產品名稱(cheng)：兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

                                                       96T       僅供(gong)體外(wai)研究(jiu)使用(yong)，不用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)!

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

本試(shi)劑(ji)盒(he)運(yun)用(yong)雙抗體夾(jia)心ELISA法(fa)定(ding)量(liang)測定(ding)兔血(xue)清(qing)、血漿、組織(zhi)勻漿、細胞裂解液、細胞培(pei)養(yang)上(shang)清液(ye)和(he)其(qi)他(ta)生物液(ye)體中兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)含量。

 檢測範圍

46.875-3000pg/mL

 *低檢(jian)測限

18.54pg/mL

 實驗原(yuan)理(li)

將兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)抗體包被於(yu)96孔微(wei)孔板(ban)中，制(zhi)成(cheng)固相(xiang)載(zai)體，向(xiang)微孔中分(fen)別(bie)加入標準品或標本(ben)，其(qi)中的兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)與連接(jie)於(yu)固相(xiang)載(zai)體上(shang)的抗體結(jie)合(he)，然(ran)後加入生物素(su)化的兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)抗體，將未(wei)結(jie)合(he)的生物素(su)化抗體洗凈後，加入HRP標記(ji)的親和(he)素(su)，再次徹底(di)洗(xi)滌後加入TMB底(di)物顯色。TMB在(zai)過氧化物酶(mei)的催化下轉(zhuan)化成藍色，並在(zai)酸(suan)的作用下轉(zhuan)化成*終(zhong)的黃色(se)。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣品中的兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下測定(ding)吸光(guang)度(du)(O.D.值(zhi))，計算樣品濃(nong)度(du)。

 試(shi)劑(ji)盒(he)內容

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)需自備的設(she)備及試(shi)劑(ji)

1.         450±10nm濾(lv)光片(pian)的酶(mei)標儀(建議儀器(qi)使用(yong)前提(ti)前預熱(re))

2.         單道(dao)或多道(dao)微量加液(ye)器(qi)及吸頭(tou)

3.         稀(xi)釋樣品的EP管(guan)

4.         蒸(zheng)餾水(shui)或去(qu)離子(zi)水(shui)

5.         吸水(shui)紙

6.         盛(sheng)放洗液的容器(qi)

 試(shi)劑(ji)盒(he)的儲存及有(you)效期

1.         未(wei)開(kai)封的試(shi)劑(ji)盒(he)：所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)均(jun)按試(shi)劑(ji)瓶(ping)標簽(qian)上(shang)所(suo)示(shi)保存。請(qing)註意，收到試(shi)劑(ji)盒(he)後請(qing)盡快將TMB 洗滌液，終止液保存於(yu)4℃，其(qi)他(ta)試(shi)劑(ji)保存於(yu)-20℃。

2.         使用(yong)後的試(shi)劑(ji)盒(he)：剩余試(shi)劑(ji)仍(reng)需按照(zhao)試(shi)劑(ji)瓶(ping)標簽(qian)所(suo)示(shi)的溫度(du)保存，開(kai)封後的酶(mei)標板(ban)要加幹(gan)燥(zao)劑(ji)後密(mi)封保存於(yu)-20℃，避免潮濕。

註意：

試(shi)劑(ji)盒(he)內酶(mei)標條(tiao)可拆卸，按實(shi)驗需求可分多次使用(yong)；使用(yong)後的剩余試(shi)劑(ji)盒(he)建議在(zai)**實(shi)驗後 1個(ge)月內使用(yong)完畢。產品過期時間(jian)以盒(he)子(zi)上(shang)的標簽(qian)為準，保質期(qi)內所(suo)有(you)組(zu)分(fen)都確保是穩(wen)定(ding)的。

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)標本(ben)的采集(ji)與保存

1.         血清(qing)：

將收集於(yu)血(xue)清分離管(guan)的全血(xue)標本(ben)在(zai)室(shi)溫放置(zhi) 2 小時或 4^oC 過夜，然後 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清即可，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融。

2.         血漿：

用 EDTA 或肝(gan)素作為抗凝(ning)劑(ji)采(cai)集標本(ben)，並將(jiang)標本(ben)在(zai)采(cai)集後的 30 分鐘(zhong)內於(yu) 2-8^oC 1000×g 離心 15 分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清即可檢測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融。

