產(chan)品名(ming)稱(cheng)：兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒

                                                       96T       僅(jin)供體外研究使(shi)用(yong)，不用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)!

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒

本(ben)試劑盒運用(yong)雙抗體夾心ELISA法(fa)定(ding)量測(ce)定(ding)兔(tu)血清(qing)、血(xue)漿、組(zu)織勻(yun)漿、細(xi)胞裂解(jie)液(ye)、細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)液(ye)和(he)其(qi)他(ta)生物液(ye)體中(zhong)兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)含(han)量(liang)。

 檢(jian)測(ce)範圍(wei)

15.625-1000pg/mL

 *低(di)檢測(ce)限(xian)

6.1pg/mL

 實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)

將(jiang)兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)抗(kang)體包(bao)被於(yu)96孔微孔板(ban)中(zhong)，制成(cheng)固(gu)相(xiang)載(zai)體，向(xiang)微孔中分(fen)別加(jia)入標(biao)準品(pin)或(huo)標(biao)本(ben)，其(qi)中的兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)與(yu)連(lian)接(jie)於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體上(shang)的抗體結(jie)合(he)，然(ran)後(hou)加(jia)入生(sheng)物素化(hua)的兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)抗(kang)體，將(jiang)未結(jie)合(he)的生物素化(hua)抗(kang)體洗凈後(hou)，加(jia)入HRP標(biao)記(ji)的親和(he)素，再次(ci)徹底洗滌後(hou)加(jia)入TMB底物顯(xian)色。TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色，並(bing)在(zai)酸的作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終(zhong)的黃色。顏(yan)色的深(shen)淺和(he)樣(yang)品中(zhong)的兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波長下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(O.D.值(zhi))，計算樣(yang)品(pin)濃度(du)。

 試(shi)劑盒內(nei)容

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒需(xu)自備(bei)的設(she)備(bei)及(ji)試劑

1.         450±10nm濾(lv)光(guang)片的酶(mei)標(biao)儀(建議(yi)儀器使(shi)用(yong)前提前預熱)

2.         單道(dao)或(huo)多(duo)道微量加液(ye)器及(ji)吸(xi)頭(tou)

3.         稀釋樣(yang)品(pin)的EP管

4.         蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去離子水(shui)

5.         吸(xi)水紙(zhi)

6.         盛放洗液(ye)的容器

 試(shi)劑盒的儲(chu)存及(ji)有效(xiao)期

1.         未(wei)開封(feng)的試劑盒：所(suo)有試劑均按(an)試劑瓶標(biao)簽(qian)上(shang)所(suo)示保(bao)存(cun)。請註意，收到(dao)試(shi)劑盒後(hou)請盡(jin)快將(jiang)TMB 洗滌液(ye)，終(zhong)止(zhi)液(ye)保(bao)存(cun)於(yu)4℃，其他(ta)試劑保存於(yu)-20℃。

2.         使(shi)用(yong)後(hou)的試劑盒：剩余試劑仍需按(an)照(zhao)試(shi)劑瓶標(biao)簽(qian)所(suo)示的溫度(du)保存(cun)，開封(feng)後(hou)的酶(mei)標(biao)板(ban)要(yao)加(jia)幹燥劑後(hou)密(mi)封(feng)保(bao)存於(yu)-20℃，避免(mian)潮濕(shi)。

註意：

試(shi)劑盒內(nei)酶(mei)標(biao)條(tiao)可拆卸(xie)，按(an)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)可分(fen)多(duo)次使(shi)用(yong)；使(shi)用(yong)後(hou)的剩余試劑盒建議(yi)在(zai)**實(shi)驗(yan)後(hou) 1個(ge)月(yue)內(nei)使用(yong)完(wan)畢。產(chan)品過(guo)期時間以盒子(zi)上(shang)的標(biao)簽(qian)為準，保(bao)質(zhi)期內(nei)所有組(zu)分(fen)都確(que)保是(shi)穩(wen)定(ding)的。

