產(chan)品(pin)名(ming)稱(cheng)：小(xiao)鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)

                                                       96T       僅(jin)供體(ti)外研究使用(yong)，不用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)!

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)

本試劑(ji)盒(he)運用(yong)雙抗體(ti)夾心(xin)ELISA法(fa)定(ding)量(liang)測定小鼠(shu)血清(qing)、血漿(jiang)、組織(zhi)勻漿(jiang)、細(xi)胞裂解液(ye)、細(xi)胞培(pei)養(yang)上清(qing)液(ye)和(he)其(qi)他(ta)生物液體(ti)中小(xiao)鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)含量(liang)。

 檢測範(fan)圍

1.563-100ng/mL

 *低檢測限

0.65ng/mL

 實驗原(yuan)理(li)

將(jiang)小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)抗體(ti)包被於96孔(kong)微(wei)孔(kong)板中(zhong)，制(zhi)成固(gu)相載體(ti)，向微(wei)孔(kong)中(zhong)分(fen)別加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)或(huo)標(biao)本(ben)，其(qi)中(zhong)的小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)與連接於固(gu)相載體(ti)上的抗體(ti)結合(he)，然(ran)後加(jia)入(ru)生物素化的小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)抗體(ti)，將(jiang)未(wei)結合的生物素化抗體(ti)洗凈(jing)後，加(jia)入(ru)HRP標(biao)記的親和(he)素(su)，再(zai)次(ci)徹底洗滌後加(jia)入(ru)TMB底物顯色。TMB在過(guo)氧(yang)化物酶的催(cui)化下(xia)轉化成藍色，並在(zai)酸(suan)的作用(yong)下(xia)轉化成*終的黃色。顏色的深(shen)淺和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)的小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)呈正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在450nm波長(chang)下(xia)測定吸(xi)光(guang)度(du)(O.D.值(zhi))，計(ji)算(suan)樣品(pin)濃(nong)度(du)。

 試劑(ji)盒(he)內容

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)需(xu)自備(bei)的設備(bei)及(ji)試劑(ji)

1.         450±10nm濾光(guang)片的酶標(biao)儀(yi)(建議(yi)儀(yi)器使用(yong)前(qian)提前(qian)預熱(re))

2.         單道(dao)或(huo)多道微(wei)量加(jia)液(ye)器及吸(xi)頭(tou)

3.         稀釋(shi)樣(yang)品(pin)的EP管(guan)

4.         蒸餾水或(huo)去離(li)子(zi)水

5.         吸(xi)水紙

6.         盛放洗液(ye)的容器

 試劑(ji)盒(he)的儲存及(ji)有(you)效(xiao)期

1.         未開封(feng)的試劑(ji)盒(he)：所有試劑(ji)均按試劑(ji)瓶標(biao)簽(qian)上(shang)所示保存。請(qing)註意(yi)，收(shou)到(dao)試劑(ji)盒(he)後請(qing)盡(jin)快(kuai)將(jiang)TMB 洗滌液(ye)，終止(zhi)液保存於4℃，其他(ta)試劑(ji)保存於-20℃。

2.         使用(yong)後的試劑(ji)盒(he)：剩余(yu)試劑(ji)仍需(xu)按照試劑(ji)瓶標(biao)簽(qian)所示的溫度(du)保存，開封(feng)後的酶標(biao)板要(yao)加(jia)幹燥劑(ji)後密(mi)封(feng)保存於-20℃，避(bi)免潮(chao)濕(shi)。

註意(yi)：

試劑(ji)盒(he)內酶標(biao)條(tiao)可(ke)拆卸，按實驗需(xu)求(qiu)可(ke)分(fen)多次(ci)使用(yong)；使用(yong)後的剩余試劑(ji)盒(he)建議(yi)在(zai)**實(shi)驗後 1個月內使用(yong)完(wan)畢。產(chan)品(pin)過(guo)期(qi)時間(jian)以(yi)盒(he)子(zi)上的標(biao)簽(qian)為(wei)準(zhun)，保質期內所有組分(fen)都(dou)確保是穩(wen)定(ding)的。