3. 組織(zhi)勻漿：

1） 取適(shi)量組(zu)織(zhi)塊(kuai)，於(yu)預冷(leng)PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清(qing)洗(xi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)，稱(cheng)重後備用（組(zu)織(zhi)塊(kuai)較大(da)需先(xian)剪碎(sui)後再(zai)勻漿）；

2） 可同(tong)時選用(yong)多種(zhong)勻漿方(fang)法(fa)達(da)到較好(hao)的破碎(sui)效果：首(shou)先(xian)將組(zu)織(zhi)塊(kuai)移(yi)入玻璃(li)勻漿器(qi)，加入5-10mL 預冷(leng)PBS 進行充分(fen)研磨(mo)，該過程需在(zai)冰(bing)上(shang)進行（有(you)條(tiao)件實(shi)驗室(shi)可選用(yong)機(ji)器(qi)勻漿）；得到的勻漿液可再利(li)用超(chao)聲(sheng)破碎或反(fan)復凍融 進(jin)壹步處理(li)（超(chao)聲(sheng)破碎過程中註意冰(bing)浴(yu)降溫；反復(fu)凍融法(fa)可重復2 次）。

3） 將制(zhi)備好的勻漿液於(yu)5000×g 離心5 分(fen)鐘(zhong)，留取上(shang)清即可檢測。

4. 細胞(bao)裂解液：

1）貼壁細(xi)胞(bao)需要先(xian)用胰(yi)酶(mei)消化，離心收集細(xi)胞(bao)（懸浮細胞(bao)可直接(jie)離心收集）；

2）將收集到的細胞(bao)用(yong)冷(leng)PBS 洗3 次；

3）物理(li)方(fang)法(fa)裂(lie)解細胞（可先(xian)超聲(sheng)破碎細(xi)胞，再(zai)反(fan)復凍融）：

i 超聲(sheng)破碎：取適(shi)量PBS 重懸細胞(bao)，用壹(yi)定(ding)功率(lv)的超聲(sheng)波(bo)處理(li)細(xi)胞懸液，使細(xi)胞急劇震蕩破裂。

ii 反復(fu)凍融：將(jiang)待破(po)碎(sui)的細胞(bao)在(zai)-20 ^oC 以下(xia)冰(bing)凍，室溫(wen)融解，反復3 次，使細(xi)胞溶脹(zhang)破碎(sui)。

4）將標本(ben)於(yu)2-8 ^oC 1500×g 離心10 分(fen)鐘(zhong)，收集上(shang)清備用。

5. 細胞(bao)培(pei)養(yang)上(shang)清或其(qi)它(ta)生(sheng)物標本(ben)：

請 1000×g 離心 20 分(fen)鐘(zhong)，取上(shang)清即可檢測，或將(jiang)上(shang)清置(zhi)於(yu)-20^oC 或-80^oC 保存，但(dan)應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融。

註意：

1.         以上(shang)標本(ben)均需密(mi)封保存，4^oC保存應(ying)小於(yu)1周(zhou)，-20^oC不應(ying)超過1個月(yue)，-80^oC不應(ying)超過2個月(yue)。

2.         標本(ben)使用(yong)前應(ying)緩(huan)慢均(jun)衡(heng)至室(shi)溫(wen)，不(bu)應(ying)加熱(re)使之融解。

3.         實驗前紅(hong)細(xi)胞裂(lie)解液必須用(yong)標準品稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋。

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)試(shi)劑(ji)準備

1.         使用(yong)前將(jiang)所(suo)有(you)的試(shi)劑(ji)和(he)標本(ben)緩(huan)慢均(jun)衡(heng)至室(shi)溫(wen)(18-25oC)，試(shi)劑(ji)不(bu)能直(zhi)接(jie)在(zai)37oC溶解。

2.         標準品(凍幹品)：每(mei)瓶(ping)標準品加入標準品稀(xi)釋液(ye)1mL，蓋好後室(shi)溫靜置(zhi)大約10分鐘(zhong)，同(tong)時反復顛倒(dao)/搓(cuo)動以(yi)助溶解，其(qi)濃(nong)度(du)為3000pg/mL。準備7個稀(xi)釋標準品的EP管(guan)，每(mei)個(ge)EP管(guan)中加入150μL的標準品稀(xi)釋液(ye)，如圖所(suo)示(shi)依次倍比(bi)稀(xi)釋成(cheng)不同(tong)的梯度(du)， 標準品稀(xi)釋液(ye)(0pg/mL)直接(jie)作為空白(bai)孔。為(wei)保證實(shi)驗結(jie)果(guo)有(you)效性(xing)，每(mei)次實驗請(qing)使用(yong)新(xin)的標準品溶液(ye)。