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒標(biao)本(ben)的采集與(yu)保(bao)存

1.         血(xue)清(qing)：

將(jiang)收集於(yu)血清(qing)分(fen)離管的全血(xue)標(biao)本(ben)在(zai)室溫(wen)放置 2 小(xiao)時或(huo) 4^oC 過(guo)夜，然(ran)後(hou) 1000×g 離心 20 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

2.         血(xue)漿：

用(yong) EDTA 或(huo)肝素作為抗(kang)凝(ning)劑采集標(biao)本(ben)，並(bing)將(jiang)標(biao)本(ben)在(zai)采集後(hou)的 30 分(fen)鐘內(nei)於(yu) 2-8^oC 1000×g 離心 15 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

3. 組(zu)織勻(yun)漿：

1） 取(qu)適量組(zu)織塊(kuai)，於(yu)預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清(qing)洗去除(chu)血液(ye)，稱(cheng)重後(hou)備(bei)用(yong)（組(zu)織塊(kuai)較大需先(xian)剪碎(sui)後(hou)再(zai)勻(yun)漿）；

2） 可同(tong)時(shi)選(xuan)用(yong)多(duo)種勻(yun)漿方(fang)法(fa)達到(dao)較好的破碎(sui)效果(guo)：首(shou)先將(jiang)組(zu)織塊(kuai)移入玻(bo)璃勻漿器，加(jia)入5-10mL 預冷PBS 進(jin)行(xing)充分(fen)研磨(mo)，該(gai)過(guo)程需在(zai)冰(bing)上(shang)進(jin)行(xing)（有(you)條(tiao)件實(shi)驗(yan)室(shi)可選(xuan)用(yong)機(ji)器勻(yun)漿）；得到(dao)的勻漿液(ye)可再利(li)用(yong)超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)或(huo)反(fan)復(fu)凍(dong)融 進(jin)壹(yi)步處理(li)（超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)過(guo)程中註意冰(bing)浴降(jiang)溫(wen)；反(fan)復(fu)凍(dong)融法(fa)可重復(fu)2 次(ci)）。

3） 將(jiang)制備(bei)好(hao)的勻漿液(ye)於(yu)5000×g 離心5 分(fen)鐘，留(liu)取上(shang)清(qing)即(ji)可檢測(ce)。

4. 細(xi)胞裂解(jie)液(ye)：

1）貼(tie)壁(bi)細(xi)胞需要先用(yong)胰(yi)酶(mei)消(xiao)化(hua)，離心收集細(xi)胞（懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞可直接(jie)離心收集）；

2）將(jiang)收集到(dao)的細(xi)胞用(yong)冷(leng)PBS 洗3 次；

3）物理(li)方法(fa)裂解(jie)細(xi)胞（可先超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)細(xi)胞，再反(fan)復(fu)凍(dong)融）：

i 超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)：取(qu)適量PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，用(yong)壹(yi)定(ding)功率(lv)的超(chao)聲(sheng)波處理(li)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，使(shi)細(xi)胞急劇震(zhen)蕩(dang)破裂。

ii 反(fan)復(fu)凍(dong)融：將(jiang)待破(po)碎的細(xi)胞在(zai)-20 ^oC 以(yi)下(xia)冰(bing)凍(dong)，室溫(wen)融(rong)解(jie)，反(fan)復(fu)3 次(ci)，使細(xi)胞溶(rong)脹(zhang)破(po)碎(sui)。

4）將(jiang)標(biao)本(ben)於(yu)2-8 ^oC 1500×g 離心10 分(fen)鐘，收集上(shang)清(qing)備(bei)用(yong)。

5. 細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)或(huo)其(qi)它生物標(biao)本(ben)：

請 1000×g 離心 20 分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置(zhi)於(yu)-20^oC 或(huo)-80^oC 保(bao)存，但應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融。

