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96T 僅(jin)供(gong)體(ti)外(wai)研究(jiu)使(shi)用(yong),不用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)!
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒
本試劑盒運用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)ELISA法定量測(ce)定牛血(xue)清、血(xue)漿、組織勻漿(jiang)、細(xi)胞(bao)裂解液、細胞(bao)培養(yang)上(shang)清液(ye)和(he)其他生物(wu)液體中(zhong)牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)含量(liang)。
檢測(ce)範圍
12.5-800ng/mL
*低(di)檢測(ce)限
4.9ng/mL
實驗(yan)原理
將(jiang)牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)抗(kang)體包(bao)被(bei)於96孔(kong)微(wei)孔(kong)板(ban)中(zhong),制(zhi)成(cheng)固(gu)相載(zai)體(ti),向(xiang)微(wei)孔(kong)中(zhong)分別加(jia)入標(biao)準(zhun)品或標(biao)本,其中(zhong)的牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)與連(lian)接於(yu)固(gu)相載(zai)體(ti)上(shang)的抗體結合(he),然後加(jia)入生(sheng)物素(su)化(hua)的牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)抗(kang)體,將(jiang)未(wei)結合(he)的生物素(su)化(hua)抗體(ti)洗(xi)凈(jing)後,加(jia)入HRP標(biao)記(ji)的親和素(su),再次(ci)徹底(di)洗(xi)滌(di)後加(jia)入TMB底(di)物(wu)顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色(se),並在(zai)酸(suan)的作用下(xia)轉化(hua)成(cheng)*終的黃色(se)。顏色(se)的深淺(qian)和樣品中(zhong)的牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)呈(cheng)正相關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波長下(xia)測(ce)定吸光度(du)(O.D.值(zhi)),計(ji)算(suan)樣品濃度(du)。
試劑盒內容(rong)
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試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數(shu)量(liang) |
試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數(shu)量(liang) |
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96孔(kong)板(ban)(預(yu)包(bao)被(bei)) |
1 |
96孔(kong)板(ban)覆(fu)膜 |
2 |
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標(biao)準(zhun)品 |
0.5ml×1 |
標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye) |
1.5ml×1瓶 |
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顯(xian)色(se)劑A液 |
6ml×1瓶 |
樣品稀(xi)釋(shi)液(ye) |
6ml×1瓶 |
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顯(xian)色(se)劑B液 |
6ml×1瓶 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
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酶(mei)標(biao)試劑 |
6ml×1瓶 |
密封袋(dai) |
1 |
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濃洗滌(di)液(30×) |
1×20mL |
使用(yong)說(shuo)明書 |
1 |
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒需自(zi)備(bei)的設(she)備(bei)及(ji)試劑
1. 450±10nm濾光片(pian)的酶標(biao)儀(建議(yi)儀(yi)器(qi)使用(yong)前(qian)提(ti)前(qian)預(yu)熱)
2. 單(dan)道或多道微(wei)量(liang)加(jia)液器(qi)及(ji)吸頭(tou)
3. 稀(xi)釋(shi)樣品的EP管