3.         濃(nong)洗(xi)滌液：用580mL蒸(zheng)餾水(shui)或去(qu)離子(zi)水(shui)將20mL濃(nong)洗(xi)滌液稀(xi)釋至(zhi)600mL，進行30倍稀(xi)釋。

標本(ben)處理(li)

1.         本公(gong)司(si)只(zhi)對(dui)試(shi)劑(ji)盒(he)本身(shen)負(fu)責，不對(dui)因(yin)使用(yong)該試(shi)劑(ji)盒(he)所(suo)造(zao)成的樣本(ben)消耗負(fu)責，請使用(yong)者(zhe)使用(yong)前充(chong)分(fen)考慮到樣本(ben)的可能使用(yong)量，預留充足的樣本(ben)。

2.         實驗前應(ying)預測標本(ben)含量，如果(guo)標本(ben)濃(nong)度(du)過高(gao)，應(ying)對標本(ben)進行稀(xi)釋，使稀(xi)釋後的標本(ben)符合(he)試(shi)劑(ji)盒(he)的檢測範圍，計算時再乘以相(xiang)應(ying)的稀(xi)釋倍(bei)數。

3.         若(ruo)所(suo)檢(jian)樣本(ben)不(bu)包含在(zai)說明書所(suo)列(lie)樣本(ben)之中，建(jian)議進(jin)行預實(shi)驗驗證其(qi)有(you)效性(xing)，並註意留存樣本(ben)。

4.         使用(yong)化學(xue)裂解液制備的組織(zhi)勻漿或細(xi)胞提取液(ye)可能會(hui)由於(yu)某些(xie)化學(xue)物質的引入導(dao)致(zhi)  ELISA實(shi)驗結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。

5.         若(ruo)樣本(ben)為(wei)細胞培(pei)養(yang)上(shang)清，因(yin)該類(lei)樣本(ben)幹(gan)擾因(yin)素 較多，如(ru)：細胞狀態、細胞數量(liang)、采(cai)樣時間(jian)等，所(suo)以(yi)可能存(cun)在(zai)檢(jian)測不出的情況。

6.         某些(xie)天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)或重組蛋白(bai)，包(bao)括(kuo)原(yuan)核及真(zhen)核重組蛋白(bai)，可能因(yin)為與本(ben)產(chan)品所(suo)使用(yong)的檢測抗體及捕獲抗(kang)體不匹(pi)配(pei)，而不被檢測出。

7.         建議使用(yong)新(xin)鮮(xian)樣本(ben)，保存時間(jian)過長(chang)可能會(hui)存在(zai)蛋(dan)白(bai)降(jiang)解或變性(xing)導(dao)致(zhi)實(shi)驗結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作步驟(zhou)

1.         加樣：分(fen)別(bie)設(she)空白(bai)孔（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔不(bu)加樣品及酶(mei)標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步操(cao)作相(xiang)同(tong)）、標準孔、待(dai)測樣品孔。在(zai)酶(mei)標包(bao)被板上(shang)標準品準確加樣50μl，待(dai)測樣品孔中先(xian)加樣品稀(xi)釋液(ye)40μl，然後再(zai)加待(dai)測樣品10μl（樣品*終稀(xi)釋度(du)為5倍(bei)）。加樣將(jiang)樣品加於(yu)酶(mei)標板(ban)孔底(di)部，盡量不觸(chu)及孔壁，輕輕晃動混(hun)勻。

2.         溫育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。  

3.         配(pei)液(ye)：將20倍(bei)濃(nong)縮洗滌液用蒸(zheng)餾水(shui)20倍稀(xi)釋後備用

4.         洗滌：小心揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液體，甩幹，每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒(miao)後棄(qi)去(qu)，如此(ci)重復5次，拍幹(gan)。

5.         加酶(mei)：每(mei)孔加入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。

6.         溫育(yu)：操(cao)作同(tong)3。

7.         洗滌：操作同(tong)5。

8.         顯色：每(mei)孔先(xian)加入顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻，37℃避光顯色15分(fen)鐘(zhong).