註意：

1.         以(yi)上(shang)標(biao)本(ben)均(jun)需密封(feng)保存，4^oC保(bao)存應(ying)小(xiao)於(yu)1周，-20^oC不應(ying)超(chao)過(guo)1個(ge)月(yue)，-80^oC不應(ying)超(chao)過(guo)2個(ge)月(yue)。

2.         標(biao)本(ben)使(shi)用(yong)前應(ying)緩慢(man)均衡至室(shi)溫，不應(ying)加熱(re)使之融解。

3.         實(shi)驗(yan)前紅細(xi)胞裂解(jie)液(ye)必(bi)須(xu)用(yong)標(biao)準品(pin)稀釋液(ye)稀釋。

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒試(shi)劑準備(bei)

1.         使(shi)用(yong)前將(jiang)所有(you)的試劑和標(biao)本(ben)緩(huan)慢均衡至室(shi)溫(18-25oC)，試(shi)劑不能(neng)直接(jie)在(zai)37oC溶(rong)解(jie)。

2.         標(biao)準品(pin)(凍(dong)幹品)：每瓶標(biao)準品(pin)加(jia)入標(biao)準品(pin)稀釋液(ye)1mL，蓋(gai)好(hao)後(hou)室(shi)溫(wen)靜(jing)置(zhi)大約(yue)10分(fen)鐘，同(tong)時(shi)反(fan)復(fu)顛(dian)倒/搓動(dong)以助(zhu)溶(rong)解(jie)，其(qi)濃度(du)為1000pg/mL。準備(bei)7個(ge)稀釋標(biao)準品(pin)的EP管，每(mei)個(ge)EP管中加(jia)入150μL的標(biao)準品(pin)稀釋液(ye)，如(ru)圖(tu)所(suo)示(shi)依次倍(bei)比(bi)稀釋成(cheng)不同(tong)的梯度， 標(biao)準品(pin)稀釋液(ye)(0pg/mL)直(zhi)接(jie)作為空(kong)白孔(kong)。為保(bao)證(zheng)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效(xiao)性(xing)，每次實(shi)驗(yan)請使(shi)用(yong)新(xin)的標(biao)準品(pin)溶(rong)液(ye)。

3.         濃洗滌液(ye)：用(yong)580mL蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)去離子水(shui)將(jiang)20mL濃洗滌液(ye)稀釋至(zhi)600mL，進(jin)行(xing)30倍(bei)稀釋。

標(biao)本(ben)處理(li)

1.         本(ben)公司(si)只(zhi)對(dui)試劑盒本(ben)身負責，不對(dui)因(yin)使用(yong)該(gai)試(shi)劑盒所(suo)造成(cheng)的樣本(ben)消(xiao)耗(hao)負責，請使(shi)用(yong)者(zhe)使(shi)用(yong)前充分(fen)考慮(lv)到(dao)樣(yang)本的可能(neng)使用(yong)量(liang)，預留(liu)充足(zu)的樣本(ben)。

2.         實(shi)驗(yan)前應(ying)預測(ce)標(biao)本(ben)含(han)量，如(ru)果(guo)標(biao)本(ben)濃度(du)過高(gao)，應(ying)對(dui)標(biao)本(ben)進(jin)行(xing)稀釋，使(shi)稀釋後(hou)的標(biao)本(ben)符(fu)合試劑盒的檢測(ce)範圍(wei)，計算(suan)時再(zai)乘以(yi)相(xiang)應(ying)的稀釋倍(bei)數(shu)。

3.         若(ruo)所檢(jian)樣本不包含(han)在(zai)說明書所(suo)列樣(yang)本(ben)之中(zhong)，建議(yi)進(jin)行(xing)預實(shi)驗(yan)驗(yan)證(zheng)其(qi)有(you)效(xiao)性(xing)，並註意留(liu)存樣(yang)本(ben)。

4.         使(shi)用(yong)化(hua)學裂解(jie)液(ye)制備(bei)的組(zu)織勻(yun)漿或(huo)細(xi)胞提取液(ye)可能(neng)會由於(yu)某些(xie)化(hua)學物質的引(yin)入導致(zhi)  ELISA實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。

