產(chan)品名稱(cheng)：犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒

                                                       96T       僅(jin)供(gong)體(ti)外(wai)研(yan)究使(shi)用，不(bu)用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷!

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒

本試劑盒運用(yong)雙抗(kang)體(ti)夾心(xin)ELISA法(fa)定(ding)量(liang)測定(ding)犬血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)、組織(zhi)勻漿、細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)、細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清液(ye)和(he)其他(ta)生(sheng)物(wu)液體(ti)中犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)含量。

 檢(jian)測範圍(wei)

0.313-20ng/mL

 *低(di)檢(jian)測限

0.126ng/mL

 實(shi)驗(yan)原理(li)

將犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)抗(kang)體(ti)包被(bei)於(yu)96孔(kong)微(wei)孔板中，制成(cheng)固相載(zai)體，向微(wei)孔中分別(bie)加入標(biao)準(zhun)品(pin)或標(biao)本(ben)，其中的犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)與連接(jie)於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體上(shang)的抗(kang)體(ti)結合，然(ran)後(hou)加入生(sheng)物(wu)素(su)化(hua)的犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)抗(kang)體(ti)，將未(wei)結(jie)合的生(sheng)物(wu)素(su)化(hua)抗(kang)體(ti)洗凈(jing)後(hou)，加入HRP標(biao)記的(de)親(qin)和素(su)，再(zai)次徹(che)底(di)洗滌(di)後(hou)加入TMB底(di)物(wu)顯色。TMB在(zai)過氧(yang)化物(wu)酶的催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色，並在(zai)酸(suan)的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成*終(zhong)的黃(huang)色。顏(yan)色的深淺和(he)樣(yang)品(pin)中的犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)呈正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)(O.D.值(zhi))，計(ji)算(suan)樣品濃(nong)度(du)。

 試劑盒內容

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒需自備(bei)的設(she)備(bei)及(ji)試劑

1.         450±10nm濾(lv)光片(pian)的(de)酶標(biao)儀(yi)(建(jian)議儀(yi)器使(shi)用前(qian)提前預熱)

2.         單道(dao)或多(duo)道(dao)微(wei)量加液器(qi)及(ji)吸頭(tou)

3.         稀釋樣品的EP管(guan)

4.         蒸餾(liu)水(shui)或去(qu)離子水(shui)

5.         吸水(shui)紙

6.         盛(sheng)放(fang)洗液(ye)的(de)容器

 試劑盒的儲(chu)存(cun)及(ji)有(you)效期

1.         未(wei)開(kai)封(feng)的試劑盒：所有(you)試劑均按(an)試劑瓶(ping)標(biao)簽上(shang)所示(shi)保(bao)存(cun)。請註(zhu)意，收(shou)到試劑盒後(hou)請盡(jin)快將TMB 洗滌(di)液(ye)，終(zhong)止液保(bao)存(cun)於(yu)4℃，其他(ta)試劑保(bao)存(cun)於(yu)-20℃。

2.         使(shi)用後(hou)的試劑盒：剩余(yu)試劑仍(reng)需(xu)按照試劑瓶(ping)標(biao)簽所示(shi)的(de)溫(wen)度保(bao)存(cun)，開(kai)封(feng)後(hou)的酶標(biao)板要(yao)加幹燥(zao)劑(ji)後(hou)密封(feng)保(bao)存(cun)於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)潮(chao)濕(shi)。

註(zhu)意：

試劑盒內酶標(biao)條可(ke)拆(chai)卸(xie)，按(an)實(shi)驗(yan)需求可分多次(ci)使(shi)用；使(shi)用後(hou)的剩(sheng)余試劑盒建議(yi)在(zai)**實(shi)驗(yan)後(hou) 1個(ge)月(yue)內(nei)使(shi)用完畢(bi)。產(chan)品過期時(shi)間(jian)以盒子上(shang)的標(biao)簽為準，保(bao)質期內(nei)所有(you)組分都確保(bao)是穩(wen)定(ding)的(de)。

