產(chan)品(pin)名稱(cheng)：牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒

                                                       96T       僅供(gong)體(ti)外研究使(shi)用(yong)，不用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷(duan)!

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒

本(ben)試(shi)劑盒運用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心ELISA法定(ding)量測(ce)定牛血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織勻漿(jiang)、細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye)、細(xi)胞培養上(shang)清液(ye)和(he)其他(ta)生物(wu)液(ye)體(ti)中(zhong)牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)含(han)量。

 檢(jian)測(ce)範圍(wei)

1.563-100ng/mL

 *低(di)檢測(ce)限

0.71ng/mL

 實(shi)驗原(yuan)理

將(jiang)牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)於96孔微(wei)孔板(ban)中，制(zhi)成(cheng)固相(xiang)載體(ti)，向(xiang)微(wei)孔中(zhong)分(fen)別加入標準品(pin)或(huo)標(biao)本(ben)，其中的牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)與(yu)連(lian)接(jie)於固相(xiang)載體(ti)上(shang)的抗(kang)體(ti)結(jie)合，然(ran)後(hou)加(jia)入生物素化的牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)抗(kang)體(ti)，將(jiang)未結(jie)合的生(sheng)物(wu)素化抗(kang)體(ti)洗(xi)凈(jing)後(hou)，加(jia)入HRP標記的(de)親(qin)和(he)素，再次徹(che)底洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)入TMB底物顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶的催(cui)化下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色(se)，並在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終的黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長下測(ce)定(ding)吸(xi)光度(du)(O.D.值)，計算(suan)樣品(pin)濃(nong)度(du)。

 試(shi)劑盒內容(rong)

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒需(xu)自(zi)備(bei)的(de)設(she)備(bei)及(ji)試(shi)劑

1.         450±10nm濾(lv)光(guang)片的酶(mei)標儀(yi)(建(jian)議(yi)儀器(qi)使(shi)用(yong)前(qian)提前(qian)預(yu)熱(re))

2.         單(dan)道(dao)或(huo)多道微(wei)量加(jia)液(ye)器(qi)及(ji)吸(xi)頭

3.         稀釋(shi)樣品(pin)的EP管(guan)

4.         蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水(shui)

5.         吸(xi)水紙(zhi)

6.         盛(sheng)放(fang)洗(xi)液(ye)的(de)容(rong)器(qi)

 試(shi)劑盒的儲存(cun)及(ji)有效(xiao)期(qi)

1.         未(wei)開(kai)封的試劑盒：所有試(shi)劑均(jun)按(an)試劑瓶標簽上(shang)所示(shi)保存(cun)。請註(zhu)意(yi)，收到(dao)試劑盒後(hou)請(qing)盡(jin)快將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液(ye)，終(zhong)止(zhi)液(ye)保(bao)存(cun)於(yu)4℃，其他(ta)試劑保(bao)存於(yu)-20℃。

2.         使(shi)用(yong)後(hou)的(de)試(shi)劑盒：剩余試(shi)劑仍(reng)需(xu)按(an)照試(shi)劑瓶標簽所示的溫度(du)保(bao)存，開(kai)封後(hou)的(de)酶(mei)標板(ban)要加(jia)幹(gan)燥(zao)劑後(hou)密封保存於-20℃，避(bi)免(mian)潮(chao)濕。

註(zhu)意(yi)：

試(shi)劑盒內酶(mei)標(biao)條可拆卸，按(an)實驗需(xu)求可分(fen)多次使(shi)用(yong)；使用(yong)後(hou)的(de)剩余試(shi)劑盒建(jian)議(yi)在(zai)**實(shi)驗後(hou) 1個(ge)月內使(shi)用(yong)完(wan)畢(bi)。產(chan)品(pin)過(guo)期(qi)時(shi)間(jian)以盒子(zi)上(shang)的標(biao)簽為準，保質期(qi)內所(suo)有組(zu)分(fen)都確(que)保是(shi)穩(wen)定的(de)。