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)標(biao)本(ben)的采集(ji)與保存

1.         血清(qing)：

將(jiang)收(shou)集(ji)於血清(qing)分(fen)離(li)管(guan)的全(quan)血標(biao)本(ben)在(zai)室(shi)溫放置 2 小時或(huo) 4^oC 過夜，然後 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復凍(dong)融(rong)。

2.         血漿(jiang)：

用(yong) EDTA 或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為抗(kang)凝劑(ji)采集(ji)標(biao)本(ben)，並(bing)將(jiang)標(biao)本(ben)在(zai)采集(ji)後的 30 分鐘內於 2-8^oC 1000×g 離(li)心(xin) 15 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復凍(dong)融(rong)。

3. 組織(zhi)勻漿(jiang)：

1） 取(qu)適(shi)量組織(zhi)塊(kuai)，於預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清(qing)洗去(qu)除(chu)血液(ye)，稱(cheng)重(zhong)後備(bei)用(yong)（組織(zhi)塊(kuai)較(jiao)大(da)需(xu)先(xian)剪(jian)碎(sui)後再(zai)勻(yun)漿）；

2） 可同(tong)時選用(yong)多種(zhong)勻漿方(fang)法(fa)達(da)到(dao)較(jiao)好(hao)的破碎(sui)效(xiao)果：首(shou)先(xian)將(jiang)組織(zhi)塊(kuai)移(yi)入(ru)玻(bo)璃勻(yun)漿器(qi)，加(jia)入(ru)5-10mL 預冷PBS 進行(xing)充分研磨，該(gai)過程需(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)進行（有條(tiao)件實(shi)驗室(shi)可選用(yong)機(ji)器勻漿(jiang)）；得到的勻漿液(ye)可(ke)再(zai)利(li)用(yong)超(chao)聲破碎(sui)或(huo)反復凍(dong)融(rong) 進(jin)壹步處理(li)（超(chao)聲破碎(sui)過程中(zhong)註意(yi)冰(bing)浴(yu)降(jiang)溫；反復凍(dong)融(rong)法(fa)可(ke)重(zhong)復2 次(ci)）。

3） 將(jiang)制(zhi)備(bei)好(hao)的勻漿液(ye)於5000×g 離(li)心(xin)5 分(fen)鐘(zhong)，留取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測。

4. 細(xi)胞裂解液(ye)：

1）貼(tie)壁細(xi)胞需(xu)要(yao)先(xian)用(yong)胰酶(mei)消(xiao)化，離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細(xi)胞（懸浮細(xi)胞可直接離(li)心(xin)收(shou)集(ji)）；

2）將(jiang)收(shou)集(ji)到的細(xi)胞用(yong)冷PBS 洗3 次(ci)；

3）物理(li)方(fang)法(fa)裂解細(xi)胞（可先(xian)超(chao)聲破碎(sui)細(xi)胞，再(zai)反(fan)復凍(dong)融(rong)）：

i 超(chao)聲破碎(sui)：取(qu)適(shi)量PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，用(yong)壹定功率(lv)的超(chao)聲波處理(li)細(xi)胞懸液，使細(xi)胞急劇震蕩(dang)破裂。

ii 反復凍(dong)融(rong)：將(jiang)待破碎(sui)的細(xi)胞在-20 ^oC 以下(xia)冰(bing)凍(dong)，室溫融(rong)解，反(fan)復3 次(ci)，使細(xi)胞溶(rong)脹(zhang)破碎(sui)。

4）將(jiang)標(biao)本(ben)於2-8 ^oC 1500×g 離(li)心(xin)10 分(fen)鐘(zhong)，收集(ji)上清(qing)備(bei)用(yong)。