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒標(biao)本(ben)的(de)采(cai)集(ji)與(yu)保(bao)存(cun)

1.         血(xue)清(qing)：

將(jiang)收(shou)集(ji)於(yu)血(xue)清(qing)分(fen)離管(guan)的(de)全血(xue)標(biao)本(ben)在(zai)室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi) 2 小(xiao)時(shi)或 4^oC 過夜，然(ran)後(hou) 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。

2.         血(xue)漿(jiang)：

用(yong) EDTA 或肝(gan)素(su)作(zuo)為抗(kang)凝(ning)劑(ji)采(cai)集(ji)標(biao)本(ben)，並(bing)將標(biao)本(ben)在(zai)采(cai)集(ji)後(hou)的 30 分(fen)鐘(zhong)內於 2-8^oC 1000×g 離心 15 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。

3. 組織(zhi)勻漿：

1） 取(qu)適量(liang)組織(zhi)塊，於預冷(leng)PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)，稱(cheng)重(zhong)後(hou)備(bei)用（組織(zhi)塊較大需(xu)先(xian)剪(jian)碎(sui)後(hou)再勻漿）；

2） 可(ke)同時(shi)選(xuan)用(yong)多(duo)種勻漿方法(fa)達到(dao)較好的(de)破(po)碎效果：首(shou)先將組織(zhi)塊移入(ru)玻(bo)璃勻漿器(qi)，加入5-10mL 預冷(leng)PBS 進(jin)行充(chong)分(fen)研(yan)磨，該(gai)過程需(xu)在(zai)冰上(shang)進(jin)行（有(you)條件實(shi)驗(yan)室可選用機器勻漿）；得(de)到(dao)的勻漿液(ye)可(ke)再利用超(chao)聲(sheng)破(po)碎或反(fan)復(fu)凍融 進(jin)壹步處理(li)（超(chao)聲(sheng)破(po)碎過程中註(zhu)意冰浴(yu)降(jiang)溫(wen)；反復(fu)凍融法(fa)可重(zhong)復(fu)2 次）。

3） 將制備(bei)好的(de)勻漿液(ye)於(yu)5000×g 離心5 分(fen)鐘(zhong)，留(liu)取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測。

4. 細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)：

1）貼壁(bi)細胞(bao)需(xu)要(yao)先(xian)用胰酶消(xiao)化，離心收(shou)集(ji)細胞(bao)（懸浮(fu)細胞(bao)可(ke)直(zhi)接(jie)離心收(shou)集(ji)）；

2）將收(shou)集(ji)到(dao)的(de)細胞(bao)用(yong)冷(leng)PBS 洗3 次(ci)；

3）物(wu)理(li)方法(fa)裂解(jie)細胞(bao)（可(ke)先(xian)超(chao)聲(sheng)破(po)碎細胞(bao)，再(zai)反(fan)復(fu)凍融）：

i 超(chao)聲(sheng)破(po)碎：取(qu)適量(liang)PBS 重懸細胞(bao)，用(yong)壹(yi)定(ding)功(gong)率(lv)的超(chao)聲(sheng)波(bo)處理(li)細胞(bao)懸液(ye)，使(shi)細胞(bao)急(ji)劇(ju)震蕩(dang)破裂(lie)。

ii 反復(fu)凍融：將(jiang)待破(po)碎的(de)細胞(bao)在(zai)-20 ^oC 以下(xia)冰凍，室(shi)溫(wen)融解(jie)，反(fan)復(fu)3 次，使(shi)細胞(bao)溶(rong)脹破碎。

4）將標(biao)本(ben)於(yu)2-8 ^oC 1500×g 離心10 分(fen)鐘(zhong)，收(shou)集(ji)上(shang)清備(bei)用。

5. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清或其它生(sheng)物(wu)標(biao)本(ben)：

請 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可(ke)檢(jian)測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。