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒標本(ben)的采集(ji)與保存(cun)

1.         血(xue)清(qing)：

將(jiang)收集於血(xue)清(qing)分(fen)離(li)管的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)在(zai)室溫放(fang)置 2 小(xiao)時或(huo) 4^oC 過(guo)夜(ye)，然(ran)後(hou) 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清即(ji)可，或(huo)將(jiang)上(shang)清置於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存(cun)，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)。

2.         血(xue)漿(jiang)：

用(yong) EDTA 或(huo)肝(gan)素作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑采集(ji)標本，並將(jiang)標本在(zai)采集(ji)後(hou)的(de) 30 分(fen)鐘內於(yu) 2-8^oC 1000×g 離(li)心 15 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清置於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存(cun)，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)。

3. 組(zu)織勻漿(jiang)：

1） 取(qu)適(shi)量組(zu)織塊，於(yu)預(yu)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗(xi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)，稱(cheng)重(zhong)後(hou)備(bei)用(yong)（組(zu)織塊較大(da)需(xu)先剪(jian)碎(sui)後(hou)再(zai)勻(yun)漿(jiang)）；

2） 可同時(shi)選用(yong)多種勻(yun)漿(jiang)方(fang)法(fa)達(da)到較好(hao)的破(po)碎(sui)效(xiao)果(guo)：首先將(jiang)組(zu)織塊移(yi)入玻(bo)璃勻(yun)漿(jiang)器(qi)，加(jia)入5-10mL 預(yu)冷PBS 進(jin)行充(chong)分(fen)研磨，該(gai)過(guo)程(cheng)需(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)進(jin)行（有條件實驗室可選用(yong)機(ji)器(qi)勻(yun)漿(jiang)）；得(de)到的勻(yun)漿(jiang)液(ye)可再利(li)用(yong)超(chao)聲(sheng)破碎(sui)或(huo)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong) 進(jin)壹(yi)步(bu)處理(li)（超(chao)聲(sheng)破碎(sui)過(guo)程(cheng)中註(zhu)意(yi)冰(bing)浴(yu)降溫；反復(fu)凍(dong)融(rong)法(fa)可重(zhong)復(fu)2 次(ci)）。

3） 將(jiang)制備(bei)好(hao)的(de)勻漿(jiang)液(ye)於(yu)5000×g 離(li)心5 分(fen)鐘，留(liu)取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測(ce)。

4. 細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye)：

1）貼(tie)壁(bi)細(xi)胞需(xu)要先(xian)用(yong)胰酶(mei)消化(hua)，離(li)心收集(ji)細(xi)胞（懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞可直接(jie)離(li)心收集(ji)）；

2）將(jiang)收集到的(de)細(xi)胞用(yong)冷PBS 洗(xi)3 次(ci)；

3）物(wu)理(li)方(fang)法(fa)裂(lie)解細(xi)胞（可先超(chao)聲(sheng)破碎(sui)細(xi)胞，再(zai)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)）：

i 超(chao)聲(sheng)破碎(sui)：取(qu)適(shi)量PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，用(yong)壹(yi)定(ding)功(gong)率(lv)的(de)超(chao)聲(sheng)波(bo)處理(li)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，使(shi)細(xi)胞急劇震蕩(dang)破裂(lie)。

ii 反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)：將(jiang)待破碎的(de)細(xi)胞在(zai)-20 ^oC 以下冰(bing)凍(dong)，室溫融(rong)解(jie)，反(fan)復(fu)3 次(ci)，使(shi)細(xi)胞溶(rong)脹破碎(sui)。

4）將(jiang)標本於2-8 ^oC 1500×g 離(li)心10 分(fen)鐘，收(shou)集(ji)上(shang)清備(bei)用(yong)。

5. 細(xi)胞培養上(shang)清或(huo)其它生(sheng)物(wu)標本(ben)：

請(qing) 1000×g 離(li)心 20 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清置於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存(cun)，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)。