4. 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去離(li)子水
5. 吸(xi)水紙
6. 盛放(fang)洗(xi)液(ye)的容器(qi)
試劑盒的儲存(cun)及(ji)有效期(qi)
1. 未開封的試劑盒:所有試劑均(jun)按試(shi)劑瓶標(biao)簽上(shang)所示保(bao)存(cun)。請註意(yi),收(shou)到試(shi)劑盒後請(qing)盡快(kuai)將(jiang)TMB 洗(xi)滌(di)液,終止液保(bao)存(cun)於4℃,其他試劑保(bao)存(cun)於-20℃。
2. 使用後的試劑盒:剩余(yu)試(shi)劑仍需按照(zhao)試劑瓶標(biao)簽所示的溫度(du)保(bao)存(cun),開封後的酶標(biao)板要加(jia)幹燥(zao)劑後密封保(bao)存(cun)於-20℃,避(bi)免(mian)潮濕(shi)。
註意(yi):
試(shi)劑盒內酶(mei)標(biao)條可(ke)拆(chai)卸,按實(shi)驗(yan)需求(qiu)可(ke)分(fen)多次(ci)使用(yong);使(shi)用(yong)後的剩余(yu)試(shi)劑盒建議(yi)在(zai)**實(shi)驗(yan)後 1個(ge)月內使(shi)用完(wan)畢(bi)。產品過期時間以(yi)盒子(zi)上(shang)的標(biao)簽為(wei)準(zhun),保(bao)質期內所有組分都確保(bao)是穩定的。
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒標(biao)本的采集(ji)與保(bao)存(cun)
1. 血(xue)清:
將(jiang)收(shou)集(ji)於血(xue)清分(fen)離(li)管的全血(xue)標(biao)本在(zai)室(shi)溫放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時或 4oC 過(guo)夜,然後 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke),或(huo)將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或-80oC 保(bao)存(cun),但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
2. 血(xue)漿:
用 EDTA 或(huo)肝素(su)作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑采集(ji)標(biao)本,並將(jiang)標(biao)本在(zai)采集(ji)後的 30 分鐘內於(yu) 2-8oC 1000×g 離(li)心(xin) 15 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce),或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或-80oC 保(bao)存(cun),但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
3. 組織勻漿(jiang):
1) 取(qu)適量(liang)組織塊,於預(yu)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中(zhong)清洗(xi)去除血(xue)液,稱重(zhong)後備(bei)用(組織塊較(jiao)大(da)需(xu)先(xian)剪(jian)碎(sui)後再勻漿(jiang));
2) 可(ke)同(tong)時選(xuan)用多種勻漿(jiang)方法達到較(jiao)好的破(po)碎(sui)效果(guo):首(shou)先(xian)將(jiang)組織塊移入玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi),加(jia)入5-10mL 預(yu)冷PBS 進行(xing)充(chong)分研(yan)磨,該過程(cheng)需(xu)在冰上進行(有條件實驗(yan)室(shi)可(ke)選(xuan)用機(ji)器(qi)勻漿(jiang));得(de)到的勻漿(jiang)液(ye)可(ke)再利用(yong)超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)或(huo)反(fan)復(fu)凍(dong)融 進壹(yi)步(bu)處(chu)理(li)(超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)過(guo)程(cheng)中(zhong)註意(yi)冰浴降(jiang)溫;反(fan)復(fu)凍(dong)融法可(ke)重(zhong)復(fu)2 次(ci))。
3) 將(jiang)制(zhi)備(bei)好的勻漿(jiang)液(ye)於(yu)5000×g 離(li)心(xin)5 分(fen)鐘(zhong),留取上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)。
4. 細胞(bao)裂解液:
1)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)需要先(xian)用胰酶(mei)消(xiao)化(hua),離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細胞(bao)(懸浮細胞(bao)可(ke)直接離(li)心(xin)收(shou)集(ji));
