法(fa)定(ding)量(liang)測定(ding)雞(ji)血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)、細胞(bao)裂(lie)解(jie)液、細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)液和(he)其(qi)他(ta)生(sheng)物(wu)液體(ti)中雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)含(han)量(liang)。

 檢(jian)測範(fan)圍

0.313-20 ng/mL

 *低(di)檢(jian)測限(xian)

0.076 ng/mL

 實驗(yan)原理(li)

將(jiang)雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)抗體(ti)包(bao)被(bei)於96孔(kong)微(wei)孔(kong)板(ban)中，制成(cheng)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)，向微(wei)孔(kong)中分別(bie)加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)或(huo)標(biao)本，其(qi)中的(de)雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)與連接(jie)於固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)上(shang)的(de)抗體(ti)結合(he)，然(ran)後加(jia)入(ru)生(sheng)物(wu)素化的(de)雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)抗體(ti)，將(jiang)未結合(he)的(de)生(sheng)物(wu)素化抗(kang)體(ti)洗凈後，加(jia)入(ru)HRP標(biao)記的(de)親和(he)素，再次(ci)徹底洗滌後加(jia)入(ru)TMB底物(wu)顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過氧化物(wu)酶的(de)催(cui)化下(xia)轉化成(cheng)藍(lan)色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用下(xia)轉化成(cheng)*終(zhong)的(de)黃色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm波(bo)長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)(O.D.值(zhi))，計算樣(yang)品(pin)濃度(du)。

 試劑(ji)盒(he)內容(rong)

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)需(xu)自備的(de)設備及試劑(ji)

1.         450±10nm濾光(guang)片(pian)的(de)酶標(biao)儀(yi)(建(jian)議儀(yi)器(qi)使(shi)用前提前預(yu)熱(re))

2.         單道(dao)或(huo)多道微(wei)量(liang)加液(ye)器(qi)及吸(xi)頭(tou)

3.         稀釋(shi)樣(yang)品(pin)的(de)EP管

4.         蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去離(li)子水(shui)

5.         吸(xi)水(shui)紙(zhi)

6.         盛放(fang)洗(xi)液(ye)的(de)容(rong)器(qi)

 試劑(ji)盒(he)的(de)儲存及有效(xiao)期

1.         未開(kai)封的(de)試劑(ji)盒(he)：所有試劑均(jun)按試劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)上(shang)所示保存。請(qing)註意(yi)，收(shou)到(dao)試劑(ji)盒(he)後請(qing)盡(jin)快將(jiang)TMB 洗滌液(ye)，終(zhong)止(zhi)液(ye)保(bao)存於4℃，其(qi)他(ta)試劑(ji)保存於-20℃。

2.         使用後的(de)試劑(ji)盒(he)：剩余試(shi)劑仍(reng)需(xu)按照試劑瓶(ping)標(biao)簽(qian)所示的(de)溫度(du)保(bao)存，開(kai)封後的(de)酶標(biao)板(ban)要(yao)加(jia)幹(gan)燥劑(ji)後密(mi)封保存於-20℃，避(bi)免(mian)潮濕。

註意(yi)：

試劑(ji)盒(he)內酶(mei)標(biao)條可(ke)拆(chai)卸(xie)，按實驗(yan)需(xu)求可(ke)分多次使(shi)用；使(shi)用後的(de)剩余試(shi)劑盒(he)建(jian)議在(zai)**實驗(yan)後 1個(ge)月內使(shi)用完(wan)畢(bi)。產品(pin)過期時(shi)間(jian)以(yi)盒子上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)為(wei)準(zhun)，保(bao)質期內所有組(zu)分都(dou)確保是(shi)穩(wen)定(ding)的(de)。

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)標(biao)本的(de)采集與(yu)保(bao)存

1.         血(xue)清(qing)：

將(jiang)收(shou)集於血(xue)清(qing)分離(li)管的(de)全血(xue)標(biao)本在室溫放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時(shi)或 4^oC 過夜，然(ran)後 1000×g 離(li)心 20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即可(ke)，或將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

2.         血(xue)漿(jiang)：

用 EDTA 或(huo)肝(gan)素作為(wei)抗(kang)凝(ning)劑(ji)采集標(biao)本，並將(jiang)標(biao)本在采(cai)集後的(de) 30 分鐘(zhong)內於 2-8^oC 1000×g 離(li)心 15 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

3. 組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)：

1） 取適量(liang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)，於預(yu)冷(leng)PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清(qing)洗去除(chu)血(xue)液，稱(cheng)重(zhong)後備用（組(zu)織(zhi)塊(kuai)較大(da)需(xu)先剪(jian)碎後再勻漿(jiang)）；