註(zhu)意(yi)：

1.         以上(shang)標本(ben)均(jun)需(xu)密封保存，4^oC保(bao)存(cun)應(ying)小(xiao)於1周(zhou)，-20^oC不(bu)應(ying)超(chao)過(guo)1個(ge)月，-80^oC不應(ying)超(chao)過(guo)2個(ge)月。

2.         標(biao)本(ben)使(shi)用(yong)前(qian)應緩(huan)慢均(jun)衡至(zhi)室溫，不應(ying)加熱(re)使之(zhi)融(rong)解(jie)。

3.         實(shi)驗前(qian)紅細(xi)胞裂(lie)解(jie)液(ye)必須用(yong)標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)。

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒試劑準備(bei)

1.         使(shi)用(yong)前(qian)將(jiang)所有的(de)試劑和(he)標(biao)本(ben)緩(huan)慢均(jun)衡至(zhi)室溫(18-25oC)，試劑不(bu)能直(zhi)接(jie)在(zai)37oC溶(rong)解。

2.         標(biao)準品(pin)(凍(dong)幹品(pin))：每瓶標準品(pin)加入標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)1mL，蓋(gai)好後(hou)室溫靜置大(da)約10分(fen)鐘，同(tong)時(shi)反復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓(cuo)動(dong)以助溶(rong)解，其濃(nong)度(du)為(wei)100ng/mL。準備(bei)7個(ge)稀釋(shi)標準品(pin)的EP管(guan)，每個EP管(guan)中(zhong)加(jia)入150μL的標準品(pin)稀釋(shi)液(ye)，如(ru)圖所(suo)示依(yi)次(ci)倍(bei)比稀釋(shi)成不(bu)同(tong)的(de)梯(ti)度(du)， 標(biao)準品(pin)稀釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作(zuo)為空白(bai)孔。為(wei)保證(zheng)實驗結(jie)果有效(xiao)性(xing)，每次實(shi)驗請(qing)使用(yong)新的標(biao)準品(pin)溶(rong)液(ye)。

3.         濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)：用(yong)580mL蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水(shui)將(jiang)20mL濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)稀釋(shi)至(zhi)600mL，進(jin)行30倍稀釋(shi)。

標(biao)本(ben)處理(li)

1.         本(ben)公(gong)司只(zhi)對試(shi)劑盒本身負責，不對因使(shi)用(yong)該(gai)試(shi)劑盒所造(zao)成的(de)樣(yang)本(ben)消耗負(fu)責，請使(shi)用(yong)者使用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)考慮(lv)到(dao)樣本(ben)的(de)可能使(shi)用(yong)量，預(yu)留(liu)充(chong)足的樣(yang)本(ben)。

2.         實(shi)驗前(qian)應預(yu)測標(biao)本(ben)含(han)量，如(ru)果(guo)標(biao)本(ben)濃(nong)度(du)過(guo)高(gao)，應對標(biao)本進(jin)行稀釋(shi)，使稀釋(shi)後(hou)的(de)標(biao)本符合試劑盒的檢(jian)測範圍(wei)，計算(suan)時再乘(cheng)以相(xiang)應(ying)的(de)稀釋(shi)倍數(shu)。

3.         若(ruo)所(suo)檢(jian)樣(yang)本不包含(han)在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)所(suo)列(lie)樣(yang)本之(zhi)中，建(jian)議(yi)進(jin)行預(yu)實驗驗證(zheng)其有效(xiao)性(xing)，並註(zhu)意(yi)留(liu)存(cun)樣(yang)本。

4.         使(shi)用(yong)化學裂解(jie)液(ye)制(zhi)備(bei)的(de)組(zu)織勻漿(jiang)或(huo)細(xi)胞提(ti)取(qu)液(ye)可能會(hui)由於(yu)某(mou)些(xie)化學物質(zhi)的引入導致  ELISA實(shi)驗結(jie)果偏(pian)差(cha)。