2)將(jiang)收(shou)集(ji)到的細胞(bao)用冷PBS 洗3 次(ci);
3)物理方法裂(lie)解(jie)細胞(bao)(可(ke)先(xian)超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)細(xi)胞(bao),再反(fan)復(fu)凍(dong)融):
i 超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui):取(qu)適量(liang)PBS 重懸細胞(bao),用壹(yi)定功率的超(chao)聲(sheng)波處(chu)理(li)細胞(bao)懸液,使細胞(bao)急劇震(zhen)蕩(dang)破(po)裂(lie)。
ii 反(fan)復(fu)凍(dong)融:將(jiang)待(dai)破(po)碎(sui)的細胞(bao)在-20 oC 以(yi)下(xia)冰凍,室(shi)溫融解,反(fan)復(fu)3 次(ci),使細(xi)胞(bao)溶脹破(po)碎(sui)。
4)將(jiang)標(biao)本於(yu)2-8 oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong),收(shou)集(ji)上清備(bei)用。
5. 細(xi)胞(bao)培養(yang)上(shang)清或(huo)其它生物(wu)標(biao)本:
請 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong),取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce),或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20oC 或-80oC 保(bao)存(cun),但(dan)應避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。
註意(yi):
1. 以(yi)上標(biao)本均(jun)需(xu)密封保(bao)存(cun),4oC保(bao)存(cun)應小(xiao)於(yu)1周,-20oC不應超(chao)過(guo)1個月,-80oC不應超(chao)過(guo)2個月。
2. 標(biao)本使(shi)用前(qian)應緩慢均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫,不應加(jia)熱使(shi)之(zhi)融解(jie)。
3. 實驗(yan)前(qian)紅細(xi)胞(bao)裂解液必(bi)須用標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)。
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒試劑準(zhun)備(bei)
1. 使(shi)用前(qian)將(jiang)所有的試劑和標(biao)本緩慢均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫(18-25oC),試劑不能(neng)直接在(zai)37oC溶(rong)解。
2. 標(biao)準(zhun)品(凍(dong)幹(gan)品):每瓶標(biao)準(zhun)品加(jia)入標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)1mL,蓋(gai)好後室(shi)溫靜(jing)置(zhi)大(da)約(yue)10分(fen)鐘(zhong),同(tong)時反(fan)復(fu)顛(dian)倒/搓動以助(zhu)溶解(jie),其濃度(du)為(wei)800ng/mL。準(zhun)備(bei)7個稀(xi)釋(shi)標(biao)準(zhun)品的EP管,每個(ge)EP管中(zhong)加(jia)入150μL的標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye),如(ru)圖(tu)所示依次(ci)倍比(bi)稀(xi)釋(shi)成(cheng)不同(tong)的梯度(du), 標(biao)準(zhun)品稀(xi)釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直接作(zuo)為(wei)空白(bai)孔(kong)。為(wei)保(bao)證(zheng)實驗(yan)結果(guo)有效性(xing),每(mei)次(ci)實驗(yan)請使(shi)用新的標(biao)準(zhun)品溶液。
3. 濃洗滌(di)液:用(yong)580mL蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去離(li)子水將(jiang)20mL濃洗滌(di)液稀(xi)釋(shi)至(zhi)600mL,進行30倍(bei)稀(xi)釋(shi)。
標(biao)本處(chu)理(li)
1. 本公司只(zhi)對試(shi)劑盒本身(shen)負責,不對因使(shi)用(yong)該試劑盒所造成(cheng)的樣本(ben)消(xiao)耗負(fu)責,請(qing)使(shi)用者使用(yong)前(qian)充(chong)分考(kao)慮到樣本(ben)的可(ke)能(neng)使(shi)用(yong)量(liang),預留充(chong)足的樣本(ben)。