2） 可(ke)同時(shi)選用多種勻漿(jiang)方法(fa)達(da)到(dao)較好(hao)的(de)破碎效果：首先(xian)將(jiang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)移(yi)入(ru)玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi)，加(jia)入(ru)5-10mL 預(yu)冷(leng)PBS 進(jin)行充(chong)分研(yan)磨(mo)，該(gai)過程(cheng)需(xu)在冰(bing)上(shang)進(jin)行(xing)（有(you)條件實驗(yan)室可(ke)選用機(ji)器(qi)勻漿(jiang)）；得到的(de)勻漿(jiang)液可(ke)再利用超(chao)聲(sheng)破碎或反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong) 進壹(yi)步處(chu)理(li)（超(chao)聲(sheng)破碎過程(cheng)中註意(yi)冰(bing)浴(yu)降(jiang)溫；反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)法可(ke)重(zhong)復(fu)2 次）。

3） 將(jiang)制備好(hao)的(de)勻漿(jiang)液於5000×g 離(li)心5 分鐘(zhong)，留(liu)取上(shang)清(qing)即可(ke)檢(jian)測。

4. 細胞(bao)裂(lie)解(jie)液：

1）貼(tie)壁細胞(bao)需(xu)要(yao)先(xian)用胰(yi)酶(mei)消化，離(li)心收(shou)集細(xi)胞(bao)（懸浮(fu)細(xi)胞(bao)可(ke)直接(jie)離(li)心收(shou)集）；

2）將(jiang)收(shou)集到(dao)的(de)細胞(bao)用冷(leng)PBS 洗(xi)3 次；

3）物(wu)理(li)方法(fa)裂(lie)解(jie)細胞(bao)（可(ke)先超(chao)聲(sheng)破碎細胞(bao)，再反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)）：

i 超(chao)聲(sheng)破碎：取適量(liang)PBS 重(zhong)懸細胞(bao)，用壹(yi)定(ding)功率的(de)超(chao)聲(sheng)波(bo)處(chu)理(li)細胞(bao)懸液，使(shi)細(xi)胞(bao)急劇(ju)震蕩(dang)破裂(lie)。

ii 反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)：將(jiang)待破碎的(de)細胞(bao)在(zai)-20 ^oC 以下(xia)冰(bing)凍(dong)，室溫融(rong)解(jie)，反(fan)復(fu)3 次，使(shi)細胞(bao)溶脹(zhang)破碎。

4）將(jiang)標(biao)本於2-8 ^oC 1500×g 離心10 分鐘(zhong)，收(shou)集上(shang)清(qing)備用。

5. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)或其(qi)它(ta)生(sheng)物(wu)標(biao)本：

請(qing) 1000×g 離(li)心 20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

註意(yi)：

1.         以上(shang)標(biao)本均(jun)需(xu)密封保存，4^oC保存應(ying)小(xiao)於1周，-20^oC不(bu)應(ying)超(chao)過1個月(yue)，-80^oC不(bu)應(ying)超(chao)過2個月(yue)。

2.         標(biao)本使用前應(ying)緩(huan)慢均(jun)衡(heng)至(zhi)室溫，不(bu)應(ying)加(jia)熱使(shi)之(zhi)融(rong)解(jie)。

3.         實驗(yan)前紅(hong)細胞(bao)裂(lie)解(jie)液必須(xu)用標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀(xi)釋(shi)。

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)試劑準(zhun)備

1.         使用前將(jiang)所有的(de)試劑(ji)和(he)標(biao)本緩慢均(jun)衡(heng)至(zhi)室溫(18-25oC)，試(shi)劑(ji)不(bu)能(neng)直(zhi)接(jie)在(zai)37oC溶解(jie)。

2.         標(biao)準(zhun)品(pin)(凍(dong)幹(gan)品(pin))：每(mei)瓶(ping)標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液1mL，蓋好(hao)後室溫靜(jing)置大(da)約10分鐘(zhong)，同(tong)時(shi)反(fan)復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓(cuo)動(dong)以助溶解(jie)，其(qi)濃度(du)為(wei)20 ng/mL。準(zhun)備7個稀(xi)釋(shi)標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)EP管，每(mei)個EP管中加(jia)入(ru)150μL的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液，如(ru)圖(tu)所示依(yi)次(ci)倍(bei)比稀釋(shi)成(cheng)不(bu)同(tong)的(de)梯度(du)， 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作為(wei)空(kong)白(bai)孔(kong)。為(wei)保(bao)證(zheng)實驗(yan)結果(guo)有效(xiao)性(xing)，每(mei)次實驗(yan)請(qing)使(shi)用新(xin)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)溶液。