5.         若(ruo)樣(yang)本(ben)為(wei)細(xi)胞培養上(shang)清，因該(gai)類(lei)樣(yang)本(ben)幹擾因素 較多，如(ru)：細(xi)胞狀(zhuang)態、細(xi)胞數(shu)量、采樣(yang)時間等(deng)，所以可能存(cun)在(zai)檢(jian)測(ce)不(bu)出(chu)的情(qing)況(kuang)。

6.         某(mou)些(xie)天然(ran)蛋白(bai)或(huo)重(zhong)組(zu)蛋白(bai)，包(bao)括(kuo)原(yuan)核(he)及(ji)真核重(zhong)組(zu)蛋白(bai)，可能因為(wei)與(yu)本產(chan)品(pin)所使(shi)用(yong)的檢測(ce)抗(kang)體(ti)及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體(ti)不(bu)匹(pi)配，而(er)不被(bei)檢測(ce)出。

7.         建(jian)議(yi)使用(yong)新鮮樣本，保(bao)存(cun)時間(jian)過(guo)長(chang)可能會(hui)存在(zai)蛋白(bai)降(jiang)解(jie)或(huo)變(bian)性(xing)導致實(shi)驗結(jie)果偏(pian)差(cha)。

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.         加(jia)樣(yang)：分(fen)別設空白(bai)孔（空白(bai)對照(zhao)孔不(bu)加樣品(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余各(ge)步(bu)操作(zuo)相(xiang)同(tong)）、標(biao)準孔、待(dai)測樣品(pin)孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)上(shang)標準品(pin)準確(que)加樣50μl，待測樣品(pin)孔中(zhong)先加樣(yang)品(pin)稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)*終稀釋(shi)度(du)為(wei)5倍）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔底部(bu)，盡量不觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。

2.         溫育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)後(hou)置37℃溫育30分(fen)鐘。  

3.         配液(ye)：將(jiang)20倍濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)20倍(bei)稀釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)

4.         洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭掉封板(ban)膜，棄去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置30秒後(hou)棄去(qu)，如(ru)此重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。

5.         加(jia)酶(mei)：每孔加(jia)入酶標試劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外。

6.         溫育：操作(zuo)同3。

7.         洗(xi)滌(di)：操作(zuo)同5。

8.         顯(xian)色(se)：每孔先(xian)加入顯色(se)劑A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘.

9.         終(zhong)止(zhi)：每孔加(jia)終止液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此時藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。

10.     測(ce)定(ding)：以空白(bai)空調(tiao)零(ling)，450nm波(bo)長依序測(ce)量(liang)各(ge)孔的(de)吸(xi)光度(du)（OD值）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)15分(fen)鐘以內進(jin)行。

註(zhu)意(yi)：

1.         試(shi)劑準備(bei)：準備(bei)壹(yi)次(ci)實(shi)驗所(suo)需(xu)要的(de)酶(mei)標條，其它的(de)可從微(wei)孔板(ban)上(shang)拆下，密封，按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求保存，以備(bei)下次(ci)使(shi)用(yong)。

2.         加(jia)樣(yang)：實(shi)驗操作(zuo)中請(qing)使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的吸(xi)頭，避(bi)免交叉汙染(ran)。加樣時註(zhu)意(yi)不要(yao)有氣(qi)泡，將(jiang)樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)底部(bu)，盡量不觸(chu)及孔壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻(yun)。加樣或(huo)加(jia)試(shi)劑時(shi)，**個孔與(yu)*後(hou)壹(yi)個(ge)孔加(jia)樣之間(jian)的(de)時間間隔(ge)如(ru)果(guo)太(tai)大(da)，將(jiang)會導致不(bu)同(tong)的“預(yu)溫育”時(shi)間，從而(er)明(ming)顯地(di)影(ying)響(xiang)到(dao)測(ce)量值的準確(que)性(xing)及重(zhong)復(fu)性(xing)。因此，壹(yi)次(ci)加(jia)樣(yang)時(shi)間(包括標(biao)準品(pin)及所(suo)有樣(yang)品(pin))*好控(kong)制在(zai)10分(fen)鐘內。推薦設(she)置復(fu)孔進(jin)行實驗。