9.         終止：每(mei)孔加終(zhong)止液50μl，終(zhong)止反應(ying)（此時藍色立轉黃色(se)）。

10.     測定(ding)：以(yi)空白(bai)空調零，450nm波(bo)長(chang)依序(xu)測量各(ge)孔的吸光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在(zai)加終(zhong)止液後15分(fen)鐘(zhong)以(yi)內進行。

註意：

1.         試(shi)劑(ji)準備：準備壹次實驗所(suo)需要的酶(mei)標條(tiao)，其(qi)它(ta)的可從微(wei)孔板(ban)上(shang)拆下，密(mi)封，按照(zhao)說明書要求保存，以(yi)備下次使用(yong)。

2.         加樣：實驗操(cao)作中請(qing)使用(yong)壹次性(xing)的吸頭(tou)，避免交(jiao)叉(cha)汙染。加樣時註意不要有(you)氣(qi)泡，將樣品加於(yu)酶(mei)標板(ban)底(di)部，盡量不觸(chu)及孔壁，輕輕晃動混(hun)勻。加樣或加試(shi)劑(ji)時，**個孔與*後壹(yi)個孔加樣之間(jian)的時間(jian)間(jian)隔(ge)如果(guo)太(tai)大(da)，將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)同(tong)的“預溫(wen)育(yu)”時間(jian)，從而明顯地影(ying)響(xiang)到測量值(zhi)的準確性(xing)及重復性(xing)。因(yin)此，壹次加樣時間(jian)(包括(kuo)標準品及所(suo)有(you)樣品)*好控制在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內。推薦(jian)設(she)置(zhi)復孔進(jin)行實驗。

3.          溫育(yu)：為防(fang)止樣品蒸(zheng)發，實(shi)驗時請將加上(shang)蓋或覆(fu)膜(mo)的酶(mei)標板(ban)置(zhi)於(yu)濕(shi)盒(he)內，以避免液(ye)體蒸(zheng)發，洗(xi)板後應(ying)盡快進行下步操(cao)作，任何時侯(hou)都應(ying)避免酶(mei)標板(ban)處於(yu)幹(gan)燥狀態，同(tong)時應(ying)嚴格(ge)遵(zun)守給(gei)定(ding)的溫育(yu)時間(jian)和溫(wen)度(du)。

4.         洗滌：充分(fen)的洗滌非(fei)常重要，在(zai)每(mei)次洗滌過程中，都要將洗(xi)滌液完全甩幹。洗(xi)滌過程中反(fan)應(ying)孔中殘(can)留的洗滌液應(ying)在(zai)濾(lv)紙上(shang)拍幹(gan)，勿將濾(lv)紙直(zhi)接(jie)放入反應(ying)孔中吸水(shui)，同(tong)時要消除(chu)板(ban)底(di)殘(can)留的液體和手(shou)指印(yin)，避免影(ying)響(xiang)*後的酶(mei)標儀讀數。如(ru)果(guo)有(you)自(zi)動洗(xi)板(ban)機(ji)，應(ying)在(zai)熟(shu)練(lian)使用(yong)後再(zai)用到正式(shi)實 驗過程中。

5.         反應(ying)時間(jian)的控制(zhi)：加入底(di)物後請(qing)定(ding)時觀察反應(ying)孔的顏(yan)色(se)變化(比(bi)如，每(mei)隔(ge)10分鐘(zhong)觀(guan)察壹次)，如顏(yan)色(se)較深，請提(ti)前加入終止液終(zhong)止反應(ying)，避免反(fan)應(ying)過強從(cong)而影響酶(mei)標儀光密(mi)度(du)讀數。

6.         底(di)物：底(di)物請(qing)避光保存，在(zai)儲存和(he)溫(wen)育(yu)時避免強(qiang)光(guang)直接(jie)照(zhao)射(she)。

7.         如果(guo)實驗室(shi)內濕度(du)低於(yu)60%，推(tui)薦使用(yong)加濕(shi)器(qi)提高(gao)濕(shi)度(du)水(shui)平(ping)。

 實驗流(liu)程(cheng)

1.         實驗前標準品、試(shi)劑(ji)及樣本(ben)的準備；

2.         加樣（標準品及樣本(ben)）50μL，37℃孵育(yu)30分(fen)鐘(zhong)；

3.         洗板(ban)5次，加酶(mei)標試(shi)劑(ji)50ul，37℃孵育(yu)半(ban)小時；

4.         洗板(ban)5次；加入顯色液(ye)A，B各(ge)50ul,37℃孵育(yu)顯色15分(fen)鐘(zhong)