3.         濃洗滌液(ye)：用580mL蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去離(li)子水(shui)將(jiang)20mL濃洗滌液(ye)稀(xi)釋(shi)至600mL，進行(xing)30倍(bei)稀釋(shi)。

標(biao)本處(chu)理(li)

1.         本公司(si)只(zhi)對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)本身負(fu)責，不(bu)對(dui)因使用該(gai)試(shi)劑(ji)盒(he)所造成(cheng)的(de)樣(yang)本消耗(hao)負(fu)責，請(qing)使(shi)用者(zhe)使(shi)用前充(chong)分考慮(lv)到樣(yang)本的(de)可(ke)能(neng)使(shi)用量(liang)，預(yu)留(liu)充(chong)足(zu)的(de)樣(yang)本。

2.         實驗(yan)前應(ying)預(yu)測(ce)標(biao)本含(han)量(liang)，如果(guo)標(biao)本濃度(du)過高(gao)，應(ying)對(dui)標(biao)本進行(xing)稀(xi)釋(shi)，使稀(xi)釋(shi)後的(de)標(biao)本符合(he)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)檢(jian)測範(fan)圍，計算時(shi)再乘(cheng)以相(xiang)應(ying)的(de)稀釋(shi)倍(bei)數。

3.         若所檢(jian)樣(yang)本不(bu)包(bao)含(han)在說(shuo)明書所列樣(yang)本之中，建(jian)議進(jin)行(xing)預(yu)實驗(yan)驗(yan)證其(qi)有(you)效(xiao)性，並註意(yi)留(liu)存樣(yang)本。

4.         使用化學(xue)裂解(jie)液制備的(de)組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)或細(xi)胞(bao)提取液可(ke)能(neng)會(hui)由(you)於某(mou)些(xie)化學(xue)物(wu)質的(de)引(yin)入(ru)導(dao)致(zhi)  ELISA實驗(yan)結果(guo)偏差。

5.         若樣(yang)本為(wei)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，因該(gai)類(lei)樣(yang)本幹(gan)擾因素 較多，如：細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態、細胞(bao)數量(liang)、采樣(yang)時(shi)間(jian)等(deng)，所以可(ke)能(neng)存在(zai)檢(jian)測不(bu)出(chu)的(de)情況(kuang)。

6.         某些(xie)天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)或重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)，包(bao)括原核(he)及真核(he)重(zhong)組(zu)蛋(dan)白(bai)，可(ke)能(neng)因為(wei)與(yu)本產品(pin)所使用的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)及捕獲抗體(ti)不(bu)匹(pi)配(pei)，而不(bu)被(bei)檢(jian)測出(chu)。

7.         建(jian)議使(shi)用新(xin)鮮樣(yang)本，保存時(shi)間(jian)過長可(ke)能(neng)會(hui)存在(zai)蛋(dan)白(bai)降(jiang)解(jie)或變性導(dao)致(zhi)實驗(yan)結果(guo)偏差。

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)操作步驟(zhou)

1.         加樣(yang)：分別(bie)設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶標(biao)試劑(ji)，其(qi)余各(ge)步操作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準(zhun)確加樣(yang)50μl，待測樣(yang)品(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後再加(jia)待測樣(yang)品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)*終(zhong)稀釋(shi)度(du)為(wei)5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻。

2.         溫育：用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分鐘(zhong)。  

3.         配(pei)液：將(jiang)20倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用蒸(zheng)餾(liu)水20倍(bei)稀釋(shi)後備用

4.         洗滌：小(xiao)心揭掉封板(ban)膜，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後棄(qi)去，如(ru)此(ci)重(zhong)復(fu)5次，拍(pai)幹(gan)。

5.         加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。

6.         溫育：操作同3。

7.         洗滌：操作同5。

8.         顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色(se)15分鐘(zhong).