註(zhu)意：

1.         以上(shang)標(biao)本(ben)均需(xu)密封(feng)保(bao)存(cun)，4^oC保(bao)存(cun)應(ying)小(xiao)於(yu)1周(zhou)，-20^oC不(bu)應(ying)超(chao)過1個(ge)月(yue)，-80^oC不(bu)應(ying)超(chao)過2個(ge)月(yue)。

2.         標(biao)本(ben)使(shi)用前(qian)應(ying)緩慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)，不應(ying)加熱使(shi)之(zhi)融解(jie)。

3.         實(shi)驗(yan)前紅細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)必須(xu)用(yong)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液稀釋。

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒試劑準(zhun)備(bei)

1.         使(shi)用前(qian)將(jiang)所有(you)的試劑和(he)標(biao)本(ben)緩慢均衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)(18-25oC)，試劑不(bu)能直(zhi)接(jie)在(zai)37oC溶(rong)解。

2.         標(biao)準(zhun)品(pin)(凍幹品)：每瓶(ping)標(biao)準(zhun)品(pin)加入標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液1mL，蓋好後(hou)室溫(wen)靜(jing)置大(da)約(yue)10分(fen)鐘(zhong)，同時反復(fu)顛(dian)倒/搓動(dong)以助(zhu)溶(rong)解(jie)，其濃(nong)度(du)為20ng/mL。準備(bei)7個(ge)稀(xi)釋標(biao)準(zhun)品(pin)的EP管(guan)，每(mei)個(ge)EP管(guan)中加入150μL的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液，如(ru)圖所示(shi)依(yi)次倍(bei)比稀釋成不同的梯(ti)度(du)， 標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋液(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作(zuo)為空白(bai)孔(kong)。為保(bao)證實(shi)驗(yan)結果有(you)效性(xing)，每(mei)次實(shi)驗(yan)請使(shi)用新(xin)的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)溶液(ye)。

3.         濃(nong)洗滌(di)液(ye)：用(yong)580mL蒸餾(liu)水(shui)或去(qu)離子水(shui)將20mL濃(nong)洗滌(di)液(ye)稀(xi)釋至(zhi)600mL，進(jin)行30倍(bei)稀(xi)釋。

標(biao)本(ben)處理(li)

1.         本公司(si)只對試劑盒本身(shen)負責(ze)，不(bu)對因(yin)使(shi)用該(gai)試劑盒所造(zao)成(cheng)的(de)樣本消(xiao)耗負責(ze)，請使(shi)用者(zhe)使(shi)用前(qian)充(chong)分(fen)考(kao)慮到(dao)樣(yang)本(ben)的(de)可(ke)能使(shi)用量(liang)，預留(liu)充(chong)足(zu)的(de)樣本(ben)。

2.         實(shi)驗(yan)前應(ying)預測標(biao)本(ben)含(han)量，如(ru)果標(biao)本(ben)濃(nong)度(du)過高(gao)，應(ying)對標(biao)本(ben)進(jin)行稀(xi)釋，使(shi)稀釋後(hou)的標(biao)本(ben)符(fu)合試劑盒的檢(jian)測範圍(wei)，計算(suan)時再乘(cheng)以相應(ying)的(de)稀(xi)釋倍數(shu)。

3.         若所檢(jian)樣(yang)本不(bu)包含在(zai)說明書(shu)所列(lie)樣(yang)本之(zhi)中，建議(yi)進(jin)行預實(shi)驗(yan)驗(yan)證其有(you)效性(xing)，並(bing)註(zhu)意留(liu)存(cun)樣(yang)本(ben)。

4.         使(shi)用化(hua)學(xue)裂(lie)解(jie)液(ye)制備(bei)的組織(zhi)勻漿或細胞(bao)提取(qu)液可(ke)能會(hui)由(you)於(yu)某些化(hua)學(xue)物(wu)質的引(yin)入(ru)導致  ELISA實(shi)驗(yan)結果偏(pian)差。