5. 細(xi)胞培(pei)養(yang)上清(qing)或(huo)其它生物標(biao)本(ben)：

請(qing) 1000×g 離(li)心(xin) 20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於-20^oC 或(huo)-80^oC 保存，但應(ying)避(bi)免反(fan)復凍(dong)融(rong)。

註意(yi)：

1.         以上(shang)標(biao)本(ben)均(jun)需(xu)密(mi)封(feng)保存，4^oC保存應小(xiao)於1周，-20^oC不(bu)應超(chao)過(guo)1個月，-80^oC不應(ying)超(chao)過(guo)2個月。

2.         標(biao)本(ben)使用(yong)前(qian)應緩(huan)慢均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫，不應(ying)加(jia)熱(re)使之融(rong)解。

3.         實驗前(qian)紅(hong)細(xi)胞裂解液(ye)必須(xu)用(yong)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋。

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)試劑(ji)準(zhun)備(bei)

1.         使用(yong)前(qian)將(jiang)所有的試劑(ji)和(he)標(biao)本(ben)緩(huan)慢均(jun)衡至(zhi)室(shi)溫(18-25oC)，試劑(ji)不能直接在37oC溶(rong)解。

2.         標(biao)準(zhun)品(pin)(凍幹品(pin))：每(mei)瓶標(biao)準(zhun)品(pin)加(jia)入(ru)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)1mL，蓋好(hao)後室(shi)溫靜置大約(yue)10分(fen)鐘，同(tong)時反復顛倒/搓(cuo)動(dong)以(yi)助(zhu)溶(rong)解，其(qi)濃度(du)為100ng/mL。準(zhun)備(bei)7個稀釋標(biao)準(zhun)品(pin)的EP管(guan)，每(mei)個EP管(guan)中加(jia)入(ru)150μL的標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)，如(ru)圖所示依(yi)次(ci)倍(bei)比(bi)稀(xi)釋成不(bu)同(tong)的梯度(du)， 標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)(0pg/mL)直接作為(wei)空(kong)白(bai)孔(kong)。為(wei)保證(zheng)實驗結(jie)果有(you)效(xiao)性(xing)，每(mei)次(ci)實(shi)驗請(qing)使用(yong)新的標(biao)準(zhun)品(pin)溶(rong)液。

3.         濃洗滌液(ye)：用(yong)580mL蒸餾水或(huo)去離(li)子(zi)水將(jiang)20mL濃洗滌液(ye)稀釋至600mL，進行(xing)30倍(bei)稀(xi)釋。

標(biao)本(ben)處理(li)

1.         本公(gong)司只對(dui)試劑(ji)盒(he)本身負責(ze)，不對(dui)因(yin)使用(yong)該試劑(ji)盒(he)所造成(cheng)的樣本消(xiao)耗(hao)負責(ze)，請(qing)使用(yong)者(zhe)使用(yong)前(qian)充分考慮到(dao)樣(yang)本(ben)的可能使用(yong)量，預留充足的樣本。

2.         實驗前(qian)應預測標(biao)本(ben)含量(liang)，如(ru)果標(biao)本(ben)濃(nong)度(du)過高(gao)，應(ying)對(dui)標(biao)本(ben)進(jin)行(xing)稀(xi)釋，使稀釋(shi)後的標(biao)本(ben)符合(he)試劑(ji)盒(he)的檢測範(fan)圍，計(ji)算(suan)時再(zai)乘(cheng)以(yi)相應的稀釋倍(bei)數(shu)。

3.         若(ruo)所檢樣(yang)本(ben)不包含在(zai)說(shuo)明書(shu)所列樣(yang)本(ben)之中，建(jian)議(yi)進(jin)行(xing)預實驗驗證(zheng)其有(you)效(xiao)性(xing)，並註(zhu)意(yi)留存(cun)樣本。

4.         使用(yong)化學裂解液(ye)制備(bei)的組織(zhi)勻漿(jiang)或(huo)細(xi)胞提取(qu)液可(ke)能會(hui)由於某些(xie)化學物質的引入導(dao)致(zhi)  ELISA實(shi)驗結(jie)果偏(pian)差。