5.         加終(zhong)止液50μL，立即450nm讀數。

6.    計算

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)計算

各標準品及樣本(ben)O.D.值(zhi)扣除(chu)空白(bai)孔O.D.值(zhi)後作圖(七點圖)，如設(she)置(zhi)復孔，則(ze)應(ying)取其(qi)平(ping)均(jun)值(zhi)計算。以(yi)標準品的濃(nong)度(du)為縱(zong)坐(zuo)標(或對(dui)數坐(zuo)標)，O.D.值(zhi)為橫(heng)坐標(或對(dui)數坐(zuo)標），繪(hui)出標準曲線(xian)(*佳方(fang)程(cheng)式(shi)應(ying)依回(hui)歸方(fang)程(cheng)計(ji)算的R2值(zhi)來定(ding)，以(yi)R2值(zhi)越趨(qu)近於(yu)1為(wei)好)。推薦使用(yong)專(zhuan)業制作曲線(xian)軟件進(jin)行分析(xi)，如curve expert 1.30，根(gen)據(ju)樣品O.D.值(zhi)，由標準曲線(xian)查出相(xiang)應(ying)的濃(nong)度(du)，乘以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數；或用(yong)標準物的濃(nong)度(du)與O.D.值(zhi)計算出標準曲線(xian)的回歸(gui)方(fang)程(cheng)式(shi)，將樣品的O.D.值(zhi)代入方(fang)程(cheng)式(shi)，計算出樣品濃(nong)度(du)，再乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數，即為(wei)樣品的實際(ji)濃(nong)度(du)。

 特(te)異性(xing)

本試(shi)劑(ji)盒(he)用於(yu)檢(jian)測兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)，經檢測與其(qi)它(ta)相(xiang)似(si)物質無(wu)明顯交(jiao)叉(cha)反應(ying)。

由於(yu)受(shou)到技(ji)術(shu)及樣本(ben)來源的限制(zhi)，不(bu)可能完(wan)成對(dui)所(suo)有(you)相(xiang)關(guan)或相(xiang)似(si)物質交(jiao)叉(cha)反應(ying)檢測，因(yin)此本試(shi)劑(ji)盒(he)有(you)可能與未(wei)經檢測的其(qi)它(ta)物質有(you)交(jiao)叉(cha)反應(ying)。

 精密(mi)度(du)

精密(mi)度(du)用樣品測定(ding)值(zhi)的變異系數CV表(biao)示(shi)。CV(%) = SD/mean×100

批內差(cha)：取同(tong)批次試(shi)劑(ji)盒(he)對低(di)、中、高(gao)值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本(ben)進(jin)行定(ding)量(liang)檢測,每(mei)份(fen)樣本(ben)連續(xu)測定(ding)20 次，分別(bie)計算不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的平(ping)均(jun)值(zhi)及SD值(zhi)。

批間(jian)差(cha)：選取3個(ge)不同(tong)批次的試(shi)劑(ji)盒(he)分別(bie)對低(di)、中、高(gao)值(zhi)定(ding)值(zhi)樣本(ben)進(jin)行定(ding)量(liang)測定(ding)，每(mei)個(ge)樣本(ben)使用(yong)同(tong)壹試(shi)劑(ji)盒(he)重復測定(ding)8次，分別(bie)計算不(bu)同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的平(ping)均(jun)值(zhi)及SD值(zhi)。

批內差(cha)： CV<10%

批間(jian)差(cha)： CV<12%

兔結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)生長(chang)因(yin)子(zi)(CTGF)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)穩定(ding)性(xing)

經測定(ding)，試(shi)劑(ji)盒(he)在(zai)有(you)效期內按推(tui)薦溫(wen)度(du)保存，其(qi)活性(xing)降低率小於(yu)5%。

為減(jian)小外(wai)部因(yin)素對試(shi)劑(ji)盒(he)破壞(huai)前後檢(jian)測值(zhi)的影響(xiang)，實(shi)驗室(shi)的環(huan)境條(tiao)件需盡量保持壹致(zhi)，尤(you)其(qi)是實(shi)驗室(shi)內溫度(du)、濕度(du)及溫育(yu)條(tiao)件。其(qi)次由同(tong)壹實(shi)驗員來進行操作可減少(shao)人為(wei)誤(wu)差(cha)。