3.          溫育：為(wei)防(fang)止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸發(fa)，實(shi)驗時(shi)請將(jiang)加上(shang)蓋(gai)或(huo)覆膜的(de)酶(mei)標板(ban)置於(yu)濕盒內，以避免液(ye)體(ti)蒸(zheng)發(fa)，洗(xi)板(ban)後(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行下步(bu)操作(zuo)，任(ren)何(he)時(shi)侯都應(ying)避(bi)免酶標板(ban)處於(yu)幹(gan)燥(zao)狀(zhuang)態，同(tong)時(shi)應嚴格遵守給(gei)定的(de)溫育時(shi)間和(he)溫度(du)。

4.         洗(xi)滌(di)：充(chong)分(fen)的洗(xi)滌(di)非(fei)常(chang)重(zhong)要，在(zai)每次洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中，都(dou)要(yao)將(jiang)洗(xi)滌(di)液(ye)完(wan)全(quan)甩幹(gan)。洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中反(fan)應(ying)孔中(zhong)殘(can)留(liu)的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)應(ying)在(zai)濾(lv)紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，勿將(jiang)濾紙直接(jie)放(fang)入反應孔中(zhong)吸(xi)水，同(tong)時要(yao)消除(chu)板(ban)底殘(can)留(liu)的(de)液(ye)體(ti)和(he)手(shou)指(zhi)印，避免影(ying)響(xiang)*後(hou)的(de)酶(mei)標儀讀數(shu)。如(ru)果(guo)有自(zi)動洗(xi)板(ban)機(ji)，應在(zai)熟(shu)練(lian)使(shi)用(yong)後(hou)再(zai)用(yong)到正式(shi)實(shi) 驗過(guo)程(cheng)中。

5.         反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)的控(kong)制：加(jia)入底物後(hou)請(qing)定(ding)時觀(guan)察反(fan)應孔的(de)顏(yan)色(se)變(bian)化(hua)(比如(ru)，每隔10分(fen)鐘觀(guan)察壹(yi)次(ci))，如(ru)顏(yan)色(se)較深(shen)，請提(ti)前(qian)加入終止液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應，避免反應(ying)過(guo)強(qiang)從而(er)影(ying)響(xiang)酶(mei)標(biao)儀光密度(du)讀數(shu)。

6.         底物：底物請(qing)避光(guang)保(bao)存(cun)，在(zai)儲存(cun)和(he)溫育時(shi)避免強(qiang)光直(zhi)接(jie)照射。

7.         如(ru)果(guo)實(shi)驗室內濕(shi)度(du)低(di)於60%，推薦使(shi)用(yong)加濕器(qi)提(ti)高(gao)濕(shi)度(du)水(shui)平。

 實(shi)驗流(liu)程

1.         實(shi)驗前(qian)標準品(pin)、試劑及(ji)樣本(ben)的準備(bei)；

2.         加(jia)樣(yang)（標(biao)準品(pin)及樣(yang)本(ben)）50μL，37℃孵育30分(fen)鐘；

3.         洗(xi)板(ban)5次，加(jia)酶(mei)標(biao)試劑50ul，37℃孵育半小時；

4.         洗(xi)板(ban)5次；加(jia)入顯色(se)液(ye)A，B各(ge)50ul,37℃孵育顯色(se)15分(fen)鐘

5.         加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，立即450nm讀數(shu)。

6.    計(ji)算(suan)

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒計算(suan)

