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96T 僅(jin)供(gong)體外(wai)研(yan)究(jiu)使(shi)用,不用於臨(lin)床診斷(duan)!
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒
本試(shi)劑盒運(yun)用雙(shuang)抗體夾心(xin)ELISA法定(ding)量(liang)測定(ding)小鼠(shu)血清、血漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)、細胞(bao)裂解液(ye)、細胞(bao)培(pei)養上(shang)清液(ye)和其(qi)他(ta)生(sheng)物液(ye)體中小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)含(han)量(liang)。
檢(jian)測範圍
0.156-10ng/mL
*低(di)檢(jian)測限
0.051ng/mL
實(shi)驗(yan)原理(li)
將(jiang)小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)抗(kang)體包被於96孔微孔板(ban)中,制成(cheng)固相載(zai)體,向微(wei)孔中分(fen)別加入標準(zhun)品或(huo)標(biao)本,其中的(de)小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)與(yu)連接(jie)於(yu)固相載(zai)體上(shang)的抗(kang)體結(jie)合,然後加入(ru)生(sheng)物素化的(de)小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)抗(kang)體,將(jiang)未結(jie)合的生(sheng)物素化抗(kang)體洗(xi)凈(jing)後,加入(ru)HRP標(biao)記的親和(he)素,再次(ci)徹(che)底(di)洗(xi)滌(di)後加入(ru)TMB底(di)物顯色。TMB在(zai)過(guo)氧化物酶(mei)的催化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色,並在酸(suan)的作用下轉(zhuan)化(hua)成(cheng)*終(zhong)的黃色。顏(yan)色的深(shen)淺(qian)和樣品中的(de)小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)呈正(zheng)相關。用酶(mei)標儀(yi)在450nm波(bo)長下測定(ding)吸光度(O.D.值),計(ji)算(suan)樣品濃度(du)。
試(shi)劑盒內(nei)容
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試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數(shu)量(liang) |
試(shi)劑名(ming)稱(cheng) |
數(shu)量(liang) |
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96孔板(ban)(預包被) |
1 |
96孔板(ban)覆膜(mo) |
2 |
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標(biao)準(zhun)品 |
0.5ml×1 |
標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye) |
1.5ml×1瓶(ping) |
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顯色劑(ji)A液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
樣品稀釋液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
|
顯色劑(ji)B液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
終(zhong)止(zhi)液(ye) |
6ml×1瓶(ping) |
|
酶(mei)標試(shi)劑 |
6ml×1瓶(ping) |
密(mi)封袋 |
1 |
|
濃(nong)洗(xi)滌液(ye)(30×) |
1×20mL |
使(shi)用說(shuo)明(ming)書(shu) |
1 |
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒需自備的設(she)備及試(shi)劑
1. 450±10nm濾光片的(de)酶(mei)標儀(yi)(建議(yi)儀(yi)器(qi)使(shi)用前提前預熱)
2. 單道(dao)或(huo)多(duo)道(dao)微量(liang)加(jia)液(ye)器(qi)及吸頭