5.         若樣本為細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清，因(yin)該(gai)類樣(yang)本(ben)幹擾(rao)因素(su) 較多，如(ru)：細胞(bao)狀(zhuang)態、細胞(bao)數(shu)量(liang)、采(cai)樣時(shi)間等，所以可能存(cun)在(zai)檢(jian)測不出(chu)的情(qing)況。

6.         某些天然(ran)蛋(dan)白(bai)或重(zhong)組蛋(dan)白(bai)，包(bao)括原(yuan)核及(ji)真核重組蛋(dan)白(bai)，可(ke)能因為與本(ben)產(chan)品所使(shi)用的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)及(ji)捕(bu)獲抗(kang)體(ti)不匹(pi)配(pei)，而不(bu)被(bei)檢(jian)測出(chu)。

7.         建議使(shi)用新(xin)鮮(xian)樣本(ben)，保(bao)存(cun)時(shi)間(jian)過長可(ke)能會(hui)存(cun)在(zai)蛋(dan)白(bai)降(jiang)解(jie)或變(bian)性(xing)導致實(shi)驗(yan)結果偏(pian)差。

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒操(cao)作步驟(zhou)

1.         加樣：分(fen)別(bie)設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對照(zhao)孔不加樣品(pin)及(ji)酶標(biao)試劑，其余各步操(cao)作相同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣品(pin)孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準確(que)加樣50μl，待測樣品(pin)孔中先加樣品(pin)稀釋液40μl，然(ran)後(hou)再加待測樣品(pin)10μl（樣品(pin)*終(zhong)稀釋度為5倍）。加樣將(jiang)樣品(pin)加於酶標(biao)板孔(kong)底(di)部(bu)，盡量不觸(chu)及(ji)孔壁(bi)，輕輕(qing)晃動(dong)混勻。

2.         溫(wen)育：用封板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫(wen)育30分鐘(zhong)。  

3.         配(pei)液(ye)：將20倍濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸餾(liu)水(shui)20倍稀(xi)釋後(hou)備(bei)用

4.         洗滌(di)：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄去(qu)液體(ti)，甩幹，每孔加滿洗滌(di)液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄去(qu)，如(ru)此(ci)重復(fu)5次，拍幹。

5.         加酶：每孔(kong)加入酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外。

6.         溫(wen)育：操(cao)作同3。

7.         洗滌(di)：操(cao)作同5。

8.         顯色：每孔(kong)先(xian)加入顯(xian)色劑A50μl，再(zai)加入顯(xian)色劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光(guang)顯(xian)色15分鐘(zhong).

9.         終(zhong)止：每孔(kong)加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此(ci)時藍色立(li)轉(zhuan)黃(huang)色）。

10.     測定(ding)：以空白(bai)空(kong)調零(ling)，450nm波(bo)長依(yi)序(xu)測量各孔的(de)吸光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加終(zhong)止液後(hou)15分鐘(zhong)以內進(jin)行。

註(zhu)意：

1.         試劑準(zhun)備(bei)：準備(bei)壹次(ci)實(shi)驗(yan)所需(xu)要(yao)的酶標(biao)條，其它的(de)可從(cong)微(wei)孔板上(shang)拆(chai)下(xia)，密封(feng)，按(an)照說明書(shu)要(yao)求保(bao)存(cun)，以備(bei)下(xia)次使(shi)用。

2.         加樣：實(shi)驗(yan)操(cao)作中請使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)的(de)吸頭(tou)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙染(ran)。加樣時(shi)註(zhu)意不(bu)要有(you)氣泡(pao)，將樣(yang)品加於酶標(biao)板底(di)部(bu)，盡量不觸(chu)及(ji)孔壁(bi)，輕輕(qing)晃動(dong)混勻。加樣或加試劑時(shi)，**個(ge)孔(kong)與(yu)*後(hou)壹個(ge)孔(kong)加樣之(zhi)間的時(shi)間間(jian)隔如(ru)果太(tai)大，將會(hui)導致不同的(de)“預溫(wen)育”時間，從(cong)而明(ming)顯(xian)地(di)影(ying)響到測量值(zhi)的(de)準(zhun)確(que)性(xing)及(ji)重復(fu)性(xing)。因(yin)此(ci)，壹次(ci)加樣時(shi)間(包(bao)括標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)所有(you)樣品(pin))*好控(kong)制在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內。推(tui)薦(jian)設(she)置(zhi)復(fu)孔進(jin)行實(shi)驗(yan)。