9.         終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此(ci)時(shi)藍色(se)立(li)轉黃色）。

10.     測定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加終(zhong)止(zhi)液(ye)後15分鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行(xing)。

註意(yi)：

1.         試劑(ji)準(zhun)備：準(zhun)備壹次(ci)實驗(yan)所需(xu)要(yao)的(de)酶標(biao)條，其(qi)它(ta)的(de)可(ke)從微(wei)孔(kong)板(ban)上(shang)拆(chai)下，密(mi)封，按照說(shuo)明書要(yao)求(qiu)保(bao)存，以(yi)備下次(ci)使(shi)用。

2.         加樣(yang)：實驗(yan)操作中請(qing)使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou)，避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。加(jia)樣(yang)時(shi)註意(yi)不(bu)要(yao)有(you)氣(qi)泡，將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶(mei)標(biao)板(ban)底部(bu)，盡(jin)量(liang)不(bu)觸(chu)及孔(kong)壁，輕輕晃動混(hun)勻。加樣(yang)或加試(shi)劑(ji)時(shi)，**個孔(kong)與(yu)*後壹(yi)個孔(kong)加(jia)樣(yang)之間(jian)的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔(ge)如果太(tai)大(da)，將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)同(tong)的(de)“預(yu)溫育”時(shi)間(jian)，從(cong)而明顯(xian)地(di)影(ying)響到(dao)測(ce)量(liang)值(zhi)的(de)準(zhun)確性及重(zhong)復(fu)性。因此，壹(yi)次(ci)加樣(yang)時(shi)間(jian)(包(bao)括標(biao)準(zhun)品(pin)及所有樣(yang)品(pin))*好(hao)控(kong)制在10分鐘(zhong)內。推(tui)薦(jian)設置復(fu)孔(kong)進(jin)行(xing)實驗(yan)。

3.          溫育：為(wei)防(fang)止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸(zheng)發，實驗(yan)時(shi)請(qing)將(jiang)加上(shang)蓋或覆膜(mo)的(de)酶標(biao)板(ban)置於濕(shi)盒(he)內，以(yi)避(bi)免液(ye)體(ti)蒸(zheng)發，洗板(ban)後應(ying)盡(jin)快進(jin)行(xing)下步操作，任何(he)時(shi)侯(hou)都(dou)應(ying)避(bi)免酶(mei)標(biao)板(ban)處(chu)於幹(gan)燥狀(zhuang)態，同時(shi)應(ying)嚴(yan)格遵(zun)守(shou)給(gei)定的(de)溫育時(shi)間(jian)和(he)溫度(du)。

4.         洗滌：充(chong)分的(de)洗滌非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)，在(zai)每(mei)次(ci)洗(xi)滌過程(cheng)中，都(dou)要(yao)將(jiang)洗滌液(ye)完(wan)全甩(shuai)幹(gan)。洗滌過程(cheng)中反(fan)應(ying)孔(kong)中殘(can)留(liu)的(de)洗滌液(ye)應(ying)在(zai)濾紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹(gan)，勿將(jiang)濾紙(zhi)直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)反(fan)應(ying)孔(kong)中吸(xi)水(shui)，同(tong)時(shi)要(yao)消除板(ban)底殘留(liu)的(de)液體(ti)和(he)手(shou)指(zhi)印，避免影(ying)響*後的(de)酶標(biao)儀(yi)讀數。如(ru)果有自動(dong)洗(xi)板(ban)機(ji)，應(ying)在(zai)熟練使用後再用到(dao)正(zheng)式(shi)實 驗(yan)過程(cheng)中。

5.         反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的(de)控制：加入(ru)底物(wu)後請(qing)定(ding)時(shi)觀察(cha)反(fan)應(ying)孔(kong)的(de)顏色變化(比如，每(mei)隔(ge)10分鐘(zhong)觀察(cha)壹次)，如(ru)顏色較深，請(qing)提前加入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，避(bi)免反(fan)應(ying)過強從(cong)而影(ying)響酶(mei)標(biao)儀(yi)光密(mi)度(du)讀(du)數。

6.         底物(wu)：底物(wu)請(qing)避(bi)光保存，在(zai)儲(chu)存和(he)溫育時(shi)避免(mian)強(qiang)光(guang)直接(jie)照(zhao)射(she)。

7.         如果(guo)實驗(yan)室內濕(shi)度(du)低(di)於60%，推(tui)薦(jian)使(shi)用加(jia)濕(shi)器(qi)提高(gao)濕(shi)度(du)水(shui)平(ping)。

 實驗(yan)流程(cheng)

1.         實驗(yan)前標(biao)準(zhun)品(pin)、試(shi)劑(ji)及樣(yang)本的(de)準(zhun)備；

2.         加樣(yang)（標(biao)準(zhun)品(pin)及樣(yang)本）50μL，37℃孵(fu)育30分鐘(zhong)；

3.         洗板(ban)5次，加(jia)酶標(biao)試劑(ji)50ul，37℃孵(fu)育半小時(shi)；

4.         洗板(ban)5次；加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)液(ye)A，B各(ge)50ul,37℃孵(fu)育顯(xian)色(se)15分鐘(zhong)