3. 稀(xi)釋樣品的EP管(guan)
4. 蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水
5. 吸水紙(zhi)
6. 盛放(fang)洗(xi)液(ye)的容(rong)器(qi)
試(shi)劑盒的(de)儲存及(ji)有(you)效期
1. 未開(kai)封的試(shi)劑盒:所(suo)有(you)試(shi)劑均(jun)按(an)試(shi)劑瓶標(biao)簽(qian)上(shang)所示(shi)保存。請註(zhu)意,收(shou)到試(shi)劑盒後請盡(jin)快將(jiang)TMB 洗滌(di)液(ye),終止(zhi)液(ye)保存(cun)於4℃,其他(ta)試(shi)劑保存(cun)於-20℃。
2. 使(shi)用後的試(shi)劑盒:剩余(yu)試(shi)劑仍需按照(zhao)試(shi)劑瓶標(biao)簽(qian)所示(shi)的溫度保(bao)存,開(kai)封後的酶(mei)標板(ban)要加(jia)幹燥(zao)劑(ji)後密封保存(cun)於-20℃,避(bi)免潮(chao)濕(shi)。
註(zhu)意:
試(shi)劑盒內(nei)酶(mei)標條(tiao)可(ke)拆卸(xie),按實(shi)驗(yan)需求可分(fen)多(duo)次(ci)使(shi)用;使(shi)用後的剩余(yu)試(shi)劑盒建議(yi)在(zai)**實(shi)驗(yan)後 1個月(yue)內(nei)使(shi)用完(wan)畢。產(chan)品過期(qi)時(shi)間以(yi)盒子(zi)上(shang)的標(biao)簽(qian)為準(zhun),保(bao)質(zhi)期內(nei)所有(you)組(zu)分都(dou)確保(bao)是穩(wen)定(ding)的。
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒標(biao)本的采(cai)集(ji)與保存(cun)
1. 血(xue)清(qing):
將(jiang)收(shou)集(ji)於血清分(fen)離(li)管(guan)的(de)全血(xue)標(biao)本在室(shi)溫放(fang)置(zhi) 2 小時(shi)或(huo) 4oC 過(guo)夜,然後 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong),取上(shang)清即(ji)可,或(huo)將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
2. 血(xue)漿(jiang):
用 EDTA 或(huo)肝(gan)素作為抗(kang)凝(ning)劑(ji)采(cai)集(ji)標本,並將(jiang)標本在采(cai)集(ji)後的 30 分(fen)鐘(zhong)內於 2-8oC 1000×g 離(li)心(xin) 15 分(fen)鐘(zhong),取上(shang)清即(ji)可檢(jian)測,或(huo)將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
3. 組(zu)織(zhi)勻漿(jiang):
1) 取(qu)適量(liang)組(zu)織(zhi)塊,於預冷(leng)PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清(qing)洗(xi)去(qu)除(chu)血液(ye),稱(cheng)重後備用(組(zu)織(zhi)塊較(jiao)大(da)需先(xian)剪(jian)碎(sui)後再勻漿(jiang));
2) 可(ke)同(tong)時(shi)選用多(duo)種(zhong)勻漿(jiang)方法(fa)達到較(jiao)好的(de)破碎(sui)效果(guo):首(shou)先(xian)將(jiang)組(zu)織(zhi)塊移(yi)入玻(bo)璃(li)勻漿(jiang)器(qi),加入5-10mL 預冷(leng)PBS 進(jin)行充(chong)分研(yan)磨(mo),該過程(cheng)需在冰(bing)上(shang)進(jin)行(有(you)條(tiao)件(jian)實驗(yan)室(shi)可選(xuan)用機器(qi)勻漿(jiang));得到的勻漿(jiang)液(ye)可再(zai)利用超聲破碎(sui)或(huo)反(fan)復(fu)凍融(rong) 進(jin)壹步處理(超(chao)聲破碎(sui)過(guo)程(cheng)中註(zhu)意冰(bing)浴(yu)降(jiang)溫;反復(fu)凍融(rong)法可(ke)重(zhong)復(fu)2 次(ci))。
3) 將(jiang)制備好的(de)勻漿(jiang)液(ye)於5000×g 離(li)心(xin)5 分(fen)鐘(zhong),留取(qu)上(shang)清即(ji)可檢(jian)測。
4. 細胞(bao)裂解液(ye):
1)貼壁細胞(bao)需要先(xian)用胰酶(mei)消化(hua),離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細胞(bao)(懸(xuan)浮細胞(bao)可(ke)直(zhi)接離(li)心(xin)收(shou)集(ji));