3.          溫(wen)育：為防(fang)止樣品(pin)蒸發，實(shi)驗(yan)時請將(jiang)加上(shang)蓋或覆膜(mo)的(de)酶標(biao)板置(zhi)於(yu)濕(shi)盒內，以避免(mian)液(ye)體蒸發，洗板後(hou)應(ying)盡(jin)快進(jin)行下(xia)步操(cao)作，任何時侯都應(ying)避(bi)免(mian)酶標(biao)板處於(yu)幹燥(zao)狀(zhuang)態，同時(shi)應(ying)嚴(yan)格遵守(shou)給(gei)定(ding)的(de)溫(wen)育時間和(he)溫(wen)度。

4.         洗滌(di)：充(chong)分(fen)的(de)洗滌(di)非(fei)常重要(yao)，在(zai)每(mei)次洗滌(di)過程中，都要(yao)將洗滌(di)液(ye)完全甩幹。洗滌(di)過程中反應(ying)孔(kong)中殘留(liu)的(de)洗滌(di)液(ye)應(ying)在(zai)濾(lv)紙上(shang)拍幹，勿將濾紙直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)反(fan)應(ying)孔(kong)中吸水(shui)，同時(shi)要消(xiao)除(chu)板底(di)殘(can)留(liu)的(de)液體和手(shou)指(zhi)印(yin)，避免(mian)影(ying)響*後(hou)的酶標(biao)儀(yi)讀數(shu)。如(ru)果有(you)自動(dong)洗板機(ji)，應(ying)在(zai)熟(shu)練使(shi)用後(hou)再用(yong)到正(zheng)式(shi)實(shi) 驗(yan)過程中。

5.         反應(ying)時(shi)間(jian)的(de)控(kong)制：加入底(di)物(wu)後(hou)請定(ding)時(shi)觀(guan)察(cha)反(fan)應(ying)孔(kong)的(de)顏(yan)色變(bian)化(hua)(比(bi)如(ru)，每隔10分鐘(zhong)觀察(cha)壹(yi)次)，如(ru)顏(yan)色較深，請提前加入終(zhong)止液終(zhong)止反應(ying)，避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)過強(qiang)從而影(ying)響酶標(biao)儀(yi)光(guang)密度(du)讀數(shu)。

6.         底(di)物(wu)：底物(wu)請避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)，在(zai)儲(chu)存(cun)和(he)溫(wen)育時避免(mian)強(qiang)光直(zhi)接(jie)照(zhao)射。

7.         如(ru)果實(shi)驗(yan)室內濕(shi)度低(di)於(yu)60%，推(tui)薦(jian)使(shi)用加濕(shi)器提高濕(shi)度水(shui)平(ping)。

 實(shi)驗(yan)流程

1.         實(shi)驗(yan)前標(biao)準(zhun)品(pin)、試劑及(ji)樣本的準備(bei)；

2.         加樣（標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)樣本）50μL，37℃孵(fu)育30分鐘(zhong)；

3.         洗板5次(ci)，加酶標(biao)試劑50ul，37℃孵(fu)育半小時(shi)；

4.         洗板5次(ci)；加入顯(xian)色液A，B各50ul,37℃孵(fu)育顯色15分鐘(zhong)

5.         加終(zhong)止液50μL，立(li)即(ji)450nm讀數(shu)。

6.    計算(suan)

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒計算(suan)