5.         若(ruo)樣(yang)本為(wei)細(xi)胞培(pei)養(yang)上清(qing)，因(yin)該(gai)類(lei)樣本(ben)幹擾因(yin)素(su) 較多，如(ru)：細(xi)胞狀態、細(xi)胞數(shu)量、采樣(yang)時間(jian)等(deng)，所以可(ke)能存在檢測不出的情況。

6.         某些(xie)天(tian)然(ran)蛋白(bai)或(huo)重(zhong)組蛋白(bai)，包括(kuo)原(yuan)核及真核重(zhong)組蛋白(bai)，可(ke)能因為與本產(chan)品(pin)所使用(yong)的檢測抗體(ti)及捕(bu)獲(huo)抗(kang)體(ti)不匹(pi)配(pei)，而(er)不被檢(jian)測出。

7.         建議(yi)使用(yong)新鮮(xian)樣(yang)本(ben)，保存時間(jian)過(guo)長(chang)可能會(hui)存在蛋白(bai)降(jiang)解或(huo)變性(xing)導(dao)致(zhi)實(shi)驗結(jie)果偏(pian)差。

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.         加(jia)樣(yang)：分別設空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包被板上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)準(zhun)確加(jia)樣(yang)50μl，待測樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後再(zai)加(jia)待測樣品(pin)10μl（樣(yang)品(pin)*終(zhong)稀(xi)釋(shi)度(du)為5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶標(biao)板孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。

2.         溫育：用(yong)封(feng)板膜封(feng)板後置37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。  

3.         配液(ye)：將(jiang)20倍(bei)濃(nong)縮(suo)洗滌液(ye)用(yong)蒸餾水20倍(bei)稀(xi)釋後備(bei)用(yong)

4.         洗滌：小(xiao)心揭掉(diao)封(feng)板膜，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液(ye)，靜置30秒(miao)後棄(qi)去(qu)，如(ru)此重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹。

5.         加(jia)酶(mei)：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)。

6.         溫育：操(cao)作(zuo)同(tong)3。

7.         洗滌：操(cao)作同(tong)5。

8.         顯色：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入(ru)顯色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避(bi)光(guang)顯色15分鐘(zhong).

9.         終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此時藍色立(li)轉黃(huang)色）。

10.     測定：以空白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長(chang)依序(xu)測量各(ge)孔(kong)的吸(xi)光(guang)度(du)（OD值(zhi)）。 測定應在加(jia)終(zhong)止(zhi)液後15分(fen)鐘(zhong)以內進行(xing)。

註意(yi)：

1.         試劑(ji)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)壹次(ci)實(shi)驗所需(xu)要(yao)的酶標(biao)條(tiao)，其(qi)它的可從微(wei)孔(kong)板上(shang)拆(chai)下(xia)，密(mi)封(feng)，按照說(shuo)明書(shu)要求(qiu)保存，以備(bei)下(xia)次(ci)使用(yong)。

2.         加(jia)樣(yang)：實驗操(cao)作中(zhong)請(qing)使用(yong)壹次(ci)性(xing)的吸(xi)頭(tou)，避(bi)免交(jiao)叉汙(wu)染。加(jia)樣(yang)時註意(yi)不(bu)要(yao)有氣(qi)泡，將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於酶標(biao)板底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動(dong)混(hun)勻(yun)。加(jia)樣(yang)或(huo)加(jia)試劑(ji)時，**個孔(kong)與*後壹個孔(kong)加(jia)樣(yang)之間(jian)的時間(jian)間(jian)隔如(ru)果太(tai)大，將(jiang)會(hui)導(dao)致(zhi)不(bu)同(tong)的“預溫育”時間(jian)，從而(er)明(ming)顯地影(ying)響到測量值(zhi)的準(zhun)確性(xing)及重(zhong)復性(xing)。因此(ci)，壹次(ci)加(jia)樣(yang)時間(jian)(包括(kuo)標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)所有樣(yang)品(pin))*好(hao)控(kong)制(zhi)在(zai)10分鐘內。推薦設置復孔(kong)進(jin)行(xing)實(shi)驗。