2)將(jiang)收(shou)集(ji)到的細胞(bao)用冷(leng)PBS 洗3 次(ci);
3)物理方法(fa)裂解細胞(bao)(可(ke)先(xian)超(chao)聲(sheng)破碎(sui)細胞(bao),再(zai)反復(fu)凍融(rong)):
i 超(chao)聲(sheng)破碎(sui):取(qu)適量(liang)PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao),用壹定(ding)功(gong)率的(de)超聲(sheng)波(bo)處理細胞(bao)懸(xuan)液(ye),使(shi)細胞(bao)急(ji)劇震蕩破裂。
ii 反(fan)復(fu)凍融(rong):將(jiang)待破碎(sui)的(de)細胞(bao)在(zai)-20 oC 以(yi)下(xia)冰(bing)凍,室(shi)溫融(rong)解,反(fan)復(fu)3 次(ci),使(shi)細胞(bao)溶(rong)脹破碎(sui)。
4)將(jiang)標本於2-8 oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong),收(shou)集(ji)上(shang)清備用。
5. 細胞(bao)培(pei)養上(shang)清或(huo)其(qi)它生(sheng)物標本:
請 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong),取上(shang)清即(ji)可檢(jian)測,或(huo)將(jiang)上(shang)清置(zhi)於-20oC 或(huo)-80oC 保(bao)存,但應避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
註(zhu)意:
1. 以(yi)上(shang)標本均(jun)需密封保存(cun),4oC保(bao)存(cun)應小於(yu)1周,-20oC不應超過(guo)1個月(yue),-80oC不(bu)應超過(guo)2個月(yue)。
2. 標(biao)本使(shi)用前應緩慢(man)均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫,不應加熱使(shi)之融(rong)解。
3. 實(shi)驗(yan)前紅(hong)細胞(bao)裂解液(ye)必須用標準(zhun)品稀釋液(ye)稀釋。
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒試(shi)劑準(zhun)備
1. 使(shi)用前將(jiang)所有(you)的試(shi)劑和標(biao)本緩慢(man)均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫(18-25oC),試(shi)劑不能(neng)直(zhi)接在37oC溶解。
2. 標(biao)準(zhun)品(凍幹品):每(mei)瓶標準(zhun)品加入(ru)標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye)1mL,蓋(gai)好後室(shi)溫靜(jing)置(zhi)大(da)約10分(fen)鐘,同(tong)時(shi)反復(fu)顛(dian)倒(dao)/搓動(dong)以助(zhu)溶解,其(qi)濃度(du)為(wei)10ng/mL。準(zhun)備7個稀(xi)釋標準(zhun)品的EP管(guan),每(mei)個EP管中加(jia)入(ru)150μL的標(biao)準(zhun)品稀釋液(ye),如(ru)圖(tu)所示依(yi)次(ci)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋成(cheng)不(bu)同(tong)的梯(ti)度, 標準(zhun)品稀釋液(ye)(0pg/mL)直(zhi)接作為空(kong)白孔。為保(bao)證(zheng)實驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效性,每(mei)次(ci)實(shi)驗(yan)請使(shi)用新的標準(zhun)品溶液(ye)。
3. 濃(nong)洗(xi)滌液(ye):用580mL蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水將(jiang)20mL濃(nong)洗(xi)滌液(ye)稀釋至600mL,進(jin)行30倍(bei)稀釋。
標(biao)本處理
1. 本公司只對試(shi)劑盒本身(shen)負(fu)責(ze),不(bu)對因(yin)使(shi)用該試(shi)劑盒所(suo)造成(cheng)的(de)樣本消耗負(fu)責(ze),請使(shi)用者(zhe)使(shi)用前充分考(kao)慮(lv)到樣本的可(ke)能(neng)使(shi)用量(liang),預留(liu)充(chong)足的(de)樣本。