2. 實驗(yan)前(qian)應預(yu)測(ce)標(biao)本含量(liang),如(ru)果(guo)標(biao)本濃度(du)過(guo)高(gao),應對標(biao)本進(jin)行稀(xi)釋(shi),使(shi)稀(xi)釋(shi)後的標(biao)本符(fu)合(he)試(shi)劑盒的檢測(ce)範圍,計算(suan)時再乘以相應的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。
3. 若所檢樣本(ben)不包(bao)含在(zai)說(shuo)明書所列樣本(ben)之(zhi)中(zhong),建議(yi)進(jin)行(xing)預(yu)實驗(yan)驗(yan)證其有效性(xing),並註意(yi)留存樣本(ben)。
4. 使用(yong)化(hua)學裂(lie)解(jie)液制(zhi)備(bei)的組織勻漿(jiang)或(huo)細(xi)胞(bao)提(ti)取液(ye)可(ke)能(neng)會(hui)由於某些(xie)化(hua)學物(wu)質的引(yin)入導致(zhi) ELISA實驗(yan)結果(guo)偏差(cha)。
5. 若樣本(ben)為(wei)細胞(bao)培養(yang)上(shang)清,因該類樣本(ben)幹(gan)擾因素(su) 較(jiao)多,如:細(xi)胞(bao)狀態、細胞(bao)數(shu)量(liang)、采樣時間等(deng),所以可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)檢(jian)測(ce)不出(chu)的情(qing)況(kuang)。
6. 某些(xie)天然蛋白或(huo)重(zhong)組蛋白,包(bao)括原核及(ji)真(zhen)核重(zhong)組蛋白,可(ke)能(neng)因為(wei)與本(ben)產品所使用的檢測(ce)抗體及(ji)捕(bu)獲(huo)抗體(ti)不匹(pi)配,而(er)不被(bei)檢測(ce)出。
7. 建議(yi)使(shi)用(yong)新鮮(xian)樣本(ben),保(bao)存(cun)時間過(guo)長可(ke)能(neng)會(hui)存(cun)在(zai)蛋白降(jiang)解或(huo)變(bian)性導致(zhi)實驗(yan)結果(guo)偏差(cha)。
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒操作(zuo)步(bu)驟(zhou)
1. 加(jia)樣:分(fen)別設(she)空白(bai)孔(kong)(空(kong)白(bai)對照(zhao)孔(kong)不加(jia)樣品及(ji)酶標(biao)試劑,其余(yu)各步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong))、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)測(ce)樣品孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加(jia)樣50μl,待(dai)測(ce)樣品孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl,然後再加(jia)待測(ce)樣品10μl(樣品*終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍)。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶(mei)標(biao)板孔(kong)底(di)部,盡量不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi),輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻。
2. 溫(wen)育:用封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分鐘。
3. 配液:將(jiang)20倍(bei)濃縮洗滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)20倍(bei)稀(xi)釋(shi)後備(bei)用
4. 洗滌(di):小心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜,棄(qi)去液體(ti),甩幹(gan),每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液,靜(jing)置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去,如此(ci)重復(fu)5次(ci),拍幹(gan)。
5. 加(jia)酶:每(mei)孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試劑50μl,空白孔(kong)除(chu)外(wai)。
6. 溫育(yu):操作同(tong)3。
7. 洗(xi)滌(di):操作(zuo)同(tong)5。
8. 顯(xian)色(se):每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl,再加(jia)入顯(xian)色(se)劑B50μl,輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻,37℃避(bi)光顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong).