5.         若(ruo)樣本(ben)為細(xi)胞培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，因(yin)該(gai)類(lei)樣(yang)本(ben)幹擾(rao)因(yin)素 較多(duo)，如(ru)：細(xi)胞狀態、細(xi)胞數量、采樣時(shi)間(jian)等(deng)，所以可能(neng)存在(zai)檢測(ce)不出的情(qing)況(kuang)。

6.         某(mou)些(xie)天(tian)然(ran)蛋白或(huo)重組(zu)蛋白，包(bao)括原核(he)及(ji)真核(he)重組(zu)蛋白，可能(neng)因(yin)為與(yu)本(ben)產(chan)品所(suo)使用(yong)的檢測(ce)抗(kang)體及(ji)捕獲(huo)抗(kang)體不匹(pi)配，而(er)不被檢測(ce)出(chu)。

7.         建議(yi)使(shi)用(yong)新(xin)鮮(xian)樣本(ben)，保存(cun)時間過長(chang)可能(neng)會存(cun)在(zai)蛋白降(jiang)解(jie)或(huo)變(bian)性(xing)導致(zhi)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒操(cao)作步驟

1.         加(jia)樣：分(fen)別設(she)空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品及(ji)酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余各步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標(biao)準孔(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)品孔。在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)標(biao)準品(pin)準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品孔中先加(jia)樣品(pin)稀釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品10μl（樣品*終(zhong)稀釋度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡量不觸及(ji)孔壁(bi)，輕輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。

2.         溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘。  

3.         配(pei)液(ye)：將(jiang)20倍濃縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾水20倍(bei)稀釋後(hou)備(bei)用(yong)

4.         洗滌：小(xiao)心揭掉(diao)封板(ban)膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)幹，每孔加滿(man)洗滌液(ye)，靜(jing)置(zhi)30秒後(hou)棄(qi)去，如(ru)此(ci)重復(fu)5次(ci)，拍幹。

5.         加(jia)酶(mei)：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外。

6.         溫(wen)育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

7.         洗滌：操(cao)作同(tong)5。

8.         顯(xian)色：每(mei)孔先加入顯(xian)色劑A50μl，再加入顯(xian)色劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯(xian)色15分(fen)鐘.

9.         終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此(ci)時藍(lan)色(se)立轉(zhuan)黃色）。

10.     測(ce)定(ding)：以空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依序(xu)測(ce)量(liang)各孔的吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在(zai)加終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)15分(fen)鐘以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

註意：

1.         試(shi)劑準備(bei)：準備(bei)壹(yi)次實(shi)驗(yan)所(suo)需(xu)要(yao)的酶(mei)標(biao)條(tiao)，其它的可從微孔板(ban)上(shang)拆(chai)下(xia)，密封(feng)，按(an)照(zhao)說明書要(yao)求保(bao)存(cun)，以(yi)備(bei)下(xia)次使(shi)用(yong)。

2.         加(jia)樣：實(shi)驗(yan)操(cao)作中(zhong)請使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭(tou)，避免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)。加樣(yang)時註意不要有(you)氣泡(pao)，將(jiang)樣品(pin)加於(yu)酶(mei)標(biao)板(ban)底部(bu)，盡量不觸及(ji)孔壁(bi)，輕輕(qing)晃動(dong)混(hun)勻(yun)。加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試劑時，**個(ge)孔與*後(hou)壹(yi)個(ge)孔加樣(yang)之間的時間(jian)間隔如(ru)果(guo)太(tai)大，將(jiang)會導致(zhi)不同(tong)的“預溫育(yu)”時間，從(cong)而明顯(xian)地影(ying)響到(dao)測(ce)量(liang)值(zhi)的準確(que)性(xing)及(ji)重復(fu)性(xing)。因(yin)此(ci)，壹次(ci)加(jia)樣(yang)時間(jian)(包(bao)括標(biao)準品(pin)及(ji)所有(you)樣品)*好控制在(zai)10分(fen)鐘內(nei)。推(tui)薦(jian)設(she)置(zhi)復(fu)孔(kong)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。