2. 實(shi)驗(yan)前應預測標本含(han)量(liang),如(ru)果(guo)標(biao)本濃度(du)過(guo)高,應對標(biao)本進(jin)行稀(xi)釋,使(shi)稀(xi)釋後的標(biao)本符合試(shi)劑盒的(de)檢(jian)測範圍,計(ji)算(suan)時(shi)再乘(cheng)以相應的稀(xi)釋倍數(shu)。
3. 若(ruo)所(suo)檢(jian)樣本不包含(han)在(zai)說(shuo)明(ming)書(shu)所(suo)列樣本之中,建議(yi)進(jin)行預實(shi)驗(yan)驗證(zheng)其有(you)效性,並註意留(liu)存(cun)樣本。
4. 使(shi)用化學裂解液(ye)制備的組(zu)織(zhi)勻漿(jiang)或(huo)細胞(bao)提取液(ye)可能(neng)會(hui)由(you)於某些化(hua)學物質(zhi)的引入導致 ELISA實驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。
5. 若(ruo)樣本為細胞(bao)培(pei)養上(shang)清,因(yin)該類樣本幹擾因(yin)素 較(jiao)多(duo),如(ru):細胞(bao)狀態、細胞(bao)數(shu)量(liang)、采(cai)樣時(shi)間等(deng),所以(yi)可能(neng)存在檢(jian)測不出(chu)的情(qing)況。
6. 某(mou)些(xie)天(tian)然蛋白或(huo)重(zhong)組(zu)蛋白,包括原(yuan)核(he)及真(zhen)核重組(zu)蛋白,可能(neng)因(yin)為與本產品所使(shi)用的檢(jian)測抗體及(ji)捕(bu)獲抗體不(bu)匹(pi)配,而(er)不(bu)被檢(jian)測出(chu)。
7. 建議(yi)使(shi)用新鮮樣本,保存(cun)時(shi)間過(guo)長可(ke)能(neng)會(hui)存在蛋白降(jiang)解或(huo)變性導致實驗(yan)結(jie)果(guo)偏(pian)差(cha)。
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒操(cao)作步驟(zhou)
1. 加(jia)樣:分別設空(kong)白孔(空(kong)白對照(zhao)孔不加(jia)樣品及酶(mei)標試(shi)劑,其余(yu)各步操(cao)作相同(tong))、標準(zhun)孔、待測樣品孔。在酶(mei)標包被板(ban)上(shang)標準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣50μl,待測樣品孔中先(xian)加(jia)樣品稀釋液(ye)40μl,然後再加(jia)待(dai)測樣品10μl(樣品*終稀(xi)釋度為(wei)5倍)。加(jia)樣將(jiang)樣品加於(yu)酶(mei)標板(ban)孔底部(bu),盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔壁,輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻。
2. 溫育:用封板(ban)膜封板(ban)後置37℃溫育30分(fen)鐘。
3. 配(pei)液(ye):將(jiang)20倍濃(nong)縮(suo)洗滌(di)液(ye)用蒸餾(liu)水20倍稀(xi)釋後備用
4. 洗(xi)滌(di):小心(xin)揭掉封板(ban)膜,棄(qi)去(qu)液(ye)體,甩(shuai)幹(gan),每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye),靜(jing)置(zhi)30秒後棄去(qu),如(ru)此重復(fu)5次(ci),拍幹(gan)。
5. 加(jia)酶(mei):每(mei)孔加入(ru)酶(mei)標試(shi)劑50μl,空(kong)白孔除外(wai)。
6. 溫育:操(cao)作同(tong)3。
7. 洗(xi)滌(di):操(cao)作同(tong)5。
8. 顯色:每(mei)孔先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl,再(zai)加入顯色劑(ji)B50μl,輕(qing)輕震蕩混(hun)勻,37℃避光(guang)顯色15分(fen)鐘(zhong).
9. 終(zhong)止(zhi):每(mei)孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl,終止(zhi)反應(此時(shi)藍色立(li)轉(zhuan)黃色)。
10. 測定(ding):以空(kong)白空(kong)調零,450nm波(bo)長(chang)依序(xu)測量(liang)各(ge)孔的吸光度(OD值)。 測定(ding)應在加(jia)終止(zhi)液(ye)後15分鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行。