9. 終止:每孔(kong)加(jia)終止液50μl,終止反(fan)應(此(ci)時藍色(se)立轉黃色(se))。
10. 測(ce)定:以空(kong)白(bai)空調(tiao)零,450nm波長依序測(ce)量各孔(kong)的吸光度(du)(OD值(zhi))。 測(ce)定應在(zai)加(jia)終止液後15分(fen)鐘以內進(jin)行。
註意(yi):
1. 試(shi)劑準(zhun)備(bei):準(zhun)備(bei)壹(yi)次(ci)實驗(yan)所需要的酶標(biao)條,其它的可(ke)從微(wei)孔(kong)板(ban)上(shang)拆(chai)下(xia),密封,按照(zhao)說明(ming)書要求(qiu)保(bao)存(cun),以備(bei)下(xia)次(ci)使用(yong)。
2. 加(jia)樣:實(shi)驗(yan)操作(zuo)中(zhong)請使用壹(yi)次(ci)性的吸頭(tou),避(bi)免交叉汙染(ran)。加(jia)樣時註意(yi)不要有氣(qi)泡(pao),將(jiang)樣品加(jia)於酶(mei)標(biao)板底(di)部,盡量不觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi),輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻。加(jia)樣或(huo)加(jia)試劑時,**個孔(kong)與*後壹(yi)個(ge)孔(kong)加(jia)樣之(zhi)間的時間間(jian)隔如(ru)果(guo)太(tai)大(da),將(jiang)會(hui)導致(zhi)不同(tong)的“預溫育”時間,從而(er)明(ming)顯地影響到測(ce)量值(zhi)的準(zhun)確性(xing)及(ji)重復(fu)性(xing)。因此(ci),壹(yi)次(ci)加(jia)樣時間(包(bao)括標(biao)準(zhun)品及(ji)所有樣品)*好控制(zhi)在(zai)10分鐘(zhong)內。推(tui)薦設(she)置復(fu)孔(kong)進(jin)行(xing)實驗(yan)。
3. 溫育:為(wei)防止(zhi)樣品蒸(zheng)發,實(shi)驗(yan)時請將(jiang)加(jia)上蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜的酶標(biao)板置(zhi)於濕(shi)盒內,以(yi)避免(mian)液(ye)體(ti)蒸(zheng)發,洗(xi)板(ban)後應盡快(kuai)進行(xing)下(xia)步(bu)操(cao)作(zuo),任(ren)何(he)時侯都應避(bi)免(mian)酶標(biao)板處(chu)於(yu)幹燥(zao)狀態(tai),同(tong)時應嚴格遵守(shou)給(gei)定的溫育時間和(he)溫度(du)。
4. 洗滌(di):充(chong)分的洗滌(di)非常(chang)重(zhong)要,在(zai)每次(ci)洗滌(di)過程(cheng)中(zhong),都要將(jiang)洗(xi)滌(di)液完(wan)全(quan)甩(shuai)幹。洗滌(di)過程(cheng)中(zhong)反(fan)應孔(kong)中(zhong)殘(can)留的洗滌(di)液應在(zai)濾(lv)紙上(shang)拍幹,勿(wu)將(jiang)濾(lv)紙(zhi)直接放(fang)入(ru)反(fan)應孔(kong)中(zhong)吸水,同(tong)時要消(xiao)除板(ban)底(di)殘(can)留的液體和手(shou)指(zhi)印(yin),避免影(ying)響(xiang)*後的酶標(biao)儀讀(du)數(shu)。如(ru)果(guo)有自動(dong)洗板(ban)機(ji),應在(zai)熟練(lian)使(shi)用(yong)後再用到正(zheng)式(shi)實 驗(yan)過程(cheng)中(zhong)。
5. 反(fan)應時間的控制(zhi):加(jia)入底(di)物(wu)後請(qing)定時觀察反(fan)應孔(kong)的顏色(se)變(bian)化(hua)(比(bi)如(ru),每(mei)隔(ge)10分鐘觀察壹(yi)次(ci)),如顏色(se)較(jiao)深(shen),請(qing)提(ti)前(qian)加(jia)入終止液終止反(fan)應,避(bi)免(mian)反(fan)應過(guo)強(qiang)從而(er)影(ying)響酶(mei)標(biao)儀光密度(du)讀(du)數(shu)。
6. 底(di)物(wu):底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光保(bao)存(cun),在儲存(cun)和(he)溫育(yu)時避免(mian)強光直接照(zhao)射。
7. 如(ru)果(guo)實驗(yan)室(shi)內濕(shi)度(du)低(di)於60%,推薦(jian)使用加(jia)濕(shi)器(qi)提(ti)高(gao)濕(shi)度(du)水(shui)平。
實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)
1. 實(shi)驗(yan)前(qian)標(biao)準(zhun)品、試劑及(ji)樣本(ben)的準(zhun)備(bei);
2. 加(jia)樣(標(biao)準(zhun)品及(ji)樣本(ben))50μL,37℃孵育30分(fen)鐘(zhong);
3. 洗(xi)板(ban)5次(ci),加(jia)酶標(biao)試劑50ul,37℃孵育半小時;