3.          溫(wen)育(yu)：為防(fang)止(zhi)樣(yang)品(pin)蒸發，實(shi)驗(yan)時(shi)請將(jiang)加上(shang)蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜的酶(mei)標(biao)板(ban)置(zhi)於(yu)濕盒內(nei)，以避免液(ye)體蒸(zheng)發，洗板(ban)後(hou)應(ying)盡快進(jin)行(xing)下(xia)步操(cao)作，任(ren)何時侯(hou)都應(ying)避免(mian)酶(mei)標(biao)板(ban)處於(yu)幹燥狀態，同(tong)時(shi)應(ying)嚴格(ge)遵守(shou)給(gei)定(ding)的溫育(yu)時間和(he)溫度。

4.         洗滌：充分(fen)的洗滌非常(chang)重要，在(zai)每次(ci)洗滌過程中，都(dou)要(yao)將(jiang)洗滌液(ye)完(wan)全(quan)甩幹。洗滌過程中反(fan)應(ying)孔中(zhong)殘留(liu)的洗滌液(ye)應(ying)在(zai)濾紙(zhi)上(shang)拍幹，勿將(jiang)濾紙(zhi)直接(jie)放入反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸(xi)水，同(tong)時(shi)要(yao)消(xiao)除(chu)板(ban)底殘(can)留(liu)的液(ye)體和(he)手(shou)指(zhi)印，避免(mian)影(ying)響*後(hou)的酶(mei)標(biao)儀讀(du)數(shu)。如(ru)果(guo)有(you)自動(dong)洗板(ban)機(ji)，應(ying)在(zai)熟練使(shi)用(yong)後(hou)再(zai)用(yong)到(dao)正(zheng)式實(shi) 驗(yan)過(guo)程中。

5.         反(fan)應(ying)時間(jian)的控制：加(jia)入底物後(hou)請定(ding)時觀(guan)察(cha)反(fan)應(ying)孔的顏(yan)色變(bian)化(hua)(比(bi)如(ru)，每(mei)隔10分(fen)鐘觀(guan)察壹(yi)次)，如(ru)顏(yan)色較深(shen)，請提(ti)前加入終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，避免(mian)反(fan)應(ying)過強(qiang)從而影響酶(mei)標(biao)儀光(guang)密度(du)讀(du)數(shu)。

6.         底物：底物請避(bi)光(guang)保存(cun)，在(zai)儲(chu)存和溫(wen)育(yu)時避免(mian)強光(guang)直接(jie)照(zhao)射(she)。

7.         如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)室(shi)內(nei)濕度低於(yu)60%，推(tui)薦(jian)使用(yong)加(jia)濕器提(ti)高(gao)濕(shi)度(du)水平。

 實(shi)驗(yan)流(liu)程

1.         實(shi)驗(yan)前標(biao)準品(pin)、試(shi)劑及(ji)樣本(ben)的準備(bei)；

2.         加(jia)樣（標(biao)準品(pin)及(ji)樣本(ben)）50μL，37℃孵(fu)育(yu)30分(fen)鐘；

3.         洗板(ban)5次(ci)，加(jia)酶(mei)標(biao)試(shi)劑50ul，37℃孵(fu)育(yu)半(ban)小(xiao)時；

4.         洗板(ban)5次(ci)；加(jia)入顯(xian)色液(ye)A，B各50ul,37℃孵(fu)育(yu)顯(xian)色15分(fen)鐘

5.         加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，立即450nm讀數(shu)。