註(zhu)意:
1. 試(shi)劑準(zhun)備:準(zhun)備壹次(ci)實(shi)驗(yan)所(suo)需要的酶(mei)標條(tiao),其(qi)它的可(ke)從微(wei)孔板(ban)上(shang)拆下(xia),密封,按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)要(yao)求保存(cun),以備下次(ci)使(shi)用。
2. 加(jia)樣:實(shi)驗(yan)操(cao)作中請使(shi)用壹次(ci)性的(de)吸頭,避免交(jiao)叉汙(wu)染。加(jia)樣時(shi)註意不(bu)要(yao)有(you)氣(qi)泡(pao),將(jiang)樣品加於(yu)酶(mei)標板(ban)底部(bu),盡(jin)量(liang)不(bu)觸及孔壁,輕輕(qing)晃(huang)動(dong)混勻。加樣或(huo)加(jia)試(shi)劑時(shi),**個孔與*後壹個孔加樣之間(jian)的時(shi)間間(jian)隔如(ru)果(guo)太(tai)大(da),將(jiang)會(hui)導致不同(tong)的“預溫育”時(shi)間,從而(er)明(ming)顯地影響(xiang)到測量(liang)值(zhi)的(de)準(zhun)確(que)性及(ji)重(zhong)復(fu)性。因(yin)此,壹次(ci)加(jia)樣時(shi)間(包括標(biao)準(zhun)品及所(suo)有(you)樣品)*好控(kong)制在10分鐘內(nei)。推薦(jian)設(she)置復(fu)孔進(jin)行實(shi)驗。
3. 溫育:為(wei)防(fang)止樣品蒸發,實(shi)驗(yan)時(shi)請將(jiang)加上(shang)蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜的(de)酶(mei)標板(ban)置於(yu)濕(shi)盒(he)內,以(yi)避(bi)免液(ye)體蒸(zheng)發,洗(xi)板(ban)後應盡(jin)快進(jin)行下(xia)步操(cao)作,任(ren)何時(shi)侯都應避免酶(mei)標板(ban)處於幹(gan)燥(zao)狀態,同(tong)時(shi)應嚴格遵(zun)守給定(ding)的溫育時(shi)間和(he)溫度。
4. 洗(xi)滌(di):充(chong)分(fen)的洗(xi)滌非(fei)常重要(yao),在(zai)每(mei)次(ci)洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中,都(dou)要(yao)將(jiang)洗滌(di)液(ye)完(wan)全甩(shuai)幹(gan)。洗(xi)滌(di)過(guo)程(cheng)中反(fan)應孔中殘(can)留的(de)洗滌(di)液(ye)應在濾紙(zhi)上(shang)拍幹(gan),勿將(jiang)濾紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入(ru)反(fan)應孔中吸水,同(tong)時(shi)要消(xiao)除板(ban)底殘(can)留的(de)液(ye)體和(he)手指(zhi)印(yin),避免影(ying)響(xiang)*後的酶(mei)標儀(yi)讀數(shu)。如(ru)果(guo)有(you)自動(dong)洗板(ban)機,應在熟(shu)練(lian)使(shi)用後再用到正(zheng)式(shi)實 驗(yan)過程(cheng)中。
5. 反(fan)應時(shi)間的(de)控制:加(jia)入(ru)底物後請定(ding)時(shi)觀察反(fan)應孔的顏(yan)色變化(hua)(比(bi)如(ru),每(mei)隔10分(fen)鐘觀(guan)察壹次(ci)),如(ru)顏(yan)色較(jiao)深,請提前加(jia)入(ru)終止液(ye)終止(zhi)反應,避免反(fan)應過強從而(er)影(ying)響(xiang)酶(mei)標儀(yi)光密(mi)度讀數(shu)。
6. 底(di)物:底(di)物請避(bi)光保(bao)存,在(zai)儲存和(he)溫育時(shi)避免強光(guang)直(zhi)接照(zhao)射。
7. 如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)室(shi)內濕(shi)度(du)低於(yu)60%,推薦(jian)使(shi)用加濕(shi)器(qi)提高濕(shi)度(du)水平。
實(shi)驗(yan)流程(cheng)
1. 實(shi)驗(yan)前標(biao)準(zhun)品、試(shi)劑及樣本的準(zhun)備;
2. 加(jia)樣(標準(zhun)品及樣本)50μL,37℃孵(fu)育(yu)30分鐘(zhong);
3. 洗(xi)板(ban)5次(ci),加(jia)酶(mei)標試(shi)劑50ul,37℃孵(fu)育(yu)半(ban)小時(shi);
4. 洗(xi)板(ban)5次(ci);加(jia)入(ru)顯色液(ye)A,B各50ul,37℃孵(fu)育(yu)顯色15分(fen)鐘(zhong)