4. 洗板(ban)5次(ci);加(jia)入顯(xian)色(se)液(ye)A,B各50ul,37℃孵(fu)育(yu)顯(xian)色(se)15分(fen)鐘(zhong)
5. 加(jia)終止液50μL,立即(ji)450nm讀(du)數(shu)。
6. 計算(suan)
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒計算(suan)
各標(biao)準(zhun)品及(ji)樣本(ben)O.D.值(zhi)扣(kou)除空(kong)白孔(kong)O.D.值(zhi)後作(zuo)圖(七(qi)點圖),如(ru)設(she)置復(fu)孔(kong),則(ze)應取(qu)其平均(jun)值(zhi)計(ji)算(suan)。以(yi)標(biao)準(zhun)品的濃度(du)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)(或對數(shu)坐(zuo)標(biao)),O.D.值(zhi)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)(或對數(shu)坐(zuo)標(biao)),繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲線(*佳方程(cheng)式(shi)應依回(hui)歸方程(cheng)計(ji)算的R2值(zhi)來定,以R2值(zhi)越趨(qu)近於1為(wei)好)。推(tui)薦(jian)使用(yong)專(zhuan)業(ye)制(zhi)作(zuo)曲線軟件進行(xing)分析,如curve expert 1.30,根據(ju)樣品O.D.值(zhi),由標(biao)準(zhun)曲線查出(chu)相應的濃度(du),乘(cheng)以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu);或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物的濃度(du)與O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標(biao)準(zhun)曲線的回(hui)歸方程(cheng)式(shi),將(jiang)樣品的O.D.值(zhi)代入方程(cheng)式(shi),計算(suan)出樣品濃度(du),再乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu),即(ji)為(wei)樣品的實際濃度(du)。
特異性
本(ben)試(shi)劑盒用於(yu)檢測(ce)牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG),經檢測(ce)與其它相似(si)物質無明顯(xian)交叉反(fan)應。
由於受(shou)到技(ji)術(shu)及(ji)樣本(ben)來源的限制(zhi),不可(ke)能(neng)完(wan)成(cheng)對所有相關(guan)或(huo)相似(si)物質交叉反(fan)應檢(jian)測(ce),因此(ci)本(ben)試劑盒有可(ke)能(neng)與未(wei)經(jing)檢測(ce)的其它物質有交叉反(fan)應。
精密度(du)
精密度(du)用(yong)樣品測(ce)定值(zhi)的變異系數(shu)CV表(biao)示。CV(%) = SD/mean×100
批內差(cha):取同(tong)批次(ci)試劑盒對低(di)、中(zhong)、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣本(ben)進(jin)行定量檢(jian)測(ce),每份(fen)樣本(ben)連(lian)續(xu)測(ce)定20 次(ci),分別計算(suan)不同(tong)濃度(du)樣本(ben)的平均(jun)值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。
批(pi)間差:選(xuan)取3個(ge)不同(tong)批次(ci)的試劑盒分別對低(di)、中(zhong)、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣本(ben)進(jin)行定量測(ce)定,每個(ge)樣本(ben)使(shi)用同(tong)壹(yi)試(shi)劑盒重復(fu)測(ce)定8次(ci),分別計算(suan)不同(tong)濃度(du)樣本(ben)的平均(jun)值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。
批(pi)內差(cha): CV<10%
批(pi)間(jian)差: CV<12%
牛α2-HS糖蛋(dan)白(αHSG)ELISA試劑盒穩定性
經測(ce)定,試劑盒在有效期(qi)內按推(tui)薦溫度(du)保(bao)存(cun),其活(huo)性(xing)降(jiang)低率小於(yu)5%。
為(wei)減小(xiao)外(wai)部因素(su)對試(shi)劑盒破(po)壞(huai)前(qian)後檢(jian)測(ce)值(zhi)的影響,實驗(yan)室(shi)的環境條件需盡量保(bao)持(chi)壹(yi)致(zhi),尤其是實驗(yan)室(shi)內溫(wen)度(du)、濕(shi)度(du)及(ji)溫育(yu)條件。其次(ci)由同(tong)壹(yi)實(shi)驗(yan)員來進(jin)行操作(zuo)可(ke)減(jian)少(shao)人為(wei)誤差(cha)。