3.          溫育：為防止(zhi)樣品(pin)蒸發(fa)，實(shi)驗時請(qing)將(jiang)加(jia)上(shang)蓋或(huo)覆(fu)膜的酶標(biao)板置於濕盒(he)內，以避(bi)免液(ye)體(ti)蒸發(fa)，洗板後應(ying)盡(jin)快(kuai)進行(xing)下(xia)步(bu)操(cao)作(zuo)，任(ren)何時侯都(dou)應(ying)避(bi)免酶(mei)標(biao)板處於幹燥狀態，同(tong)時應嚴(yan)格遵(zun)守給(gei)定(ding)的溫育時間(jian)和(he)溫度(du)。

4.         洗滌：充分的洗滌非(fei)常(chang)重(zhong)要，在(zai)每(mei)次(ci)洗滌過(guo)程中(zhong)，都(dou)要(yao)將(jiang)洗滌液(ye)完(wan)全(quan)甩幹。洗滌過(guo)程中(zhong)反應(ying)孔(kong)中(zhong)殘留的洗滌液(ye)應在濾紙上(shang)拍幹，勿(wu)將(jiang)濾(lv)紙直接放入(ru)反應孔(kong)中(zhong)吸(xi)水，同(tong)時要消(xiao)除(chu)板底(di)殘留的液體(ti)和(he)手(shou)指(zhi)印，避(bi)免影(ying)響*後的酶標(biao)儀(yi)讀數(shu)。如(ru)果有(you)自動(dong)洗板機(ji)，應在熟(shu)練使用(yong)後再(zai)用(yong)到正(zheng)式(shi)實(shi) 驗過(guo)程中(zhong)。

5.         反應(ying)時間(jian)的控制：加(jia)入(ru)底物後請(qing)定時觀察(cha)反(fan)應孔(kong)的顏色變化(比(bi)如(ru)，每(mei)隔10分鐘觀察(cha)壹次(ci))，如(ru)顏色較深(shen)，請(qing)提前(qian)加(jia)入(ru)終止(zhi)液終止(zhi)反應，避(bi)免反(fan)應(ying)過(guo)強(qiang)從而(er)影(ying)響酶標(biao)儀(yi)光(guang)密度(du)讀數(shu)。

6.         底物：底物請(qing)避(bi)光(guang)保存，在儲(chu)存和(he)溫育時避(bi)免強(qiang)光(guang)直接照射(she)。

7.         如(ru)果實(shi)驗室(shi)內濕度(du)低於60%，推薦使用(yong)加(jia)濕(shi)器提高(gao)濕(shi)度(du)水平。

 實驗流(liu)程

1.         實驗前(qian)標(biao)準(zhun)品(pin)、試劑(ji)及樣(yang)本的準(zhun)備(bei)；

2.         加(jia)樣(yang)（標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)樣(yang)本(ben)）50μL，37℃孵育30分(fen)鐘(zhong)；

3.         洗板5次(ci)，加(jia)酶(mei)標(biao)試劑(ji)50ul，37℃孵育半(ban)小(xiao)時；

4.         洗板5次(ci)；加(jia)入(ru)顯色液A，B各(ge)50ul,37℃孵育顯(xian)色15分鐘(zhong)

5.         加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μL，立(li)即450nm讀數(shu)。

6.    計(ji)算(suan)

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)計(ji)算(suan)