5. 加(jia)終(zhong)止液(ye)50μL,立即(ji)450nm讀數(shu)。
6. 計(ji)算(suan)
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒計(ji)算(suan)
各(ge)標(biao)準(zhun)品及樣本O.D.值扣(kou)除(chu)空(kong)白孔O.D.值後作圖(tu)(七點圖(tu)),如(ru)設(she)置(zhi)復(fu)孔,則應取其(qi)平均(jun)值(zhi)計(ji)算(suan)。以(yi)標(biao)準(zhun)品的濃(nong)度(du)為縱(zong)坐標(biao)(或(huo)對數(shu)坐標(biao)),O.D.值(zhi)為(wei)橫(heng)坐標(biao)(或(huo)對數(shu)坐標(biao)),繪出(chu)標準(zhun)曲(qu)線(*佳(jia)方(fang)程(cheng)式(shi)應依回(hui)歸(gui)方程(cheng)計(ji)算(suan)的(de)R2值(zhi)來定(ding),以R2值越(yue)趨近(jin)於(yu)1為好(hao))。推薦(jian)使(shi)用專業(ye)制作曲(qu)線軟件(jian)進(jin)行分(fen)析,如(ru)curve expert 1.30,根(gen)據樣品O.D.值,由(you)標準(zhun)曲(qu)線查(zha)出(chu)相應的濃(nong)度,乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍數(shu);或(huo)用標準(zhun)物的濃度(du)與(yu)O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標準(zhun)曲(qu)線的回(hui)歸(gui)方程(cheng)式(shi),將(jiang)樣品的O.D.值(zhi)代入方程(cheng)式(shi),計(ji)算(suan)出(chu)樣品濃度(du),再(zai)乘以稀(xi)釋倍數(shu),即(ji)為樣品的實(shi)際濃度。
特異性
本試(shi)劑盒用於檢(jian)測小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A),經檢(jian)測與其它相似(si)物質(zhi)無明顯交(jiao)叉反應。
由(you)於受(shou)到技術及樣本來源(yuan)的(de)限制,不可能(neng)完(wan)成(cheng)對所(suo)有(you)相關或(huo)相似(si)物質(zhi)交(jiao)叉反應檢(jian)測,因(yin)此本試(shi)劑盒有(you)可能(neng)與未經檢(jian)測的其它物質(zhi)有(you)交(jiao)叉反應。
精密度
精密度用樣品測定(ding)值的變異(yi)系(xi)數(shu)CV表示(shi)。CV(%) = SD/mean×100
批內差(cha):取(qu)同(tong)批次(ci)試(shi)劑盒對低(di)、中、高(gao)值(zhi)定(ding)值樣本進(jin)行定(ding)量(liang)檢(jian)測,每(mei)份(fen)樣本連續(xu)測定(ding)20 次(ci),分(fen)別計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃度(du)樣本的平(ping)均(jun)值(zhi)及SD值。
批間差(cha):選(xuan)取3個不(bu)同(tong)批次(ci)的(de)試(shi)劑盒分(fen)別對低(di)、中、高(gao)值(zhi)定(ding)值樣本進(jin)行定(ding)量(liang)測定(ding),每(mei)個樣本使(shi)用同(tong)壹試(shi)劑盒重(zhong)復(fu)測定(ding)8次(ci),分(fen)別計(ji)算(suan)不(bu)同(tong)濃度(du)樣本的平(ping)均(jun)值(zhi)及SD值。
批內差(cha): CV<10%
批間差(cha): CV<12%
小鼠(shu)107kDa肌醇多(duo)聚(ju)磷酸(suan)-4-磷酸(suan)酶(mei)Ⅰ型(INPP4A)ELISA試(shi)劑盒穩(wen)定(ding)性
經測定(ding),試(shi)劑盒在(zai)有(you)效期內按推薦(jian)溫度保(bao)存,其(qi)活性降(jiang)低率小於(yu)5%。
為(wei)減(jian)小外(wai)部因(yin)素對試(shi)劑盒破壞(huai)前(qian)後檢(jian)測值的影響(xiang),實驗室(shi)的環(huan)境(jing)條(tiao)件(jian)需盡(jin)量(liang)保(bao)持(chi)壹致,尤(you)其(qi)是(shi)實(shi)驗室(shi)內溫度、濕(shi)度(du)及溫育條(tiao)件(jian)。其次(ci)由(you)同(tong)壹實驗員來(lai)進(jin)行操(cao)作可減(jian)少(shao)人為誤(wu)差(cha)。