5.         加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，立(li)即(ji)450nm讀(du)數。

6.    計算

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)計算

各標(biao)準(zhun)品(pin)及樣(yang)本O.D.值(zhi)扣除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)O.D.值(zhi)後作圖(七(qi)點(dian)圖(tu))，如(ru)設置復(fu)孔(kong)，則(ze)應(ying)取(qu)其(qi)平(ping)均(jun)值(zhi)計算。以標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)濃度(du)為(wei)縱坐標(biao)(或對(dui)數坐標(biao))，O.D.值(zhi)為(wei)橫(heng)坐標(biao)(或對(dui)數坐標(biao)），繪(hui)出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(*佳方(fang)程(cheng)式(shi)應(ying)依(yi)回(hui)歸(gui)方(fang)程(cheng)計算的(de)R2值(zhi)來定(ding)，以R2值(zhi)越趨近(jin)於1為(wei)好(hao))。推(tui)薦(jian)使(shi)用專業制作曲(qu)線(xian)軟(ruan)件進(jin)行分析(xi)，如(ru)curve expert 1.30，根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)O.D.值(zhi)，由標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃度(du)，乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數；或(huo)用標(biao)準(zhun)物(wu)的(de)濃度(du)與(yu)O.D.值(zhi)計算出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)回歸(gui)方(fang)程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的(de)O.D.值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)式(shi)，計(ji)算出樣(yang)品(pin)濃度(du)，再乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為(wei)樣(yang)品(pin)的(de)實際(ji)濃度(du)。

 特(te)異性(xing)

本試劑(ji)盒(he)用於檢(jian)測雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)，經(jing)檢(jian)測與(yu)其(qi)它(ta)相(xiang)似(si)物(wu)質無(wu)明顯(xian)交叉(cha)反(fan)應(ying)。

由於受(shou)到(dao)技術及樣(yang)本來源的(de)限制，不(bu)可(ke)能(neng)完(wan)成(cheng)對(dui)所有相(xiang)關(guan)或(huo)相(xiang)似(si)物(wu)質交叉(cha)反(fan)應(ying)檢(jian)測，因此本試劑(ji)盒(he)有可(ke)能(neng)與(yu)未(wei)經(jing)檢(jian)測的(de)其(qi)它(ta)物(wu)質有(you)交叉(cha)反(fan)應(ying)。

 精密(mi)度(du)

精密(mi)度(du)用樣(yang)品(pin)測(ce)定(ding)值(zhi)的(de)變異系數CV表示。CV(%) = SD/mean×100

批內差(cha)：取(qu)同批(pi)次試劑盒對(dui)低(di)、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣(yang)本進行(xing)定(ding)量(liang)檢(jian)測,每(mei)份(fen)樣(yang)本連續測定20 次(ci)，分別(bie)計(ji)算不(bu)同(tong)濃度(du)樣(yang)本的(de)平均(jun)值(zhi)及SD值(zhi)。

批間(jian)差(cha)：選取3個不(bu)同(tong)批(pi)次的(de)試劑(ji)盒(he)分別(bie)對(dui)低(di)、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣(yang)本進行(xing)定(ding)量(liang)測定(ding)，每(mei)個(ge)樣(yang)本使用同(tong)壹(yi)試劑盒(he)重(zhong)復(fu)測定(ding)8次，分別(bie)計(ji)算不(bu)同(tong)濃度(du)樣(yang)本的(de)平均(jun)值(zhi)及SD值(zhi)。

批內差(cha)： CV<10%

批間(jian)差(cha)： CV<12%

雞(ji)上(shang)皮(pi)性(xing)鈣(gai)黏(nian)附蛋(dan)白(bai)(CDHE)ELISA試劑盒(he)穩定性

經(jing)測(ce)定，試(shi)劑(ji)盒(he)在(zai)有效期內按推(tui)薦(jian)溫度(du)保(bao)存，其(qi)活(huo)性(xing)降(jiang)低(di)率小(xiao)於5%。

為(wei)減(jian)小(xiao)外(wai)部(bu)因素對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)破壞(huai)前後檢(jian)測值(zhi)的(de)影(ying)響，實驗(yan)室的(de)環(huan)境條件(jian)需(xu)盡(jin)量(liang)保持(chi)壹(yi)致(zhi)，尤其(qi)是(shi)實驗(yan)室內溫度(du)、濕(shi)度(du)及溫育條(tiao)件。其(qi)次(ci)由(you)同壹實驗(yan)員(yuan)來(lai)進行(xing)操作可(ke)減少人為(wei)誤差(cha)。