6.    計(ji)算

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒計(ji)算

各標(biao)準品(pin)及(ji)樣本(ben)O.D.值(zhi)扣除(chu)空(kong)白孔(kong)O.D.值(zhi)後(hou)作圖(tu)(七(qi)點(dian)圖(tu))，如(ru)設(she)置(zhi)復(fu)孔(kong)，則應(ying)取其(qi)平均值(zhi)計算。以(yi)標(biao)準品(pin)的濃度(du)為縱坐標(biao)(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao))，O.D.值(zhi)為橫坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數坐(zuo)標(biao)），繪出(chu)標(biao)準曲線(*佳(jia)方程式應(ying)依回歸方程計算(suan)的R2值(zhi)來定(ding)，以R2值(zhi)越趨近於(yu)1為好(hao))。推(tui)薦(jian)使用(yong)專(zhuan)業(ye)制作曲線軟件進(jin)行(xing)分(fen)析，如(ru)curve expert 1.30，根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)O.D.值(zhi)，由標(biao)準曲線查出相(xiang)應(ying)的濃度(du)，乘以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)；或(huo)用(yong)標(biao)準物的濃度(du)與O.D.值(zhi)計算出(chu)標(biao)準曲線的回歸方程式，將(jiang)樣品(pin)的O.D.值(zhi)代入方(fang)程式，計(ji)算(suan)出樣(yang)品濃度(du)，再乘(cheng)以稀釋倍(bei)數(shu)，即為樣(yang)品(pin)的實(shi)際(ji)濃度(du)。

 特(te)異性(xing)

本(ben)試劑盒用(yong)於(yu)檢測(ce)兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)，經檢測(ce)與(yu)其它相(xiang)似(si)物質無(wu)明顯(xian)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

由於(yu)受到(dao)技(ji)術及(ji)樣本(ben)來源(yuan)的限(xian)制，不可能(neng)完成(cheng)對(dui)所有(you)相(xiang)關(guan)或(huo)相(xiang)似(si)物質交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)檢測(ce)，因(yin)此(ci)本試(shi)劑盒有(you)可能(neng)與未(wei)經檢測(ce)的其它(ta)物質有(you)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

 精密度

精密度用(yong)樣(yang)品測(ce)定(ding)值(zhi)的變(bian)異系數(shu)CV表(biao)示(shi)。CV(%) = SD/mean×100

批(pi)內(nei)差：取同(tong)批(pi)次試(shi)劑盒對(dui)低、中(zhong)、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本進(jin)行(xing)定(ding)量檢(jian)測(ce),每(mei)份(fen)樣本連(lian)續測(ce)定(ding)20 次，分(fen)別計(ji)算不同(tong)濃度(du)樣本(ben)的平均(jun)值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批(pi)間差(cha)：選(xuan)取3個(ge)不同(tong)批(pi)次的試劑盒分(fen)別對(dui)低、中(zhong)、高值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本進(jin)行(xing)定(ding)量測(ce)定(ding)，每個(ge)樣本使(shi)用(yong)同(tong)壹(yi)試(shi)劑盒重復(fu)測(ce)定(ding)8次，分(fen)別計(ji)算不同(tong)濃度(du)樣本(ben)的平均(jun)值(zhi)及(ji)SD值(zhi)。

批(pi)內(nei)差： CV<10%

批(pi)間差(cha)： CV<12%

兔(tu)肝細(xi)胞生長因(yin)子(HGF)ELISA試(shi)劑盒穩(wen)定(ding)性(xing)

經測(ce)定(ding)，試劑盒在(zai)有效(xiao)期內(nei)按(an)推(tui)薦(jian)溫度保存，其活性(xing)降(jiang)低(di)率(lv)小(xiao)於(yu)5%。

為減(jian)小(xiao)外部(bu)因(yin)素對(dui)試劑盒破(po)壞前後(hou)檢(jian)測(ce)值(zhi)的影響(xiang)，實(shi)驗(yan)室(shi)的環境(jing)條(tiao)件需(xu)盡量保持壹(yi)致(zhi)，尤其是(shi)實(shi)驗(yan)室(shi)內(nei)溫度、濕度(du)及(ji)溫育(yu)條(tiao)件。其(qi)次由同(tong)壹(yi)實(shi)驗(yan)員(yuan)來進(jin)行(xing)操(cao)作可減(jian)少人(ren)為誤差。