各(ge)標準品(pin)及樣(yang)本(ben)O.D.值扣除(chu)空白(bai)孔O.D.值後(hou)作(zuo)圖(七(qi)點(dian)圖)，如(ru)設(she)置復(fu)孔，則(ze)應(ying)取(qu)其平均(jun)值計算(suan)。以標準品(pin)的濃(nong)度(du)為(wei)縱坐(zuo)標(或(huo)對數(shu)坐標)，O.D.值為橫(heng)坐(zuo)標(或(huo)對數(shu)坐標），繪出標(biao)準曲(qu)線(xian)(*佳(jia)方(fang)程(cheng)式(shi)應依回歸(gui)方(fang)程(cheng)計(ji)算(suan)的R2值來(lai)定(ding)，以R2值越趨(qu)近(jin)於1為(wei)好(hao))。推薦使(shi)用(yong)專業制(zhi)作(zuo)曲(qu)線(xian)軟(ruan)件進(jin)行分(fen)析，如(ru)curve expert 1.30，根(gen)據樣(yang)品(pin)O.D.值，由標(biao)準曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃(nong)度(du)，乘(cheng)以稀釋(shi)倍數(shu)；或(huo)用(yong)標準物的濃(nong)度(du)與(yu)O.D.值計算(suan)出標準曲(qu)線(xian)的回(hui)歸方(fang)程(cheng)式(shi)，將(jiang)樣品(pin)的O.D.值代入方(fang)程(cheng)式(shi)，計算(suan)出樣品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘以稀釋(shi)倍數(shu)，即為樣品(pin)的實(shi)際濃(nong)度(du)。

 特異性(xing)

本(ben)試(shi)劑盒用(yong)於檢測(ce)牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)，經(jing)檢(jian)測(ce)與(yu)其它相(xiang)似物質(zhi)無明(ming)顯交叉反應。

由於(yu)受(shou)到(dao)技(ji)術(shu)及(ji)樣(yang)本來(lai)源(yuan)的限(xian)制(zhi)，不可能完(wan)成(cheng)對所(suo)有相(xiang)關(guan)或(huo)相(xiang)似物質(zhi)交叉反應檢(jian)測，因此本試劑盒有可能與(yu)未經檢(jian)測(ce)的(de)其它物(wu)質(zhi)有交叉反應。

 精(jing)密度(du)

精(jing)密度(du)用(yong)樣品(pin)測定(ding)值的變(bian)異系(xi)數(shu)CV表(biao)示。CV(%) = SD/mean×100

批(pi)內差(cha)：取(qu)同(tong)批(pi)次試劑盒對低(di)、中、高(gao)值定值樣本(ben)進(jin)行定量(liang)檢測(ce),每份(fen)樣(yang)本(ben)連(lian)續(xu)測定20 次，分(fen)別計算(suan)不同濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平均(jun)值及SD值。

批(pi)間差(cha)：選(xuan)取(qu)3個(ge)不同(tong)批(pi)次的試(shi)劑盒分(fen)別對低(di)、中、高(gao)值定值樣本(ben)進(jin)行定量(liang)測定(ding)，每個樣(yang)本(ben)使(shi)用(yong)同壹(yi)試(shi)劑盒重(zhong)復(fu)測(ce)定(ding)8次(ci)，分(fen)別計算(suan)不同濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平均(jun)值及SD值。

批(pi)內差(cha)： CV<10%

批(pi)間差(cha)： CV<12%

牛90kDa熱(re)休(xiu)克(ke)蛋白(bai)αB1(HSP90αB1)ELISA試(shi)劑盒穩(wen)定性(xing)

經(jing)測(ce)定(ding)，試(shi)劑盒在(zai)有效(xiao)期(qi)內按(an)推薦溫度(du)保(bao)存，其活性(xing)降低(di)率小(xiao)於5%。

為(wei)減(jian)小外部(bu)因素對試(shi)劑盒破壞前(qian)後(hou)檢(jian)測(ce)值的影(ying)響(xiang)，實(shi)驗室的環境(jing)條件需(xu)盡量(liang)保(bao)持壹(yi)致(zhi)，尤其是(shi)實驗室內溫度(du)、濕(shi)度(du)及(ji)溫育條件。其次由同(tong)壹(yi)實(shi)驗員(yuan)來(lai)進(jin)行操作(zuo)可減(jian)少(shao)人為(wei)誤(wu)差(cha)。