各(ge)標(biao)準(zhun)品(pin)及(ji)樣(yang)本(ben)O.D.值(zhi)扣(kou)除空(kong)白(bai)孔(kong)O.D.值(zhi)後作(zuo)圖(七(qi)點(dian)圖)，如(ru)設置復孔(kong)，則應取(qu)其平(ping)均值(zhi)計(ji)算(suan)。以標(biao)準(zhun)品(pin)的濃度(du)為縱(zong)坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數(shu)坐標(biao))，O.D.值(zhi)為橫(heng)坐(zuo)標(biao)(或(huo)對(dui)數(shu)坐標(biao)），繪(hui)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線(*佳方(fang)程式(shi)應依(yi)回歸(gui)方(fang)程計(ji)算(suan)的R2值(zhi)來定(ding)，以(yi)R2值(zhi)越趨近於1為好(hao))。推薦使用(yong)專業(ye)制(zhi)作(zuo)曲(qu)線軟件進(jin)行(xing)分析(xi)，如(ru)curve expert 1.30，根據樣品(pin)O.D.值(zhi)，由標(biao)準(zhun)曲(qu)線查出相應的濃度(du)，乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)；或(huo)用(yong)標(biao)準(zhun)物的濃度(du)與O.D.值(zhi)計(ji)算(suan)出標(biao)準(zhun)曲(qu)線的回歸(gui)方(fang)程式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的O.D.值(zhi)代入(ru)方(fang)程式(shi)，計(ji)算(suan)出樣(yang)品(pin)濃(nong)度(du)，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)，即為樣(yang)品(pin)的實際濃(nong)度(du)。

 特異(yi)性(xing)

本試劑(ji)盒(he)用(yong)於檢測小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)，經(jing)檢(jian)測與其它(ta)相似(si)物質無明顯交(jiao)叉反應。

由於受到技術(shu)及(ji)樣本(ben)來(lai)源(yuan)的限制(zhi)，不(bu)可能完(wan)成對(dui)所有相關或(huo)相似(si)物質交(jiao)叉反應檢(jian)測，因此本試劑(ji)盒(he)有可(ke)能與未經(jing)檢(jian)測的其它物質有交(jiao)叉反應。

 精密(mi)度(du)

精密(mi)度(du)用(yong)樣品(pin)測定值(zhi)的變異(yi)系(xi)數(shu)CV表示。CV(%) = SD/mean×100

批內差：取(qu)同(tong)批次(ci)試劑(ji)盒(he)對(dui)低、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣本(ben)進(jin)行(xing)定量檢(jian)測,每(mei)份樣(yang)本(ben)連續(xu)測定20 次(ci)，分(fen)別計(ji)算(suan)不同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的平均值(zhi)及SD值(zhi)。

批間(jian)差：選取(qu)3個不同(tong)批次(ci)的試劑(ji)盒(he)分別對(dui)低、中、高(gao)值(zhi)定值(zhi)樣本(ben)進(jin)行(xing)定量測定，每(mei)個樣本使用(yong)同(tong)壹試劑(ji)盒(he)重(zhong)復測定8次(ci)，分(fen)別計(ji)算(suan)不同(tong)濃(nong)度(du)樣本(ben)的平均值(zhi)及SD值(zhi)。

批內差： CV<10%

批間(jian)差： CV<12%

小鼠(shu)10kDa熱(re)休(xiu)克蛋白(bai)1(HSP10)ELISA試劑(ji)盒(he)穩定(ding)性(xing)

經(jing)測定，試劑(ji)盒(he)在有(you)效(xiao)期內按推薦溫度(du)保存，其活(huo)性(xing)降(jiang)低率小(xiao)於5%。

為減小(xiao)外(wai)部因(yin)素(su)對(dui)試劑(ji)盒(he)破壞(huai)前(qian)後檢(jian)測值(zhi)的影(ying)響，實驗室(shi)的環境條(tiao)件需(xu)盡(jin)量保持壹致，尤(you)其(qi)是實(shi)驗室(shi)內溫度(du)、濕度(du)及溫育條(tiao)件。其(qi)次(ci)由同(tong)壹實驗員(yuan)來進(jin)行操(cao)作(zuo)可(ke)減少(shao)人(ren)為誤(wu)差。