各標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)樣本O.D.值(zhi)扣(kou)除(chu)空白(bai)孔(kong)O.D.值(zhi)後(hou)作圖(tu)(七(qi)點圖)，如(ru)設置復(fu)孔，則應(ying)取(qu)其平(ping)均值(zhi)計(ji)算(suan)。以標(biao)準(zhun)品(pin)的濃(nong)度(du)為縱坐(zuo)標(biao)(或對數(shu)坐(zuo)標(biao))，O.D.值(zhi)為橫(heng)坐(zuo)標(biao)(或對數(shu)坐(zuo)標(biao)），繪(hui)出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)(*佳(jia)方程式(shi)應(ying)依(yi)回(hui)歸(gui)方程計(ji)算(suan)的R2值(zhi)來(lai)定(ding)，以R2值(zhi)越趨(qu)近於1為好)。推(tui)薦(jian)使(shi)用專(zhuan)業(ye)制作(zuo)曲(qu)線(xian)軟(ruan)件進(jin)行分(fen)析(xi)，如(ru)curve expert 1.30，根據樣(yang)品O.D.值(zhi)，由(you)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)查(zha)出(chu)相應(ying)的(de)濃(nong)度(du)，乘(cheng)以稀釋倍數(shu)；或用(yong)標(biao)準(zhun)物(wu)的濃(nong)度(du)與(yu)O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的(de)回歸方程式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的O.D.值(zhi)代(dai)入(ru)方程式(shi)，計(ji)算(suan)出(chu)樣品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘(cheng)以稀釋倍數(shu)，即(ji)為樣品(pin)的實(shi)際濃(nong)度(du)。

 特異性(xing)

本試劑盒用於(yu)檢測犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)，經(jing)檢測與其它相(xiang)似物(wu)質無(wu)明顯(xian)交叉(cha)反(fan)應(ying)。

由(you)於(yu)受到技(ji)術及(ji)樣本來源的限(xian)制，不(bu)可能完成對所有(you)相關或相(xiang)似(si)物(wu)質交叉(cha)反(fan)應(ying)檢(jian)測，因此(ci)本試劑盒有(you)可能與未經(jing)檢測的其它物(wu)質有(you)交叉(cha)反(fan)應(ying)。

 精密度(du)

精(jing)密度(du)用(yong)樣品(pin)測定(ding)值(zhi)的(de)變(bian)異(yi)系(xi)數(shu)CV表示(shi)。CV(%) = SD/mean×100

批(pi)內差：取(qu)同批(pi)次試劑盒對低(di)、中、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣(yang)本(ben)進(jin)行定(ding)量(liang)檢(jian)測,每份(fen)樣本(ben)連續(xu)測定(ding)20 次(ci)，分(fen)別(bie)計算(suan)不同濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批(pi)間(jian)差：選取(qu)3個(ge)不(bu)同(tong)批(pi)次的試劑盒分別(bie)對低(di)、中、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣(yang)本(ben)進(jin)行定(ding)量(liang)測定(ding)，每(mei)個(ge)樣(yang)本(ben)使(shi)用同(tong)壹(yi)試劑盒重復(fu)測定(ding)8次(ci)，分(fen)別(bie)計算(suan)不同濃(nong)度(du)樣(yang)本的(de)平(ping)均值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批(pi)內(nei)差： CV<10%

批(pi)間差： CV<12%

犬Ⅰ型(xing)膠(jiao)原α2(COL1α2)ELISA試劑盒穩(wen)定(ding)性(xing)

經(jing)測定(ding)，試劑盒在(zai)有(you)效期內(nei)按(an)推(tui)薦(jian)溫(wen)度保(bao)存(cun)，其活性(xing)降(jiang)低率(lv)小於(yu)5%。

為減(jian)小外(wai)部(bu)因素(su)對試劑盒破壞(huai)前後(hou)檢測值(zhi)的(de)影(ying)響，實(shi)驗(yan)室的環境(jing)條件需盡(jin)量(liang)保(bao)持壹(yi)致，尤(you)其是實(shi)驗(yan)室內溫(wen)度、濕(shi)度及(ji)溫(wen)育條件。其次由(you)同壹(yi)實(shi)驗(yan)員(yuan)來進(jin)行操(cao)作可減(jian)少(shao)人為誤(wu)差。